本文關(guān)鍵詞： 聚苯乙烯納米粒子 胃癌 基因載體 藥物載體 細胞毒性　出處：《吉林大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的： 研究并合成單分散聚苯乙烯納米粒子，，將單分散聚苯乙烯粒子與細胞混合培養(yǎng)并在顯微鏡下觀察細胞熒光成像、檢測細胞毒性和細胞周期，用以評價該材料的熒光成像能力、生物相容性等細胞生物學特性。通過這一系列研究為進一步探索單分散聚苯乙烯納米粒子作為進展期胃癌非病毒基因載體的可能性做好前期鋪墊，并期待發(fā)現(xiàn)一種新型非病毒納米基因載體來為胃癌的治療做出貢獻。 方法： （1）通過配方和分散聚合法制作單分散聚苯乙烯粒子并檢測其表征;（2）設(shè)計濃度為25ppm、50ppm、100ppm、200ppm、400ppm的單分散聚苯乙烯粒子溶液與實驗組人胃腺癌細胞（SGC7901）及對照組人正常胃粘膜細胞（GES-1）、人宮頸癌細胞（Hela）共同孵育12h后，用熒光顯微鏡觀察細胞成像，流式細胞儀檢測熒光亮度；（3）將上述各個濃度單分散聚苯乙烯粒子溶液與實驗組人胃腺癌細胞（SGC7901）及對照組人正常胃粘膜細胞（GES-1）、人宮頸癌細胞（Hela）分別孵育24h、48h、72h后MTT法檢測細胞增殖能力以及細胞毒性；（4）分別將上述不同濃度單分散聚苯乙烯粒子溶液與人胃腺癌細胞（SGC7901）共同孵育24h，流式細胞儀檢測細胞周期。其中實驗組和對照組組內(nèi)均設(shè)置空白對照為不含單分散聚苯乙烯粒子培養(yǎng)液所培養(yǎng)的細胞。（5）采用SPSS21.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計學分析。 結(jié)果： （1）初始單體濃度設(shè)定在12%，可得到粒徑在200nm左右的粒子，SEM下觀測粒子表面尚光滑，單分散性、球形度較好。在其他條件不變的情況下逐漸增加初始單體配比，可以發(fā)現(xiàn)隨著初始單體濃度增大至20%，粒子的平均粒徑呈增大趨勢，最高可以達到850nm，但單分散度、球形度控制良好。繼續(xù)增加初始單體配比，也就是當單體濃度大于20%，粒子出現(xiàn)嚴重的凝聚現(xiàn)象，單分散性不能維持，球形結(jié)構(gòu)也逐漸破壞。 設(shè)定引發(fā)劑濃度由0.5%逐漸增至3%，粒子的粒徑隨之變大，PDI先減小后增大。研究中發(fā)現(xiàn)，當引發(fā)劑濃度為1%時，成球速率快，容易出現(xiàn)二次成球從而出現(xiàn)粒徑小的粒子，也因此導致粒子粒徑分布變寬；當引發(fā)劑濃度大于3%時，初級粒子核易被單體溶脹導致成球率下降。實驗發(fā)現(xiàn)，引發(fā)劑濃度在1.0%-2.5%時較為適宜。 在制作納米粒子過程中，我們采用的穩(wěn)定劑為聚乙烯基吡咯烷酮（PVP）。在其他制備條件不變的情況下，調(diào)節(jié)PVP濃度由6%到10%，可以發(fā)現(xiàn)粒子數(shù)量逐漸增加，粒徑隨之減小。而當設(shè)定的PVP濃度較低時（低于6%），粒子之間的碰撞增加，粒徑隨之增加，PDI也同時增大。 （2）通過熒光顯微鏡分別在高倍和低倍視野觀察各組細胞，明場下可以看見細胞生長狀態(tài)好、數(shù)量多、形態(tài)正常；暗場下可見粉紅色熒光，圖像清晰，熒光強度隨納米粒子濃度增高而增強；FCM于激發(fā)波長488nm，發(fā)射波長488-630nm下檢細胞熒光強度，結(jié)果示各實驗組熒光強度與對照組相比P0.05，有統(tǒng)計學差異；各實驗組間比較，P0.05，有統(tǒng)計學差異；細胞熒光強度與聚苯乙烯納米粒子濃度呈正比。 （3）MTT檢測結(jié)果：MTT法檢測細胞毒性，實驗組與對照組比較無明顯差異（P0.05）；其中25ppm、50ppm、100ppm實驗組在490nm波長吸光度與聚苯乙烯粒子濃度呈遞增趨勢；200ppm、400ppm組細胞增值率吸光度轉(zhuǎn)為下降。細胞活性隨聚苯乙烯粒子濃度呈先上升后下降趨勢，促細胞增殖的上限濃度為200ppm，各實驗組細胞活性有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 （4）細胞周期檢測結(jié)果：通過流式細胞儀檢測細胞周期示0ppm、25ppm、50ppm、100ppm實驗組中處于G1期和S期的細胞比例降低，G2期細胞占比增加；各周期細胞比例的改變與聚苯乙烯粒子濃度呈趨勢性改變，有統(tǒng)計學意義（P0.05）。200ppm、400ppm實驗組G1期和S期的細胞比例增加，G2期細胞比例降低，與對照組相比較P0.05，差異有統(tǒng)計學意義。 結(jié)論： （1）成功制得適合進一步應(yīng)用于體外實驗研究的納米級聚苯乙烯粒子。 （2）本文中聚苯乙烯納米粒子能夠?qū)崿F(xiàn)清晰、穩(wěn)定細胞熒光成像，是一種可以進入細胞內(nèi)且穩(wěn)定性較強的熒光納米粒子。 （3）聚苯乙烯納米粒子在一定濃度范圍內(nèi)不會降低細胞活性，并通過促G1期和S期細胞向G2期轉(zhuǎn)變，而促進細胞增生。
[Abstract]:Objective:
Study and synthesis of monodisperse polystyrene nanoparticles, monodisperse polystyrene particles and mixed cultured cells and cells were observed under microscope and fluorescence imaging, detection of cell cycle cytotoxicity to fluorescence imaging ability evaluation of the material, biocompatibility and other characteristics of cell biology. Through a series of research for the further exploration of monodisperse polystyrene the possibility of advanced gastric cancer nanoparticles as non viral gene vectors to stage, and expect to find a new non viral gene vector to treat gastric cancer to make the contribution.
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本文編號：1524790