本文關(guān)鍵詞：基于量子點(diǎn)和貴金屬納米粒子的兩種高靈敏定量免疫層析分析方法的研究

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【摘要】：免疫層析分析方法(ICA)是免疫分析方法與層析技術(shù)相結(jié)合的一種分析方法。傳統(tǒng)的免疫層析分析方法主要是以膠體金為基礎(chǔ),該方法具有操作簡(jiǎn)便,檢測(cè)時(shí)間短,價(jià)廉等特點(diǎn),但其主要用于定性和半定量分析,而對(duì)于定量分析則呈現(xiàn)靈敏度不高的缺陷。近年來(lái)各種新型納米材料的不斷涌現(xiàn)及其在ICA的應(yīng)用大大推進(jìn)了ICA定量分析研究的進(jìn)展。其中量子點(diǎn)(quantum dots,QDs)熒光納米材料和具有表面增強(qiáng)拉曼光譜(Surface-Enhanced Raman Scattering,SERS)效應(yīng)的貴金屬納米的問(wèn)世與發(fā)展,為高靈敏定量ICA的建立提供了基礎(chǔ)。本工作自制合成了油相QDs,采用聚合物包裹量子點(diǎn)的方式,成功實(shí)現(xiàn)了油相量子點(diǎn)轉(zhuǎn)變?yōu)樗嗔孔狱c(diǎn),制備了具有量子產(chǎn)率高、熒光效率好的量子點(diǎn)微球,在此基礎(chǔ)上制備了熒光免疫探針,建立了熒光免疫層析分析方法(FICA)。另外,制備了Au@Ag核殼納米粒子,在此基礎(chǔ)上制備了SERS免疫探針,建立了基于貴金屬納米粒子的表面增強(qiáng)拉曼光譜免疫層析分析方法(SERS-ICA)。所建立的兩種高靈敏定量免疫層析分析方法分別用于兩種β-激動(dòng)劑(即瘦肉精)溴布特羅(Bromobuterol,Brom)和沙丁胺醇(Salbutamol,Sal)的檢測(cè)。本論文主要分為四個(gè)部分:一.介紹了本論文的研究背景及其意義,詳細(xì)闡述了免疫層析分析方法的概念、特點(diǎn)、發(fā)展近況和局限性,探討了新型納米材料的研究進(jìn)展以及對(duì)傳統(tǒng)免疫層析分析方法產(chǎn)生的影響,說(shuō)明了量子點(diǎn)的發(fā)展以及基于量子點(diǎn)熒光結(jié)合免疫層析分析方法(FICA)的特點(diǎn)。此外也對(duì)表面增強(qiáng)拉曼光譜結(jié)合免疫層析(SERS-ICA)進(jìn)行了闡述。二.相較于水相直接合成的量子點(diǎn),油相量子點(diǎn)無(wú)論是穩(wěn)定性亦或是熒光強(qiáng)度等方面都更為優(yōu)異。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)有機(jī)熱溶劑的方法成功制備了核殼結(jié)構(gòu)的量子點(diǎn),探究了反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間等因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,對(duì)所制備的量子點(diǎn)進(jìn)行了一系列的表征。三.采用聚合物包裹量子點(diǎn)的方法實(shí)現(xiàn)了油相量子點(diǎn)轉(zhuǎn)為水相量子點(diǎn),并制備了量子點(diǎn)熒光微球,通過(guò)對(duì)其進(jìn)行一系列的表征發(fā)現(xiàn),此微球具有很好的熒光穩(wěn)定性、水相分散性、粒徑分散均一等優(yōu)異性質(zhì)。采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)活化偶聯(lián)的方式,使其與溴布特羅抗體偶聯(lián),制備了可特異性識(shí)別溴布特羅的熒光免疫探針。將探針應(yīng)用于FICA,實(shí)現(xiàn)了對(duì)尿樣中溴布特羅樣品的定量檢測(cè)。整個(gè)免疫層析過(guò)程在20min內(nèi)完成,此方法檢測(cè)溴布特羅的IC50和檢出限分別為0.014 ng/m L和0.53 pg/m L,顯示出高的靈敏度。通過(guò)與其他幾種β-激動(dòng)劑的交叉對(duì)比實(shí)驗(yàn),僅鹽酸克倫特羅有約28.6%的交叉反應(yīng)率,其他均無(wú)交叉現(xiàn)象。最后在尿樣中的加標(biāo)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),其加標(biāo)回收率在97.7%-102.7%之間,RSD值在1.9%-3.3%之間。表明該方法能夠定量并且高靈敏檢測(cè)溴布特羅。四.合成了具有表面增強(qiáng)拉曼效果好的Au@Ag核殼納米粒子,將其分別與拉曼標(biāo)記物(對(duì)巰基丙酸,MBA)和抗沙丁胺醇的多克隆抗體相連合成免疫探針,建立用于特異性檢測(cè)沙丁胺醇的SERS-ICA。此方法檢測(cè)沙丁胺醇的IC50和檢出限分別為0.028 ng/m L和2.8 pg/m L,表明此方法可以高靈敏定量靈敏檢測(cè)沙丁胺醇。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：O657.3;TB383.1

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