【摘要】：蛋白質(zhì)的糖基化是蛋白質(zhì)重要的翻譯后修飾之一,對(duì)于蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能具有非常重要的影響,調(diào)控著細(xì)胞的許多重要生命過程,是許多臨床的生物標(biāo)志物及治療的靶標(biāo),糖蛋白的研究在生物學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有非常重要的意義。糖蛋白組學(xué)的研究對(duì)象一般都是復(fù)雜的生物樣品體系,低豐度和微觀結(jié)構(gòu)的不均一性,使得糖蛋白的分離富集是糖蛋白組學(xué)的重點(diǎn)和難點(diǎn)。緒論對(duì)糖蛋白的分離富集的幾種方法做了簡(jiǎn)要介紹,重點(diǎn)介紹了分離富集糖蛋白的常用化學(xué)反應(yīng)方法。本論文主要針對(duì)糖蛋白的分離和富集的問題開展了研究。利用本研究組制備的具可切割的氧氨基功能基團(tuán)的磁性納米粒子對(duì)糖蛋白進(jìn)行了分離富集。磁性納米粒子上的氧氨基官能團(tuán)能與唾液酸甘油側(cè)鏈的鄰二醇被高碘酸鈉氧化生成的醛基選擇性的反應(yīng),將糖蛋白富集到磁性納米粒子上,而可切割的二硫鍵能在不破壞糖基片段的情況下將糖蛋白釋放出來(lái)。論文討論了溫度,時(shí)間,催化劑,還原劑,p H值,氧化劑的濃度對(duì)分離和富集的影響,優(yōu)化并確立了選擇性分離富集糖蛋白的條件。本論文還以唾液酸為起始原料,通過選擇性保護(hù)與脫保護(hù)的方法,在唾液酸的9號(hào)位置上引入醛基和疊氮,后續(xù)工作將用引入疊氮的唾液酸衍生物對(duì)細(xì)胞進(jìn)行代謝標(biāo)記,再準(zhǔn)備與具可切割的炔基功能化的磁性納米粒子反應(yīng),通過點(diǎn)擊化學(xué)將代謝標(biāo)記的唾液酸化糖蛋白或糖綴合物進(jìn)行分離富集。本論文的工作確立了選擇性分離和富集糖蛋白的條件,為在復(fù)雜生物樣品中的應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
[Abstract]:Glycosylation of proteins is one of the most important posttranslational modifications of proteins, which has a very important effect on the structure and function of proteins, regulates many important life processes of cells, and is a target of many clinical biomarkers and treatments. The study of glycoprotein is of great significance in the field of biology and clinical medicine. The research object of glycoproteomics is generally complex biological sample system. The low abundance and the heterogeneity of microstructure make the separation and enrichment of glycoprotein become the focus and difficulty of glycoproteomics. In the introduction, several methods for the separation and enrichment of glycoproteins are briefly introduced, with emphasis on the common chemical reaction methods for the separation and enrichment of glycoproteins. This paper focuses on the separation and enrichment of glycoproteins. The glycoprotein was separated and enriched by magnetic nanoparticles with cleavable functional groups of oxygen and amino groups prepared by our team. The O-amino functional groups on the magnetic nanoparticles can react selectively with the aldehyde group formed by the oxidation of o-diol in the side chain of sialic acid glycerol by sodium periodate to enrich the glycoprotein onto the magnetic nanoparticles. The cleavable disulfide bond can release the glycoprotein without destroying the glycosyl fragment. In this paper, the effects of temperature, time, catalyst, reductant pH value and the concentration of oxidant on separation and enrichment were discussed, and the conditions for selective separation and enrichment of glycoprotein were optimized and established. In this paper, sialic acid was used as the starting material, and aldehydes and azide were introduced into sialic acid 9 by selective protection and deprotection. In the following work, sialic acid derivatives introduced azide were used to mark the cell metabolism. Then it is prepared to react with the magnetic nanoparticles with cleavable alkynyl functionalization to separate and enrich the salivary glycosylated glycoproteins or conjugates labeled by metabolism by click-chemistry. In this paper, the conditions for selective separation and enrichment of glycoproteins were established, which provided experimental data for application in complex biological samples.
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：TB383.1;TQ936.2

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本文編號(hào)：2203061