【摘要】：粒徑在100～200 nm的納米粒子具有良好的增強(qiáng)性滲透及滯留(Enhanced permeation and retention effect, EPR)效應(yīng),有望解決目前癌癥檢測準(zhǔn)確率低、邊緣不清的問題,已成為癌癥靶向檢測定位和治療的研究熱點(diǎn)。研究表明,具有良好水溶性和相容性的右旋糖酐可以通過自組裝的方法,獲得粒徑在100～200 nm的納米粒子,但在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步添加葉酸(Folic acid, FA)作為靶向分子,通過主動靶向與被動靶向結(jié)合以提高粒子靶向作用從而實(shí)現(xiàn)癌癥檢測定位的研究非常少。本論文通過自組裝的方式,制備以葉酸為靶向分子、熒光標(biāo)記的粒徑為100～200 nm的右旋糖酐粒子(Dex-DCA-FI/FA NPs),使其作為納米癌細(xì)胞探針以實(shí)現(xiàn)主動靶向與被動靶向的結(jié)合檢測并對其性能進(jìn)行研究。研究內(nèi)容包括以下幾個(gè)方面：1.利用疏水的脫氧膽酸(Deoxycholic acid, DCA)對右旋糖酐進(jìn)行修飾,利用自組裝的方法,并通過對初始濃度及去離子水滴加速度的優(yōu)化,制得直徑峰值167.5 nm且分布均一的脫氧膽酸修飾的右旋糖酐納米粒子。但粒子的穩(wěn)定性并不理想,需進(jìn)行改進(jìn)。2.在Dex-DCA的基礎(chǔ)上增加氨基,通過自組裝的方法,制得多種粒徑在100～200nm的氨基化脫氧膽酸修飾右旋糖酐納米粒子(Dex-DCA-NH2 NPs).由于氨基的靜電排斥作用,Dex-DCA-NH2 NPs在溶液中的穩(wěn)定性大幅提高,可以存放15天以上且在細(xì)胞培養(yǎng)液中4h內(nèi)粒徑仍在100～200 nm。3.在Dex-DCA-NH2的基礎(chǔ)上修飾異硫氰酸熒光素(Fluorescein isothiocyanate, FITC)作為熒光標(biāo)記物、葉酸作為靶向分子,通過自組裝的方法,制得三種具有熒光且粒徑在100～200 nm的葉酸靶向FITC標(biāo)記的脫氧膽酸修飾右旋糖酐納米粒子(Dex-DCA-FI/FA NPs),三種納米粒子在溶液中的穩(wěn)定性良好,可以存放14天以上,在細(xì)胞培養(yǎng)液中4h內(nèi)粒徑仍200 nm左右。4. Dex-DCA-FI200.5/FA 0.5 NPs(上標(biāo)表示Dex-DCA-FI合成時(shí)FITC和氨基的投料比,下標(biāo)分別表示Dex-DCA-FITC和Dex-DCA-FA的含量)對葉酸受體(FR)過量表達(dá)的FR(+)組和FR表達(dá)量較少的FR(-)組癌細(xì)胞具有一定的區(qū)分能力；Dex-DCA-FI 500.75/FA 0.25 NPs對FR(+)組和FR(-)組癌細(xì)胞具有明顯的區(qū)分能力,滿足檢測要求。且兩種納米粒子在濃度較低時(shí)對MCF-7細(xì)胞、Hela細(xì)胞、A549細(xì)胞的細(xì)胞毒性都很小,并都具有良好的血液相容性,有望進(jìn)一步進(jìn)行動物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)或通過改變標(biāo)記物或靶向分子進(jìn)行性能的改良。
[Abstract]:Nanoparticles with particle size of 100 ~ 200 nm have good enhancement of permeability and retention of (Enhanced permeation and retention effect, EPR), which is expected to solve the problem of low accuracy and unclear edge of cancer detection. It has become a hot spot in the research of targeted detection, localization and treatment of cancer. The results showed that the dextran with good water solubility and compatibility could be obtained by self-assembly method, and the nanoparticles with diameter of 100 ~ 200 nm could be obtained, but on this basis, folate (Folic acid, FA) was added as the target molecule. There is very little research on how to improve the targeting of particles by combining active and passive targets to achieve cancer detection and localization. In this paper, folic acid was used as the target molecule and the fluorescent labeled dextran particle (Dex-DCA-FI/FA NPs),) was prepared by self-assembly. It can be used as a probe to detect the active and passive targeting of cancer cells and to study its properties. The research includes the following aspects: 1. The hydrophobic deoxycholic acid (Deoxycholic acid, DCA) was used to modify dextran, and the self-assembly method was used to optimize the initial concentration and deionized water droplet acceleration. Deoxycholic acid modified dextran nanoparticles with a peak diameter of 167.5 nm and uniform distribution were prepared. However, the stability of particles is not ideal, and need to be improved. 2. Based on the addition of amino groups to Dex-DCA, a variety of 100~200nm nanoparticles (Dex-DCA-NH2 NPs).) modified by aminodeoxycholic acid (100~200nm) were prepared by self-assembly. Due to the electrostatic repellent effect of amino groups, the stability of Dex-DCA-NH2 NPs in solution was greatly improved, and the particle size of Dex-DCA-NH2 NPs could be stored for more than 15 days and within 4 hours in the cell culture medium, and the particle size was still 100 ~ 200 nm.3.. Based on Dex-DCA-NH2, fluorescein isothiocyanate (Fluorescein isothiocyanate, FITC) was modified as a fluorescent marker and folic acid as a target molecule. Three kinds of folic acid-targeted folic acid modified dextran nanoparticles (Dex-DCA-FI/FA NPs),) with fluorescence and diameter of 100 ~ 200 nm were prepared. The stability of Dex-DCA-FI/FA NPs), nanoparticles in the solution was good, and they could be stored for more than 14 days. The particle size was still about 200 nm in the cell culture medium within 4 h. Dex-DCA-FI200.5/FA 0.5 NPs (superscript represents the feed ratio of FITC to amino groups in the synthesis of Dex-DCA-FI, The subscript indicates the content of Dex-DCA-FITC and Dex-DCA-FA, respectively. It can distinguish the cancer cells of the FR () group which the folic acid receptor (FR) overexpression and the FR (-) group with less FR expression. Dex-DCA-FI 500.75/FA 0.25 NPs can distinguish cancer cells from FR () group and FR (-) group. The cytotoxicity of the two nanoparticles to MCF-7 cells, Hela cells and A549 cells at low concentration was very small and had good blood compatibility. It is expected that further in vivo experiments in animals or improvement of performance by altering markers or targeting molecules.
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：TB383.1;O657.3

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本文編號：2364850