本文關(guān)鍵詞：核桃蛋白酶解物調(diào)控制備納米硒及其抗腫瘤活性的研究

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【摘要】：硒是機(jī)體生命活動(dòng)不可缺少的一種微量元素。近年來(lái),隨著對(duì)硒化合物生理作用研究的不斷深入,硒與硒化合物的抗腫瘤活性受到普遍關(guān)注。單質(zhì)硒粒度一旦達(dá)到納米尺度,在水相中就形成膠體,其穩(wěn)定性好,除了具有硒元素所具備的生物活性,又具有納米尺度效應(yīng)。納米單質(zhì)硒屬于無(wú)機(jī)硒,具有活性高、毒性低的特點(diǎn),在腫瘤預(yù)防、治療、降低化療藥物抗藥性等方面顯示出極大的優(yōu)勢(shì)。用蛋白酶解物為模板調(diào)控劑用于納米藥物的制備具有很好的生物兼容性。蛋白酶解物具有耗能低、轉(zhuǎn)運(yùn)速度快和不易被飽和的特點(diǎn),此外蛋白酶解物還具有很好的營(yíng)養(yǎng)作用:提高氨基酸的利用率,促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成和礦質(zhì)元素的吸收等。本課題用核桃蛋白酶解物調(diào)控制備功能化納米硒復(fù)合物,并系統(tǒng)研究了其抗腫瘤作用的機(jī)理。主要內(nèi)容與結(jié)論如下:(1)核桃蛋白酶解物的酶解制備與分離純化以蛋白回收率和水解度為指標(biāo),設(shè)計(jì)單因素實(shí)驗(yàn)篩選最佳酶解工藝,制備核桃蛋白酶解物。研究發(fā)現(xiàn)胰蛋白酶最適加酶量為底物蛋白含量的2%,最適酶解時(shí)間為30 h,此時(shí)得到的核桃蛋白酶解液蛋白回收率為43.97%,水解度為22.96%。經(jīng)超濾膜分離出分子量10000 u的組分,冷凍干燥,得到調(diào)控制備納米硒的核桃蛋白酶解物。(2)核桃蛋白酶解物-納米硒的制備與結(jié)構(gòu)表征在維生素C還原亞硒酸鈉的體系中,以3 mg/m L核桃蛋白酶解物可調(diào)控制備出單分散且均一的球狀納米硒粒子,平均粒徑為89.22 nm。用納米粒度儀、掃描電鏡、元素分析和紅外光譜四種方法對(duì)核桃蛋白酶解物-納米硒的結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征,結(jié)果發(fā)現(xiàn)其形成機(jī)理主要是通過(guò)核桃蛋白酶解物上羥基的吸附作用,納米硒被吸附在核桃蛋白酶解物的分子表面,并阻止納米硒的進(jìn)一步聚集。(3)核桃蛋白酶解物納米硒的抗腫瘤活性研究通過(guò)MTT法篩選出人乳腺癌細(xì)胞MCF-7最為敏感。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),核桃蛋白酶解物-納米硒能引起MCF-7細(xì)胞皺縮,細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)凋亡小體,DNA Ladder,使MCF-7細(xì)胞周期阻滯在S期,誘導(dǎo)細(xì)胞早期凋亡。在MCF-7細(xì)胞內(nèi)檢測(cè)到FADD的表達(dá)水平增高以及Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活化,說(shuō)明核桃蛋白酶解物-納米硒誘導(dǎo)凋亡的其中一條途徑是通過(guò)死亡受體介導(dǎo)的外源性凋亡通路。此外,MCF-7細(xì)胞內(nèi)還檢測(cè)到大量ROS產(chǎn)生和線粒體功能紊亂的現(xiàn)象,說(shuō)明核桃蛋白酶解物-納米硒誘導(dǎo)凋亡的第二條途徑是線粒體介導(dǎo)的內(nèi)源性凋亡通路。
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：TB383.1;TQ460.1

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