納米銀免疫探針的制備與應(yīng)用研究
本文關(guān)鍵詞:納米銀免疫探針的制備與應(yīng)用研究,,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
【摘要】:納米材料具有摩爾消光系數(shù)高、表面增強(qiáng)拉曼散色效應(yīng)強(qiáng)和催化活性好等獨特的物理、化學(xué)性能,因此被廣泛應(yīng)用于生物傳感器和免疫分析檢測等技術(shù)領(lǐng)域。其中,納米金標(biāo)記物已經(jīng)被商品化制成各種試紙條用于免疫分析,納米銀由于制備過程中的穩(wěn)定性問題和修飾過程困難而較少引起關(guān)注。但與納米金相比,納米銀具有更好的熒光增強(qiáng)性能、更好的催化能力,而且制作成本更低廉。因此,我們將對納米銀的合成以及功能化修飾進(jìn)行研究。本文成功實現(xiàn)了納米銀與抗體分子的有效連接,研究并建立了蛋白質(zhì)檢測的可視化分析方法。我們篩選了納米銀合成的各種反應(yīng)條件,合成了粒徑均一且穩(wěn)定的納米銀顆粒并制備了抗體修飾的納米銀探針。利用納米銀的優(yōu)良催化性能,使得顯色液中的金屬離子在納米探針表面產(chǎn)生一層有色金屬殼實現(xiàn)信號的可視化放大,再將芯片掃描使圖像轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的數(shù)據(jù),從而實現(xiàn)對目標(biāo)蛋白的定性或定量檢測。該體系實現(xiàn)了濃度范圍為3.9 μg/mL~500 μg/mL的微量蛋白的可視化檢測,最小檢測濃度為1.95 μg/mL。實驗結(jié)果表明此方法具有檢測范圍寬、催化顯色時間短、成本低等優(yōu)良特性,具有和商品化納米探針一致的優(yōu)良檢測性能。我們制備了一種Au@Ag高效金屬增強(qiáng)熒光的新型納米材料,與僅僅修飾了熒光分子的納米材料相比,熒光強(qiáng)度增強(qiáng)了18倍;谠撔虏牧系男阅芪覀兘⒘艘环N熒光共振能量轉(zhuǎn)移的傳感器。利用鏈霉親和素與生物素之間的相互作用,使得修飾了生物素和熒光素的Au@Ag新材料固定在點制了鏈霉親和素的醛基片上,實現(xiàn)了熒光信號的放大。加入帶有淬滅基團(tuán)的ATP-BHQ后,熒光分子和淬滅分子之間發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移,使得熒光信號發(fā)生淬滅。繼續(xù)加入ATP后與淬滅分子相互作用,使得淬滅分子離開傳感器,熒光得到恢復(fù),從而實現(xiàn)傳感器的熒光由低到高的過程。此外,我們利用Au@Ag新材料能放大信號的優(yōu)點,使其應(yīng)用與生物小分子的檢測上。實驗結(jié)果表明,當(dāng)濃度為15.6ng/mL-500 ng/mL時,熒光信號強(qiáng)度(F)和濃度的對數(shù)值(logC)存在很好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為:R2=0.984。此外,新探針還可以同時檢測人IgE和PDGF-BB兩種蛋白質(zhì),具有很好的特異性。
【關(guān)鍵詞】:納米銀 納米銀免疫探針 微陣列芯片 催化顯色 Au@Ag新材料 熒光共振能量轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】:南京大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號】:TB383.1;O657.3
【目錄】:
- 中文摘要5-7
- Abstract7-9
- 第一章 緒論9-25
- 1.1 納米銀的制備9-10
- 1.1.1 物理法9
- 1.1.2 化學(xué)法9-10
- 1.1.3 生物法10
- 1.2 納米銀的分類10-12
- 1.2.1 球形納米銀11-12
- 1.2.2 基于納米銀的核殼結(jié)構(gòu)12
- 1.3 納米銀的功能化修飾12-13
- 1.4 基于納米銀獨特光學(xué)性能的應(yīng)用13-17
- 1.4.1 表面增強(qiáng)拉曼散射光譜法14-15
- 1.4.2 納米銀增強(qiáng)熒光15-16
- 1.4.3 熒光能量共振轉(zhuǎn)移FRET16-17
- 1.5 基于納米銀催化性能的應(yīng)用17-18
- 1.5.1 催化顯色分析17-18
- 1.5.2 化學(xué)發(fā)光分析18
- 1.6 基于納米銀電學(xué)性能的應(yīng)用18
- 1.7 展望18-19
- 參考文獻(xiàn)19-25
- 第二章 納米銀可視化探針的制備與應(yīng)用25-36
- 1 前言25
- 2 實驗部分25-28
- 2.1 試劑25-26
- 2.2 儀器26
- 2.3 納米銀的合成26
- 2.4 抗體修飾的納米銀26
- 2.5 分析檢測IgG的催化顯色方法26-28
- 3 結(jié)果與討論28-34
- 3.1 納米銀合成條件的篩選28-29
- 3.2 抗體修飾條件優(yōu)化與篩選29-31
- 3.3 與商品化抗體修飾納米探針進(jìn)行比較31-34
- 4 結(jié)論34
- 參考文獻(xiàn)34-36
- 第三章 基于Au@Ag新型納米材料的應(yīng)用研究36-53
- 1 前言36-37
- 2 實驗部分37-41
- 2.1 材料與試劑37-38
- 2.2 儀器38
- 2.3 納米金(AuNPs)和熒光素修飾的納米金(Au-Cy5)的制備38
- 2.4 核殼結(jié)構(gòu)Au@Ag-Cy5的制備38-39
- 2.5 新探針的修飾制備39
- 2.6 基于Au@Ag的熒光共振能量轉(zhuǎn)移研究39-40
- 2.7 基于Au@Ag在微陣列芯片上分析檢測IgE40-41
- 3 結(jié)果與討論41-49
- 3.1 新型納米材料Au@Ag性質(zhì)檢測41-43
- 3.2 新材料Au@Ag用于熒光能量轉(zhuǎn)移傳感分析43-45
- 3.2.1 核殼厚度AgNO_3濃度的篩選43-44
- 3.2.2 探針修飾條件的優(yōu)化44-45
- 3.3 新材料Au@Ag用于檢測人IgE45-49
- 3.3.1 篩選AgNO_3濃度和MgCl_2濃度45-46
- 3.3.2 篩選PVP含量46-47
- 3.3.3 線性關(guān)系47-48
- 3.3.4 特異性檢測48
- 3.3.5 同時檢測人IgE和PDGF-BB48-49
- 4 結(jié)論49-50
- 參考文獻(xiàn)50-53
- 附錄53-54
- 致謝54-55
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