【摘要】：姜黃素因?yàn)檩^好的生物活性,所以一直備受研究者的關(guān)注。但由于其自身缺陷,很難發(fā)揮其活性作用。構(gòu)建納米載體可以很好的改善姜黃素的水溶性,保護(hù)姜黃素免受環(huán)境以及消化道中的物理化學(xué)作用的破壞。改變細(xì)胞攝取方式,更容易被細(xì)胞攝取。同時可以打破小腸上皮的緊密連接,從而提高姜黃素的生物利用率。不同形狀和不同粒徑的納米粒子的效果也不盡相同。為了改善姜黃素的利用現(xiàn)狀,本論文通過自組裝的作用構(gòu)建了粒徑大小不同的α-乳清蛋白納米球和長短不同的α-乳清蛋白納米管,并包埋姜黃素,將姜黃素納米粒子作用于Caco-2細(xì)胞及細(xì)胞單層,研究細(xì)胞攝取機(jī)制,并探究納米粒子的穿膜作用。本課題包括以下三個方面:1、大小不同的α-乳清蛋白納米球和長短不同的α-乳清蛋白納米管載體的構(gòu)建,與姜黃素的包埋。兩種不同濃度α-乳清蛋白溶液經(jīng)酶解后自組裝得到兩種大小不同的α-乳清蛋白納米球;α-乳清蛋白溶液經(jīng)酶解后在鈣離子的作用下形成長納米管,再經(jīng)超聲處理后得到短納米管。將以上四種納米載體分別與姜黃素溶液作用,得到載藥納米粒。采用圓二色譜,熒光淬滅,紅外色譜等方法對載藥納米粒進(jìn)行表征,結(jié)果顯示姜黃素與納米載體以氫鍵方式結(jié)合,藥物被包埋到納米粒子中,納米球的載藥率高于納米管。2、基于Caco-2細(xì)胞的姜黃素納米粒內(nèi)吞作用及攝取機(jī)制的研究。采用激光共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞儀測定四種納米粒的細(xì)胞攝取量,結(jié)果顯示,與純藥物溶液相比,四種載藥納米粒均可提高姜黃素被細(xì)胞攝取的能力,其中短納米管被細(xì)胞攝取的量最多。用四種抑制劑分別抑制細(xì)胞的四種攝取方式,并與未加入抑制劑的組進(jìn)行對比發(fā)現(xiàn)細(xì)胞攝取四種納米粒子的方式不同。小納米球主要通過小窩蛋白介導(dǎo)作用,大納米球主要通過吞噬作用,長納米管主要通過細(xì)胞吞飲,短納米管主要通過網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的方式被細(xì)胞攝取。3、基于Caco-2細(xì)胞單層的四種姜黃素納米粒子穿膜轉(zhuǎn)運(yùn)的研究。用四種納米粒子在培養(yǎng)好的Caco-2細(xì)胞單層上孵育,通過測定表觀滲透系數(shù)(Papp)可知,四種納米粒子均可以提高姜黃素在小腸上皮層的穿膜率。通過激光共聚焦觀察發(fā)現(xiàn)四種納米粒子均可以可逆的打破細(xì)胞膜的緊密連接(Tight Junctions,T-Js),從而提高姜黃素在小腸上皮的吸收效率。
【圖文】：

所以如果按照傳統(tǒng)方式服用，很難被人體吸收利用。所以了解這些生物活性逡逑物質(zhì)的吸收機(jī)制對改善這些物質(zhì)的生物利用率也十分關(guān)鍵。小腸是吸收營養(yǎng)物質(zhì)逡逑的主要場所，小腸上皮的細(xì)胞結(jié)構(gòu)以及吸收機(jī)制如圖１－１所示，小腸上皮層是由逡逑腸細(xì)胞，杯狀細(xì)胞，Ｍ細(xì)胞組成。其中腸細(xì)胞是小腸中最豐富的細(xì)胞，并通過主逡逑動運(yùn)輸或被動擴(kuò)散吸收營養(yǎng)。在長細(xì)胞中分布著可以分泌粘液的杯狀細(xì)胞，，Ｍ逡逑細(xì)胞穿插在兩種細(xì)胞中，起到半透性屏障作用，可以防止大多數(shù)細(xì)菌和病原體的逡逑滲透［５Ｈ７］。小腸吸收營養(yǎng)物質(zhì)的方式主要有四種：（１）被動擴(kuò)散，主要包括細(xì)胞逡逑旁路擴(kuò)散或跨細(xì)胞途徑轉(zhuǎn)運(yùn)。細(xì)胞旁路擴(kuò)散是指通過腸上皮細(xì)胞之間的間隙不經(jīng)逡逑細(xì)胞穿過小腸上皮，主要通過連接處的小親水分子的轉(zhuǎn)運(yùn)，而跨細(xì)胞擴(kuò)散，是指逡逑被轉(zhuǎn)運(yùn)的物質(zhì)通過與細(xì)胞膜融合然后轉(zhuǎn)移穿過膜，小的疏水分子主要通過該方法逡逑轉(zhuǎn)運(yùn)。水可以被旁細(xì)胞和跨細(xì)胞途徑的被動擴(kuò)散吸收［８］。（２）載體介導(dǎo)的運(yùn)輸，逡逑該運(yùn)輸方式涉及能量的供應(yīng)

？邋Ｎｕｔｒ＾＃ｔｉｔｌｃａｌ邋ｃ＆ｍｐｏｕｒｕｉ逡逑．？邋Ｍｗｃｏｌｙｔｉｃ邋？？＃＃？逡逑圖１－２納米粒子穿過小腸上皮層的兩種方式：細(xì)胞旁路途徑和跨細(xì)胞［２３］逡逑Ｆｉｇ．邋１－２邋Ｔｗｏ邋Ｗａｙｓ邋ｆｏｒ邋Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ邋ｔｏ邋Ｐａｓｓ邋Ｔｈｒｏｕｇｈ邋ｔｈｅ邋Ｓｍａｌｌ邋Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ邋Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ逡逑Ｌａｙｅｒ邋：邋Ｔｒａｎｓｃｅｌｌｅｒ邋Ｒｏｕｔｅ邋ａｎｄ邋Ｐａｒａｃｅｌｌｅｒ邋Ｒｏｕｔｅ逡逑在跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)途徑過程中，納米粒子主要通過四種方式被細(xì)胞攝取：吞噬逡逑作用、吞飲作用、蛋白受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用，介導(dǎo)蛋白主要包括，小窩蛋白逡逑介導(dǎo)的內(nèi)吞作用和網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用（圖１－３）。逡逑，邐Ａ邐Ｂ邐Ｃ邐Ｄ邐Ｅ邐＼逡逑Ｍａｃｒｏｐｉｎｏｃｙｔｏｓｉｓ邐Ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ邐Ｃｉａｔｈｒｉｎ－邐Ｃａｖｅｏｌａｅ－邐Ｏｔｈｅｒ邋ｃｌａｔｈｒｉｎ－逡逑ｍｅｄｉａｔｅｄ邐ｍｅｄｉａｔｅｄ邐ａｎｄ邋ｃａｖｏｅｉａｅ－逡逑／！邐ｋ邐ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ邐ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ邐ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ逡逑（Ｕ邋＞邋ｊ）邐ｅｎｄｏｃｙｔｏｓ，ｓ逡逑廠逡逑Ａｃｔｉｎ邐Ｏｐｓｏｎｉｎ邋ｔ邋Ｃａｖｅｏｌｉｎ邋ｄｉｍｅｒ邋0邋Ｄｙｎａｍｉｎ邋Ｖ＾ＣＩａｔｈｒｉｎ邋ｌａｔｔ
【學(xué)位授予單位】：北京化工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：TB383.1

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本文編號：2686949