本文關(guān)鍵詞：金納米材料在酶聯(lián)免疫分析中的應(yīng)用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：酶聯(lián)免疫分析(ELISA)是以生物酶為標(biāo)記物的標(biāo)記免疫分析法,它將抗原-抗體反應(yīng)的特異性與酶的高效催化放大作用相結(jié)合,既保持了酶催化反應(yīng)的敏感性,又保持了抗原-抗體反應(yīng)的特異性。但在實(shí)際應(yīng)用中天然酶易變性,不易儲(chǔ)存。近年來,由于金納米顆粒有極高的比表面、獨(dú)特的生物和光學(xué)特性,它被廣泛應(yīng)用于高效免疫分析檢測(cè)領(lǐng)域。然而,目前利用金納米顆粒建立的免疫分析法仍然存在著明顯的不足,如生物分子的吸附降低了納米材料模擬酶的催化活性;納米材料的標(biāo)記過程復(fù)雜等等。本論文著眼解決和改善這些問題,發(fā)展了一系列基于金納米顆粒的光學(xué)和生物特性的新酶聯(lián)免疫分析法,并實(shí)現(xiàn)了復(fù)雜生物樣品中低濃度目標(biāo)蛋白質(zhì)的高靈敏度檢測(cè)。具體工作內(nèi)容如下:第1章,金納米材料,以及金納米材料在酶聯(lián)免疫分析中的應(yīng)用。第2章,基于在免疫金表面形成催化鉑層,建立了一種新的高靈敏度的比色免疫分析法。首先,使用納米金顆粒做標(biāo)記物,通過免疫反應(yīng),在聚苯乙烯微孔中形成“三明治”夾心結(jié)構(gòu);然后,加入鉑生長溶液,利用納米金晶核的催化作用,在免疫金表面形成一層鉑層。新生成的鉑層會(huì)加速H2O2對(duì)3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)的氧化,生成一種在652 nm處有強(qiáng)吸收的藍(lán)色產(chǎn)物。通過酶標(biāo)儀、紫外可見分光光度計(jì)或肉眼就可實(shí)現(xiàn)目標(biāo)分析物的定量檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示人免疫球蛋白(H-IgG,抗原模型)在0.5到20 ng/mL范圍內(nèi)與652nm處的吸光度呈線性關(guān)系。檢測(cè)限達(dá)0.15 ng/mL。與傳統(tǒng)的ELISA、電化學(xué)金屬免疫法和熒光免疫法等相比,這種免疫分析法更靈敏。此外,通過肉眼觀察顏色變化,可實(shí)現(xiàn)低至0.5 ng/mL H-IgG的半定量檢測(cè)。同時(shí),我們將這種方法應(yīng)用于實(shí)際樣品中的H-IgG和人甲胎蛋白(一種腫瘤標(biāo)志物)的檢測(cè),結(jié)果顯示所提出的方法具有良好的專一性與抗干擾能力,可望用于臨床診斷。第3章,基于堿性磷酸酶催化產(chǎn)物間接刻蝕金納米棒,提出了一種新的等離子體ELISA。通過經(jīng)典的夾心免疫過程將堿性磷酸酶(ALP)標(biāo)記的抗體捕捉到聚苯乙烯微孔中。ALP催化磷酸抗壞血酸酯水解,生成抗壞血酸�？箟难釋⒌馑犭x子還原為碘單質(zhì)。碘單質(zhì)刻蝕金納米棒,使之由棒狀變?yōu)榍蛐�。金納米棒形貌的改變導(dǎo)致了其縱向等離子共振吸收峰藍(lán)移,同時(shí)金納米棒溶液由藍(lán)色變紅色。依據(jù)這一原理,建立了新的等離子體ELISA。用酶標(biāo)儀的檢測(cè)限低至100 pg/mL H-IgG;目視檢測(cè)限為3.0 ng/mL。通過檢測(cè)胎牛血清中的H-IgG,驗(yàn)證了新方法可用于臨床診斷。第4章,基于辣根過氧化物酶催化產(chǎn)生可刻蝕金納米棒的試劑,探索了一種新的等離子體ELISA。辣根過氧化物酶催化H2O2與對(duì)碘苯酚反應(yīng),生成的碘單質(zhì)將金納米棒刻蝕。使得金納米棒形貌發(fā)生變化,并使其縱向局部等離子體共振吸收峰藍(lán)移。利用這一現(xiàn)象,開發(fā)了一種新的等離子體ELISA。利用正交試驗(yàn)優(yōu)化檢測(cè)條件后,對(duì)H-IgG檢測(cè)限為5 ng/mL。而且此方法具有良好的抗干擾能力,通過檢測(cè)加標(biāo)的胎牛血清樣品,回收率達(dá)89.9%～106%。
【關(guān)鍵詞】：金納米材料 酶聯(lián)免疫分析法 堿性磷酸酶 辣根過氧化物酶
【學(xué)位授予單位】：煙臺(tái)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R446.6;O614.123;TB383.1
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 1 緒論10-26
• 1.1 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）的概要10-11
• 1.1.1 ELISA的概念10
• 1.1.2 ELISA的原理10-11
• 1.2 金納米材料的性質(zhì)11-18
• 1.2.1 金納米材料的模擬酶性質(zhì)11-14
• 1.2.1.1 模擬酶11-13
• 1.2.1.2 金納米顆粒的模擬酶性質(zhì)13-14
• 1.2.2 金納米材料的局域表面等離子體共振效應(yīng)(LSPR)14-18
• 1.2.2.1 LSPR的原理14-15
• 1.2.2.2 球形金納米顆粒LSPR的影響因素15-16
• 1.2.2.3 金納米棒LSPR的影響因素16-18
• 1.3 金納米材料在ELISA中的應(yīng)用18-24
• 1.3.1 金納米材料的模擬酶活性在ELISA的應(yīng)用18-21
• 1.3.2 金納米材料的LSPR在ELISA的應(yīng)用21-23
• 1.3.2.1 基于納米顆粒聚集的ELISA21-22
• 1.3.2.2 基于納米材料形貌改變的ELISA22-23
• 1.3.3 金納米材料在ELISA的其他應(yīng)用23-24
• 1.4 本課題的研究意義24-26
• 2 基于在免疫金上形成催化鉑層的比色免疫分析法26-40
• 2.1 前言26-27
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分27-29
• 2.2.1 試劑與儀器27-28
• 2.2.2 AuNPs-G-HIgG的制備28
• 2.2.3 AuNPs-M-AFP的制備28
• 2.2.4 人免疫球蛋白（H-IgG）的比色免疫分析28-29
• 2.2.5 生物樣品中H-IgG的比色免疫分析29
• 2.2.6 甲胎蛋白的比色免疫分析29
• 2.2.7 人血清中甲胎蛋白的比色免疫分析29
• 2.3 結(jié)果與討論29-38
• 2.3.1 比色免疫分析法的原理29-32
• 2.3.2 靈敏度和線性關(guān)系32-36
• 2.3.3 特異性36-37
• 2.3.4 實(shí)際生物樣品的分析37-38
• 2.4 小結(jié)38-40
• 3 基于堿性磷酸酶催化產(chǎn)物間接刻蝕金納米棒的比色免疫分析法40-56
• 3.1 前言40-41
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分41-43
• 3.2.1 試劑和儀器41
• 3.2.2 金納米棒的合成41-42
• 3.2.3 抗壞血酸的檢測(cè)42
• 3.2.4 堿性磷酸酶（ALP）的檢測(cè)42
• 3.2.5 免疫分析42-43
• 3.2.6 生物樣品中H-IgG的檢測(cè)43
• 3.3 結(jié)果與討論43-55
• 3.3.1 碘刻蝕Au NRs的原理43-46
• 3.3.2 基于碘刻蝕Au NRs還原性物質(zhì)的檢測(cè)46-48
• 3.3.3 ALP的比色檢測(cè)48-52
• 3.3.4 可視化Plasmonic ELISA52-54
• 3.3.5 胎牛血清中H-IgG的檢測(cè)54-55
• 3.4 小結(jié)55-56
• 4 基于辣根過氧化物酶催化產(chǎn)物刻蝕金納米棒的ELISA56-66
• 4.1 前言56-57
• 4.2 實(shí)驗(yàn)部分57-58
• 4.2.1 試劑與儀器57
• 4.2.2 金納米棒的制備57-58
• 4.2.3 辣根過氧化物酶（HRP）的檢測(cè)58
• 4.2.4 免疫分析58
• 4.3 結(jié)果與討論58-65
• 4.3.1 檢測(cè)原理58-59
• 4.3.2 HRP檢測(cè)條件的優(yōu)化59-62
• 4.3.3 HRP檢測(cè)62-63
• 4.3.4 基于HRP檢測(cè)的免疫分析63-65
• 4.4 小結(jié)65-66
• 5 結(jié)論與展望66-68
• 5.1 結(jié)論66
• 5.2 展望66-68
• 參考文獻(xiàn)68-82
• 致謝82-84
• 作者簡介84-86
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文86-87

  本文關(guān)鍵詞：金納米材料在酶聯(lián)免疫分析中的應(yīng)用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：260376