【摘要】：食源性致病菌是危害食品安全和人類健康的主要因素,其引起的食品安全問題一直受到公眾的廣泛關(guān)注。通過食物傳播疾病的細(xì)菌有很多種,常見的革蘭氏陰性菌有沙門菌屬、志賀菌屬、大腸桿菌等,革蘭氏陽性菌有芽孢桿菌屬、鏈球菌屬、李斯特菌屬等。大多數(shù)腸道菌屬于革蘭氏陰性菌,而大腸桿菌與沙門氏菌是引起人類腸道疾病的主要食源性致病菌。為有效監(jiān)控食品安全,建立便攜、快速、有效的檢測(cè)技術(shù)十分必要。傳統(tǒng)的沙門氏菌檢測(cè)技術(shù)存在耗時(shí)長、效率低、設(shè)備復(fù)雜等問題。試紙條技術(shù)作為一種新型的紙上分析技術(shù)平臺(tái),具有高效、便攜、制作簡單、操作方便、耗樣量少等優(yōu)點(diǎn),引起了廣泛關(guān)注并在多個(gè)領(lǐng)域得到應(yīng)用。通常試紙條檢測(cè)的靈敏度不夠高,且容易受外界環(huán)境因素的影響,因此,本研究對(duì)試紙條檢測(cè)方法加以改進(jìn),將其與納米材料的光熱效應(yīng)相結(jié)合,根據(jù)細(xì)菌個(gè)數(shù)與溫差在一定范圍內(nèi)的對(duì)應(yīng)線性關(guān)系實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中待測(cè)物的定量檢測(cè)。論文針對(duì)納米材料光熱效應(yīng)的食源性致病菌滲濾式試紙條快速檢測(cè)建立了三種新方法,分別是:基于膠體金光熱效應(yīng)的大腸桿菌試紙條檢測(cè)方法、基于石墨烯光熱效應(yīng)的沙門氏菌試紙條檢測(cè)方法及基于納米磁珠光熱效應(yīng)的沙門氏菌試紙條檢測(cè)方法。上述三種方法均可實(shí)現(xiàn)對(duì)食源性致病菌的快速檢測(cè),與傳統(tǒng)方法相比具有簡單快速、耗樣量少、無需大型儀器等優(yōu)點(diǎn)。本論文主要包括五個(gè)部分,內(nèi)容如下:第一章主要概述了食源性致病菌的種類與危害,試紙條檢測(cè)的原理、步驟和分類,及試紙條檢測(cè)方法的應(yīng)用;重點(diǎn)介紹了試紙條在食源性致病菌檢測(cè)中的應(yīng)用及基于納米材料光熱效應(yīng)檢測(cè)方法的研究進(jìn)展。第二章建立了一種基于膠體金光熱效應(yīng)的大腸桿菌滲濾式試紙條檢測(cè)方法。在硝酸纖維素膜表面包被大腸桿菌抗體,封閉膜上的其它非特異性位點(diǎn),將合成的膠體金-抗體復(fù)合物與大腸桿菌結(jié)合,形成膠體金-抗體-大腸桿菌復(fù)合物,滴加到硝酸纖維素膜上,形成抗體-大腸桿菌-抗體-膠體金復(fù)合物。大腸桿菌的數(shù)量越多,連接的膠體金越多,激光照射后溫度升高值越大。進(jìn)一步優(yōu)化了包被液、封閉液、沖洗液種類與濃度及激光照射時(shí)間,并對(duì)試紙條特異性及靈敏度進(jìn)行了考察與測(cè)試。結(jié)果表明,最佳包被液中甲醇含量為6%,最佳封閉液為3%BSA+0.6%Tween-20,最佳沖洗液中Tween-20含量為0.4%,最佳激光照射時(shí)間為1 min。繪制了該試紙條檢測(cè)大腸桿菌的標(biāo)準(zhǔn)曲線,其線性回歸方程為y=3.49x-8.662,R2=0.972,確定了該試紙條的最低檢測(cè)限為410 CFU/mL。第三章建立了一種基于石墨烯光熱效應(yīng)的沙門氏菌滲濾式試紙條檢測(cè)方法。在硝酸纖維素膜表面包被沙門氏菌抗體,封閉膜上其它非特異性位點(diǎn),將合成的石墨烯-膠體金-抗體復(fù)合物與沙門氏菌結(jié)合形成石墨烯-膠體金-抗體-沙門氏菌復(fù)合物,滴加到膜上,形成抗體-沙門氏菌-抗體-膠體金-石墨烯復(fù)合物。沙門氏菌數(shù)量越多,連接的石墨烯越多,激光照射后石墨烯產(chǎn)生的溫差越大。進(jìn)一步優(yōu)化了包被液、封閉液、沖洗液及激光照射時(shí)間,對(duì)試紙條的靈敏度進(jìn)行測(cè)試。結(jié)果表明,最佳包被液甲醇含量為6%,最佳封閉液為4%BSA+0.6%Tween-20,最佳沖洗液中Tween-20含量為0.4%,最佳激光照射時(shí)間為20 s。繪制了該試紙條檢測(cè)沙門氏菌的標(biāo)準(zhǔn)曲線,其線性回歸方程為y=0.754x-2.09,R2=0.971,確定了該試紙條的最低檢測(cè)限為2600 CFU/mL。第四章建立了一種基于磁性納米材料光熱效應(yīng)的沙門氏菌滲濾式試紙條檢測(cè)方法。在硝酸纖維素膜表面包被沙門氏菌抗體,封閉膜上其它非特異性位點(diǎn),將沙門氏菌抗體修飾的10nm磁珠加入沙門氏菌中,反應(yīng)一段時(shí)間后,滴加到硝酸纖維素膜上,磁珠-抗體-沙門氏菌復(fù)合物與膜上的抗體特異性識(shí)別,形成磁珠-抗體-沙門氏菌-抗體復(fù)合物,沖洗液沖洗除去未結(jié)合的磁珠-抗體。沙門氏菌數(shù)量越多,連接的磁珠越多,激光照射后磁珠產(chǎn)生的溫差越大。進(jìn)一步優(yōu)化了包被液、封閉液、沖洗液、磁珠-抗體用量,對(duì)試紙條的靈敏度進(jìn)行測(cè)試。結(jié)果表明,最佳包被液甲醇含量為6%,最佳封閉液中BSA含量為2%,最佳沖洗液中Tween-20含量為0.4%,最佳磁珠-抗體用量為20μL,繪制了該試紙條檢測(cè)沙門氏菌的標(biāo)準(zhǔn)曲線,其線性回歸方程為y=1.42x 3.588,R2=0.960,確定了該試紙條的最低檢測(cè)限為800 CFU/mL。第五章對(duì)本文建立的基于納米材料光熱效應(yīng)的食源性致病菌試紙條檢測(cè)方法進(jìn)行了總結(jié)。三種方法均可實(shí)現(xiàn)對(duì)食源性致病菌的快速檢測(cè),與傳統(tǒng)方法相比較具有簡單快速、耗樣量少、無需大型儀器等優(yōu)點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：TS207.4;TB383.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2258093