【摘要】：目的:十六烷基三甲基溴化銨穩(wěn)定的金納米棒(CTAB-stabilized AuNRs)經(jīng)過表面活性劑聚苯乙烯磺酸鈉(PSS)的置換作用,制備出檸檬酸鈉穩(wěn)定的金納米棒(citrate-stabilized Au NRs),并對CTAB-stabilized AuNRs和citrate-stabilized AuNRs的理化特性,包括折射率靈敏度和表面增強(qiáng)拉曼散射(SERS)效應(yīng),進(jìn)行了比較。在此基礎(chǔ)上,對兩種不同表面修飾金納米棒的細(xì)胞毒性進(jìn)行探究。方法:已制備好的CTAB-stabilized AuNRs經(jīng)過PSS兩次置換作用,再用檸檬酸鈉置換取代PSS,從而獲得citrate-stabilized AuNRs;并將CTAB-stabilized AuNRs和citrate-stabilized AuNRs在不同濃度水/甘油混合物中折射率靈敏度(RIS)檢測結(jié)果對比;CTAB-stabilized AuNRs和citrate-stabilized AuNRs的SERS光譜學(xué)理化特性檢測效果對比;進(jìn)一步細(xì)胞實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),加入兩種不同濃度的金納米棒溶液,應(yīng)用CCK-8試劑盒檢測細(xì)胞增值/毒性和流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡的變化。結(jié)果:(1)簡易制備出的citrate-stabilized AuNRs紫外-可見光-近紅外光譜圖形峰貌未見明顯改變的情況下藍(lán)移30nm,CTAB-stabilized AuNRs波長λ為803nm,最終citrate-stabilized AuNRs波長λ為773nm。分別經(jīng)過紫外-可見光-近紅外光譜儀(UV-vis),透射電鏡掃描(TEM),Zeta電位,證實(shí)最終得到的是citrate-stabilized AuNRs;(2)citrate-stabilized AuNRs的縱向局域表面等離子體共振(LSPR)的折射率靈敏度為356 nm/RIU(折射率單位),CTAB穩(wěn)定的AuNRs的折射率靈敏度為204nm/RIU。因此前者理化特性折射率靈敏度優(yōu)于后者;(3)檢測正電荷拉曼分子,citrate-stabilized AuNRs的理化特性SERS強(qiáng)度比球形AuNPs強(qiáng)36倍。相反,CTAB-stabilized AuNRs沒有檢測到的正負(fù)電荷的拉曼信號(hào);(4)針對HUVECs細(xì)胞分別進(jìn)行細(xì)胞毒性及凋亡實(shí)驗(yàn),分別加入不同濃度的CTAB-stabilized AuNRs和citrate-stabilized AuNRs孵育24h,觀察到人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞在citrate-stabilized AuNRs組凋亡比例與正常組沒有明顯差異,CTABstabilized AuNRs組隨著濃度增高凋亡比例有顯著增高,細(xì)胞活性降低。結(jié)論:1)本研究獲得了可操作、可重復(fù)以及可擴(kuò)量優(yōu)化制備的citrate-stabilized AuNRs的優(yōu)化策略。2)citrate-stabilized Au NRs比CTAB-stabilized AuNRs的理化特性更占優(yōu)勢;3)citrate-stabilized AuNRs對細(xì)胞毒性明顯降低,生物相容性增強(qiáng);4)拓展了AuNRs在生物醫(yī)學(xué)及臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的基礎(chǔ)和應(yīng)用價(jià)值。
【圖文】：

其中少量 NaCl 促進(jìn)了帶電 PSS 鏈的展開[19]。40 然后，常溫下孵育1 小時(shí)，9000g 離心 15 分鐘，，并用 80mL 水分散。該處理重復(fù)一次，后經(jīng)20mL 水和 60mL 5mM 檸檬酸鹽孵育 12 小時(shí)，AuNRs 懸浮液再以 9000g 離心 15 分鐘，并用 10mL 水和 30mL5mM 檸檬酸鹽溶液重選。2.2.3 檸檬酸鈉穩(wěn)定的金納米棒和十六烷基三甲基溴化銨穩(wěn)定的金納米棒的表征置換 Citrate-AuNRs 溶液的過程使用紫外-可見光-近紅外光譜儀在300~1200nm 范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，取每次離心后的金棒在 Zeta 電位測定儀上測定電位表征，將檸檬酸鈉穩(wěn)定的金納米棒和十六烷基三甲基溴化銨穩(wěn)定的金納米棒溶液滴加在表面沉積有碳膜的銅網(wǎng)上，自然干燥后進(jìn)行透射電鏡表征。

南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文入 200 μL Binding Buffer 和 10 μL Annexin V，在 4 ℃避光染色 30 min。檢測前每管加入 PI 5 μL，用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。結(jié)果以凋亡細(xì)胞的百分率表示。2.2.7.4 數(shù)據(jù)分析各組數(shù)據(jù)以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差表示，數(shù)據(jù)分析采用GraphPadPrism5軟件進(jìn)行處理，多組數(shù)據(jù)比較采用方差分析(ANOVA)，并進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)；當(dāng)方差分析有顯著差異時(shí)，進(jìn)一步用Dunnett檢驗(yàn)做實(shí)驗(yàn)組與對照組比較，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05，當(dāng)P < 0.05時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：O614.123;TB383.1

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