本文關(guān)鍵詞： 聚苯乙烯納米粒子 胃癌 基因載體 藥物載體 細(xì)胞毒性　出處：《吉林大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的： 研究并合成單分散聚苯乙烯納米粒子，，將單分散聚苯乙烯粒子與細(xì)胞混合培養(yǎng)并在顯微鏡下觀察細(xì)胞熒光成像、檢測(cè)細(xì)胞毒性和細(xì)胞周期，用以評(píng)價(jià)該材料的熒光成像能力、生物相容性等細(xì)胞生物學(xué)特性。通過(guò)這一系列研究為進(jìn)一步探索單分散聚苯乙烯納米粒子作為進(jìn)展期胃癌非病毒基因載體的可能性做好前期鋪墊，并期待發(fā)現(xiàn)一種新型非病毒納米基因載體來(lái)為胃癌的治療做出貢獻(xiàn)。 方法： （1）通過(guò)配方和分散聚合法制作單分散聚苯乙烯粒子并檢測(cè)其表征;（2）設(shè)計(jì)濃度為25ppm、50ppm、100ppm、200ppm、400ppm的單分散聚苯乙烯粒子溶液與實(shí)驗(yàn)組人胃腺癌細(xì)胞（SGC7901）及對(duì)照組人正常胃粘膜細(xì)胞（GES-1）、人宮頸癌細(xì)胞（Hela）共同孵育12h后，用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞成像，流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光亮度；（3）將上述各個(gè)濃度單分散聚苯乙烯粒子溶液與實(shí)驗(yàn)組人胃腺癌細(xì)胞（SGC7901）及對(duì)照組人正常胃粘膜細(xì)胞（GES-1）、人宮頸癌細(xì)胞（Hela）分別孵育24h、48h、72h后MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力以及細(xì)胞毒性；（4）分別將上述不同濃度單分散聚苯乙烯粒子溶液與人胃腺癌細(xì)胞（SGC7901）共同孵育24h，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期。其中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組組內(nèi)均設(shè)置空白對(duì)照為不含單分散聚苯乙烯粒子培養(yǎng)液所培養(yǎng)的細(xì)胞。（5）采用SPSS21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： （1）初始單體濃度設(shè)定在12%，可得到粒徑在200nm左右的粒子，SEM下觀測(cè)粒子表面尚光滑，單分散性、球形度較好。在其他條件不變的情況下逐漸增加初始單體配比，可以發(fā)現(xiàn)隨著初始單體濃度增大至20%，粒子的平均粒徑呈增大趨勢(shì)，最高可以達(dá)到850nm，但單分散度、球形度控制良好。繼續(xù)增加初始單體配比，也就是當(dāng)單體濃度大于20%，粒子出現(xiàn)嚴(yán)重的凝聚現(xiàn)象，單分散性不能維持，球形結(jié)構(gòu)也逐漸破壞。 設(shè)定引發(fā)劑濃度由0.5%逐漸增至3%，粒子的粒徑隨之變大，PDI先減小后增大。研究中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)引發(fā)劑濃度為1%時(shí)，成球速率快，容易出現(xiàn)二次成球從而出現(xiàn)粒徑小的粒子，也因此導(dǎo)致粒子粒徑分布變寬；當(dāng)引發(fā)劑濃度大于3%時(shí)，初級(jí)粒子核易被單體溶脹導(dǎo)致成球率下降。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，引發(fā)劑濃度在1.0%-2.5%時(shí)較為適宜。 在制作納米粒子過(guò)程中，我們采用的穩(wěn)定劑為聚乙烯基吡咯烷酮（PVP）。在其他制備條件不變的情況下，調(diào)節(jié)PVP濃度由6%到10%，可以發(fā)現(xiàn)粒子數(shù)量逐漸增加，粒徑隨之減小。而當(dāng)設(shè)定的PVP濃度較低時(shí)（低于6%），粒子之間的碰撞增加，粒徑隨之增加，PDI也同時(shí)增大。 （2）通過(guò)熒光顯微鏡分別在高倍和低倍視野觀察各組細(xì)胞，明場(chǎng)下可以看見(jiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)好、數(shù)量多、形態(tài)正常；暗場(chǎng)下可見(jiàn)粉紅色熒光，圖像清晰，熒光強(qiáng)度隨納米粒子濃度增高而增強(qiáng)；FCM于激發(fā)波長(zhǎng)488nm，發(fā)射波長(zhǎng)488-630nm下檢細(xì)胞熒光強(qiáng)度，結(jié)果示各實(shí)驗(yàn)組熒光強(qiáng)度與對(duì)照組相比P0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；各實(shí)驗(yàn)組間比較，P0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；細(xì)胞熒光強(qiáng)度與聚苯乙烯納米粒子濃度呈正比。 （3）MTT檢測(cè)結(jié)果：MTT法檢測(cè)細(xì)胞毒性，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較無(wú)明顯差異（P0.05）；其中25ppm、50ppm、100ppm實(shí)驗(yàn)組在490nm波長(zhǎng)吸光度與聚苯乙烯粒子濃度呈遞增趨勢(shì)；200ppm、400ppm組細(xì)胞增值率吸光度轉(zhuǎn)為下降。細(xì)胞活性隨聚苯乙烯粒子濃度呈先上升后下降趨勢(shì)，促細(xì)胞增殖的上限濃度為200ppm，各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞活性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 （4）細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果：通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期示0ppm、25ppm、50ppm、100ppm實(shí)驗(yàn)組中處于G1期和S期的細(xì)胞比例降低，G2期細(xì)胞占比增加；各周期細(xì)胞比例的改變與聚苯乙烯粒子濃度呈趨勢(shì)性改變，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。200ppm、400ppm實(shí)驗(yàn)組G1期和S期的細(xì)胞比例增加，G2期細(xì)胞比例降低，與對(duì)照組相比較P0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： （1）成功制得適合進(jìn)一步應(yīng)用于體外實(shí)驗(yàn)研究的納米級(jí)聚苯乙烯粒子。 （2）本文中聚苯乙烯納米粒子能夠?qū)崿F(xiàn)清晰、穩(wěn)定細(xì)胞熒光成像，是一種可以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)且穩(wěn)定性較強(qiáng)的熒光納米粒子。 （3）聚苯乙烯納米粒子在一定濃度范圍內(nèi)不會(huì)降低細(xì)胞活性，并通過(guò)促G1期和S期細(xì)胞向G2期轉(zhuǎn)變，而促進(jìn)細(xì)胞增生。
[Abstract]:Objective:
Study and synthesis of monodisperse polystyrene nanoparticles, monodisperse polystyrene particles and mixed cultured cells and cells were observed under microscope and fluorescence imaging, detection of cell cycle cytotoxicity to fluorescence imaging ability evaluation of the material, biocompatibility and other characteristics of cell biology. Through a series of research for the further exploration of monodisperse polystyrene the possibility of advanced gastric cancer nanoparticles as non viral gene vectors to stage, and expect to find a new non viral gene vector to treat gastric cancer to make the contribution.
Method錛

本文編號(hào)：1524790