本文選題：細(xì)胞核 + 核定位序列�。� 參考：《核技術(shù)》2017年05期

【摘要】：基因治療的關(guān)鍵是如何高效轉(zhuǎn)運(yùn)基因進(jìn)入細(xì)胞核并發(fā)揮作用,實(shí)時(shí)觀察脫氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,DNA)在細(xì)胞核中的分布對(duì)于了解基因治療的效果非常重要。其中,載體的安全性、運(yùn)輸效率等是基因治療的關(guān)鍵影響因素。本工作構(gòu)建了核定位序列(Nuclear Localization Signal,NLS)與DNA四面體的復(fù)合結(jié)構(gòu),提高了細(xì)胞核攝取DNA四面體的效率。利用"點(diǎn)擊"化學(xué)反應(yīng)將NLS與DNA四面體進(jìn)行共價(jià)連接,解決了簡單混合帶來的穩(wěn)定性差等問題。進(jìn)一步研究了不同長度和等電點(diǎn)的NLS序列在與DNA四面體連接時(shí)的效率,發(fā)現(xiàn)與經(jīng)典的NLS_(12)相比,等電點(diǎn)為4.84的NLS29與DNA的非特異性結(jié)合顯著降低,連接反應(yīng)的效率從37.3%提高到72.3%。經(jīng)高效液相色譜(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)分離純化后的NLS12-DNA和NLS29-DNA均可以靶向細(xì)胞核,說明改變NLS的長度和等電點(diǎn)后仍保持了很好的活性。該研究改善了正電NLS與負(fù)電DNA之間由于非特異性結(jié)合容易形成沉淀的問題,為臨床基因治療奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:The key of gene therapy is how to transport genes into the nucleus and play a role. It is very important to observe the distribution of deoxyribonucleic acid DNA in the nucleus in real time for understanding the effect of gene therapy. Among them, the safety of vector, transport efficiency and so on are the key influencing factors of gene therapy. In this work, the complex structure of nuclear Localization signal nls) and DNA tetrahedron was constructed, and the efficiency of nuclear uptake of DNA tetrahedron was improved. The NLS and DNA tetrahedron are covalently connected by "click" chemical reaction, which solves the problem of poor stability caused by simple mixing. Furthermore, the efficiency of NLS sequences with different lengths and isoelectric points in joining to DNA tetrahedron was studied. It was found that the nonspecific binding of NLS29 with isoelectric point 4.84 to DNA was significantly lower than that of classical NLSs. The efficiency of connection reaction was increased from 37.3% to 72.3%. Both NLS12-DNA and NLS29-DNA could be targeted to the nucleus after high performance liquid chromatography (HPLC) high Performance Liquid Chromatography-HPLC, indicating that the length and isoelectric point of NLS remained very good activity. This study improved the problem that the nonspecific binding between positive NLS and negative DNA was easy to precipitate, which laid the foundation for clinical gene therapy.
【作者單位】： 中國科學(xué)院上海應(yīng)用物理研究所物理生物學(xué)研究室中國科學(xué)院界面物理與技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中國科學(xué)院大學(xué);
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.11575278、No.21675167)資助~~
【分類號(hào)】：Q2-33;TB383.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 徐耀忠;Thiobase DNA: the chemistry and some applications in cancer studies[J];Progress in Natural Science;2000年06期

2 傅衍 ,牛冬 ,阮暉 ,陳海燕;COMPARISON OF DIFFERENT ENZYMES AND PROBES AND THEIR COMBINATIONS IN DNA FINGERPRINTING[J];Journal of Zhejiang University Science;2001年04期

3 安小惠 ,王一理 ,來寶長 ,耿一萍 ,司履生;CONSTRUCTION OF HUMAN INTERLUEKIN-18 DNA VACCINE AND IT'S EXPRESSION IN MAMMALIAN CELLS[J];Journal of Xi'an Medical University;2001年02期

4 張鵬 ,孟繼本 ,龍江 ,松浦輝男 ,王永梅;Synthesis of Benzo [α]phenoxazin-5-one Derivatives and Their Interactions with DNA[J];Chinese Journal of Chemistry;2002年05期

5 ;DIFFERENT RESULTS BY DIFFERENT COMMERCIAL TAQ DNA POLYMERASE IN RAPD[J];四川動(dòng)物;2002年02期

6 ;Genetic Diversity of Three Aristichthys nobilis Populations and One Inbreeding Stock[J];Wuhan University Journal of Natural Sciences;2002年02期

7 強(qiáng)曉藝;DNA計(jì)算的應(yīng)用與展望[J];西安聯(lián)合大學(xué)學(xué)報(bào);2002年02期

8 王軍陽,范桂香,勝利,袁育康;THE CONSTRUCTION AND PRELIMINARY APPRAISEMENT OF HSV-2 gD GENE DNA VACCINE[J];Academic Journal of Xi'an Jiaotong University;2002年02期

9 董菁 ,成軍 ,王勤環(huán) ,施雙雙 ,王剛 ,斯崇文;CLONING AND ANALYSIS OF THE GENOMIC DNA SEQUENCE OF AUGMENTER OF LIVERR EGENERATION FROM RAT[J];Chinese Medical Sciences Journal;2002年02期

10 謝傳曉;Evidence for Base Substitutions and Repair of DNA Mismatch Damage Induced by Low Energy N~+ Ion Beam Implantation in E. coli[J];High Technology Letters;2003年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 Dongmei Zhao;Fan Jin;Yuli Qian;Hefeng Huang;;Expression patterns of Dnmtl and Dnmt3b in preimplantational mouse embryos and effects of in-vitro cultures on their expression[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會(huì)議婦科內(nèi)分泌會(huì)場(chǎng)（婦科內(nèi)分泌學(xué)組、絕經(jīng)學(xué)組、計(jì)劃生育學(xué)組）論文匯編[C];2012年

2 姜東成;蔣稼歡;楊力;蔡紹皙;K.-L.Paul Sung;;在聚吡咯微點(diǎn)致動(dòng)下的DNA雜交行為[A];2008年全國生物流變學(xué)與生物力學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2008年

3 李經(jīng)建;冀中華;蔡生民;;小溝結(jié)合方式中的DNA媒介電荷轉(zhuǎn)移[A];第十三次全國電化學(xué)會(huì)議論文摘要集（下集）[C];2005年

4 ;The interaction between Levofloxacine Hydrochloride and DNA mediated by Cu~(2+)[A];湖北省化學(xué)化工學(xué)會(huì)2006年年會(huì)暨循環(huán)經(jīng)濟(jì)專家論壇論文集[C];2006年

5 Liqun Rao;Hua Yang;Guiyou Long;Qiming Wang;Qing Li;;A rapid method for the preparation of DNA binding proteins[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)第十屆會(huì)員代表大會(huì)暨全國學(xué)術(shù)會(huì)議摘要集[C];2010年

6 方呈祥;張珞珍;陶天申;楊朝暉;;幾種不同構(gòu)型DNA的長期保存[A];全國第五屆冷凍干燥學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];1997年

7 李春香;楊群;孫曉燕;宋從鳳;;模擬沉積環(huán)境下植物葉片DNA降解規(guī)律的初步研究[A];中國古生物學(xué)會(huì)第22屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2003年

8 李曉敏;黃勇;趙美萍;李元宗;;DNA錯(cuò)配與DNA聚合酶活性之間關(guān)系的研究[A];中國化學(xué)會(huì)第十三屆有機(jī)分析與生物分析學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2005年

9 黃衛(wèi)華;Yong Chen;Damien Baigl;;基于微流控系統(tǒng)的單個(gè)DNA分子壓縮機(jī)制研究[A];第四屆海峽兩岸分析化學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

10 ;Genomic DNA Expression Library Construction of Deinococcus radiodurans[A];湖南省生理科學(xué)會(huì)2008年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2008年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 舒放;編織一個(gè)DNA納米桶[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

2 本報(bào)記者 張巍巍;DNA樣本也能作假[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

3 第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室教授 李福洋;破除法老DNA的咒語[N];東方早報(bào);2011年

4 常麗君;效率和質(zhì)量：“DNA制造業(yè)”兩大障礙被攻克[N];科技日?qǐng)?bào);2012年

5 記者 徐敏;DNA分子為何不穩(wěn)定？[N];解放日?qǐng)?bào);2005年

6 北京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 侯巧明;DNA識(shí)別遺傳信息判斷人[N];計(jì)算機(jī)世界;2001年

7 張錦芳;韓國科學(xué)家揭示DNA結(jié)構(gòu)新奧秘[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

8 肖顯靜;垃圾DNA：基因認(rèn)識(shí)的寶藏？[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

9 張夢(mèng)然;首個(gè)近乎完全由人造“零件”搭建的DNA分子問世[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

10 本報(bào)記者 宋劍峰;開發(fā)DNA的計(jì)算潛能[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2002年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 唐陽;基于質(zhì)譜技術(shù)的基因組DNA甲基化及其氧化衍生物分析[D];武漢大學(xué);2014年

2 池晴佳;DNA動(dòng)力學(xué)與彈性性質(zhì)研究[D];重慶大學(xué);2015年

3 胡璐璐;哺乳動(dòng)物DNA去甲基化過程關(guān)鍵酶TET2的三維結(jié)構(gòu)與P暬蒲芯縖D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 隋江東;APE1促進(jìn)DNA-PKcs介導(dǎo)hnRNPA1磷酸化及其在有絲分裂期端粒保護(hù)中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 劉松柏;結(jié)構(gòu)特異性核酸酶FEN1在DNA復(fù)制及細(xì)胞周期過程中的功能性研究[D];浙江大學(xué);2015年

6 王璐;哺乳動(dòng)物中親本DNA甲基化的重編程與繼承[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2015年

7 齊文靖;染色質(zhì)改構(gòu)蛋白BRG1在DNA雙鏈斷裂修復(fù)中的作用及機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

8 龍湍;水稻T-DNA插入突變?nèi)后w側(cè)翼序列的分離分析和OsaTRZ2的克隆與功能鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

9 孟瑋烈;DNA膜的非均勻性能及其對(duì)微懸臂梁納米力學(xué)行為的影響[D];上海大學(xué);2015年

10 高豐雷;基于生物放大技術(shù)的DNA檢測(cè)新方法研究[D];南京大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 董洪奎;面向可視化納米操作的DNA運(yùn)動(dòng)學(xué)建模及誤差實(shí)時(shí)校正方法[D];沈陽理工大學(xué);2014年

2 盧珊;常見水生動(dòng)物與其環(huán)境DNA的定性與定量關(guān)系[D];南京師范大學(xué);2015年

3 何建林;等位基因特異DNA甲基化的描述與機(jī)器學(xué)習(xí)預(yù)測(cè)[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2015年

4 韓棟;基于DNA微納技術(shù)的信息隱藏算法與模型設(shè)計(jì)研究[D];鄭州輕工業(yè)學(xué)院;2015年

5 程超;聚乙二醇（PEG）作用下DNA凝聚的單分子研究[D];溫州大學(xué);2015年

6 王肖猛;利用DNA洗牌技術(shù)構(gòu)建GRATEN體系用于基因組編輯的研究[D];聊城大學(xué);2015年

7 王婧;Sulfolobus acidocaldarius的兩種尿嘧啶DNA糖苷酶的酶學(xué)性質(zhì)研究[D];上海海洋大學(xué);2015年

8 田存章;玉米DNA誘導(dǎo)的13種水稻突變體特異序列分析[D];河南師范大學(xué);2015年

9 鐘兆花;基于DNA鏈取代放大技術(shù)的甲基轉(zhuǎn)移酶活性比色傳感新方法研究[D];南昌大學(xué);2015年

10 杜馳;鹽脅迫下鹽穗木DNA損傷應(yīng)激通路中相關(guān)基因的表達(dá)與耐鹽性分析[D];新疆大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1905877