本文關(guān)鍵詞：基于量子點和貴金屬納米粒子的兩種高靈敏定量免疫層析分析方法的研究

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【摘要】：免疫層析分析方法(ICA)是免疫分析方法與層析技術(shù)相結(jié)合的一種分析方法。傳統(tǒng)的免疫層析分析方法主要是以膠體金為基礎(chǔ),該方法具有操作簡便,檢測時間短,價廉等特點,但其主要用于定性和半定量分析,而對于定量分析則呈現(xiàn)靈敏度不高的缺陷。近年來各種新型納米材料的不斷涌現(xiàn)及其在ICA的應(yīng)用大大推進了ICA定量分析研究的進展。其中量子點(quantum dots,QDs)熒光納米材料和具有表面增強拉曼光譜(Surface-Enhanced Raman Scattering,SERS)效應(yīng)的貴金屬納米的問世與發(fā)展,為高靈敏定量ICA的建立提供了基礎(chǔ)。本工作自制合成了油相QDs,采用聚合物包裹量子點的方式,成功實現(xiàn)了油相量子點轉(zhuǎn)變?yōu)樗嗔孔狱c,制備了具有量子產(chǎn)率高、熒光效率好的量子點微球,在此基礎(chǔ)上制備了熒光免疫探針,建立了熒光免疫層析分析方法(FICA)。另外,制備了Au@Ag核殼納米粒子,在此基礎(chǔ)上制備了SERS免疫探針,建立了基于貴金屬納米粒子的表面增強拉曼光譜免疫層析分析方法(SERS-ICA)。所建立的兩種高靈敏定量免疫層析分析方法分別用于兩種β-激動劑(即瘦肉精)溴布特羅(Bromobuterol,Brom)和沙丁胺醇(Salbutamol,Sal)的檢測。本論文主要分為四個部分:一.介紹了本論文的研究背景及其意義,詳細闡述了免疫層析分析方法的概念、特點、發(fā)展近況和局限性,探討了新型納米材料的研究進展以及對傳統(tǒng)免疫層析分析方法產(chǎn)生的影響,說明了量子點的發(fā)展以及基于量子點熒光結(jié)合免疫層析分析方法(FICA)的特點。此外也對表面增強拉曼光譜結(jié)合免疫層析(SERS-ICA)進行了闡述。二.相較于水相直接合成的量子點,油相量子點無論是穩(wěn)定性亦或是熒光強度等方面都更為優(yōu)異。本實驗通過有機熱溶劑的方法成功制備了核殼結(jié)構(gòu)的量子點,探究了反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間等因素對實驗結(jié)果的影響,對所制備的量子點進行了一系列的表征。三.采用聚合物包裹量子點的方法實現(xiàn)了油相量子點轉(zhuǎn)為水相量子點,并制備了量子點熒光微球,通過對其進行一系列的表征發(fā)現(xiàn),此微球具有很好的熒光穩(wěn)定性、水相分散性、粒徑分散均一等優(yōu)異性質(zhì)。采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)活化偶聯(lián)的方式,使其與溴布特羅抗體偶聯(lián),制備了可特異性識別溴布特羅的熒光免疫探針。將探針應(yīng)用于FICA,實現(xiàn)了對尿樣中溴布特羅樣品的定量檢測。整個免疫層析過程在20min內(nèi)完成,此方法檢測溴布特羅的IC50和檢出限分別為0.014 ng/m L和0.53 pg/m L,顯示出高的靈敏度。通過與其他幾種β-激動劑的交叉對比實驗,僅鹽酸克倫特羅有約28.6%的交叉反應(yīng)率,其他均無交叉現(xiàn)象。最后在尿樣中的加標(biāo)實驗發(fā)現(xiàn),其加標(biāo)回收率在97.7%-102.7%之間,RSD值在1.9%-3.3%之間。表明該方法能夠定量并且高靈敏檢測溴布特羅。四.合成了具有表面增強拉曼效果好的Au@Ag核殼納米粒子,將其分別與拉曼標(biāo)記物(對巰基丙酸,MBA)和抗沙丁胺醇的多克隆抗體相連合成免疫探針,建立用于特異性檢測沙丁胺醇的SERS-ICA。此方法檢測沙丁胺醇的IC50和檢出限分別為0.028 ng/m L和2.8 pg/m L,表明此方法可以高靈敏定量靈敏檢測沙丁胺醇。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：O657.3;TB383.1

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