【摘要】：【目的】確定第98窟壁畫(huà)表面白色污染物內(nèi)微生物微觀特征,分析其群落組成、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及誘發(fā)壁畫(huà)病害微生物產(chǎn)生的因素,為石窟寺保護(hù)和旅游管理提供建議�！痉椒ā坷脽o(wú)菌手術(shù)刀收集壁畫(huà)表面白色污染物樣品;利用掃描電子顯微鏡(SEM)分析樣品中微生物體微觀形貌;通過(guò)提取樣品總DNA、擴(kuò)增細(xì)菌16S rDNA、構(gòu)建克隆文庫(kù)、測(cè)序和系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系分析等技術(shù)研究壁畫(huà)微生物群落組成與結(jié)構(gòu)特點(diǎn)�！窘Y(jié)果】壁畫(huà)白色污染物中存在大量具有微生物特征的結(jié)構(gòu)體,形態(tài)多呈短桿狀和卵圓形,大小在(3.0 5.5)μm×(1.5 2.5)μm之間。共得到克隆文庫(kù)序列111條,主要為變形菌門(mén)γ-變形菌亞門(mén)腸桿菌科(Enterobacteriaceae)與假單孢菌科(Pseudomonadaceae)成員。群落組成和結(jié)構(gòu)分析表明所得序列主要隸屬于腸桿菌屬(Enterobacter)、埃希菌屬(Escherichia)、固氮菌屬(Azotobacter)、沙雷氏菌屬(Serratia)和克雷伯菌屬(Klebsiella);埃希菌屬和腸桿菌屬為優(yōu)勢(shì)屬,分別占克隆文庫(kù)中總序列的46.8%和35.1%,二者在自然界分布廣泛,大多屬于人類(lèi)致病菌�！窘Y(jié)論】莫高窟第98窟壁畫(huà)表面白色污染物主要為病害細(xì)菌生長(zhǎng)所形成的菌斑群落集成。變形菌門(mén)在壁畫(huà)細(xì)菌克隆文庫(kù)中占絕對(duì)優(yōu)勢(shì),壁畫(huà)病害微生物的出現(xiàn)和蔓延可能與該洞窟之前長(zhǎng)期旅游開(kāi)放存在一定關(guān)聯(lián)。
【圖文】：

1602微生物學(xué)通報(bào)Microbiol.China2013,Vol.40,No.9http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn物樣品,固定于導(dǎo)電膠帶上,在真空環(huán)境下(<5Pa)噴金90s(I=40mA),完成制樣后使用掃描電子顯微鏡(JSM-6610LV,JEOL.Ltd.)分析供試樣品中菌體的微觀形貌特征。1.2.2樣品總DNA提取:稱(chēng)取采集到的壁畫(huà)表面樣品25mg,使用E.Z.N.ATMSPDNA抽提試劑盒(OMEGABIO-TEK,USA),根據(jù)操作說(shuō)明完成樣品基因組總DNA的提取,分裝后置于70°C保存?zhèn)溆谩?.2.3目標(biāo)片段擴(kuò)增:合成細(xì)菌通用引物27F(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和1492R(5′-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′),完成16SrDNA的擴(kuò)增。反應(yīng)體系(25μL)包括2.5μL10×緩沖液,1U的Taq聚合酶(TiangenCo.,Beijing,China),dNTPs0.2mmol/L,MgCl22.5mmol/L,引物0.2μmol/L,及2.0μLDNA模板(約含5ngDNA)。擴(kuò)增程序?yàn)?95°C5min;94°C1min,58°C1min,72°C1.5min,共30個(gè)循環(huán);72°C10min。用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增片段的大小與特異性。圖1莫高窟第98窟剖面與平面位置信息Fig.1PlaneandsectionprofilesinformationofCave98atMogaoGrottoes圖2莫高窟第98窟微生物病害典型區(qū)域(A,B)及實(shí)驗(yàn)樣品采集(C,D)Fig.2Typicalmicrobialdiseaseareas(A,B)andexperimentalsamplecollecting(C,D)inCave98,MogaoGrottoes

1602微生物學(xué)通報(bào)Microbiol.China2013,Vol.40,No.9http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn物樣品,固定于導(dǎo)電膠帶上,在真空環(huán)境下(<5Pa)噴金90s(I=40mA),完成制樣后使用掃描電子顯微鏡(JSM-6610LV,JEOL.Ltd.)分析供試樣品中菌體的微觀形貌特征。1.2.2樣品總DNA提取:稱(chēng)取采集到的壁畫(huà)表面樣品25mg,使用E.Z.N.ATMSPDNA抽提試劑盒(OMEGABIO-TEK,USA),根據(jù)操作說(shuō)明完成樣品基因組總DNA的提取,分裝后置于70°C保存?zhèn)溆谩?.2.3目標(biāo)片段擴(kuò)增:合成細(xì)菌通用引物27F(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和1492R(5′-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′),完成16SrDNA的擴(kuò)增。反應(yīng)體系(25μL)包括2.5μL10×緩沖液,1U的Taq聚合酶(TiangenCo.,Beijing,China),dNTPs0.2mmol/L,MgCl22.5mmol/L,引物0.2μmol/L,及2.0μLDNA模板(約含5ngDNA)。擴(kuò)增程序?yàn)?95°C5min;94°C1min,58°C1min,72°C1.5min,共30個(gè)循環(huán);72°C10min。用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增片段的大小與特異性。圖1莫高窟第98窟剖面與平面位置信息Fig.1PlaneandsectionprofilesinformationofCave98atMogaoGrottoes圖2莫高窟第98窟微生物病害典型區(qū)域(A,B)及實(shí)驗(yàn)樣品采集(C,D)Fig.2Typicalmicrobialdiseaseareas(A,B)andexperimentalsamplecollecting(C,D)inCave98,MogaoGrottoes
【作者單位】： 敦煌研究院保護(hù)研究所;國(guó)家古代壁畫(huà)與土遺址保護(hù)工程技術(shù)研究中心;甘肅省古代壁畫(huà)與土遺址保護(hù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;古代壁畫(huà)保護(hù)國(guó)家文物局重點(diǎn)科研基地;蘭州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.31260136,31070344) 國(guó)家文物局文物保護(hù)科學(xué)與技術(shù)研究重點(diǎn)課題(No.20110208) 國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(No.2013BAC07B02) 敦煌莫高窟第98窟保護(hù)修復(fù)工程項(xiàng)目
【分類(lèi)號(hào)】：K879.41;Q938

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 李最雄;敦煌石窟的保護(hù)現(xiàn)狀和面臨的任務(wù)[J];敦煌研究;2000年01期

2 張國(guó)彬,薛平,侯文芳,郭青林;游客流量對(duì)莫高窟洞窟內(nèi)小環(huán)境的影響研究[J];敦煌研究;2005年04期

3 徐淑青;莫高窟第98窟現(xiàn)狀調(diào)查報(bào)告[J];敦煌研究;2005年05期

4 武發(fā)思;汪萬(wàn)福;賀東鵬;陳港泉;馬燕天;張曉東;馮虎元;;嘉峪關(guān)魏晉墓腐蝕壁畫(huà)細(xì)菌類(lèi)群的分子生物學(xué)檢測(cè)[J];敦煌研究;2011年06期

5 張f:林;唐德平;張楠;王婉如;張東明;武發(fā)思;薛林貴;;敦煌莫高窟中細(xì)菌多樣性的研究[J];微生物學(xué)通報(bào);2012年05期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 吳利;余育和;馮偉松;;PCR-DGGE技術(shù)在環(huán)境微型生物群落研究中的應(yīng)用[J];合肥師范學(xué)院學(xué)報(bào);2010年06期

2 趙躍光;;分子水平上的微生物研究技術(shù)與方法進(jìn)展[J];安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)(上半月刊);2009年17期

3 馬少杰;趙勇;戴習(xí)林;潘迎捷;;南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖系統(tǒng)中氨氧化菌多樣性研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年10期

4 李懷;關(guān)衛(wèi)省;歐陽(yáng)二明;王曉慧;張杰;;DGGE技術(shù)及其在環(huán)境微生物中的應(yīng)用[J];環(huán)境科學(xué)與管理;2008年10期

5 鄒莉;黃藝;謝曙光;;武進(jìn)港浮游微生物群落研究[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年03期

6 方明珠;王晏民;侯妙樂(lè);;基于ArcGIS Engine的館藏壁畫(huà)病害調(diào)查[J];北京建筑工程學(xué)院學(xué)報(bào);2010年01期

7 劉云國(guó);周海舟;馮寶瑩;樊霆;潘翠;;錳污染稻田土壤微生物群落結(jié)構(gòu)和遺傳多樣性研究[J];湖南文理學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2007年04期

8 劉瑋;鄧光華;張嘉超;楊清培;;不同施肥處理對(duì)毛竹根際微生物影響及其PCR-DGGE分析[J];東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2011年05期

9 鄭彩霞,秦全勝,汪萬(wàn)福;敦煌莫高窟窟區(qū)林地土壤水分的入滲規(guī)律[J];敦煌研究;2001年03期

10 汪萬(wàn)福,馬贊峰,藺創(chuàng)業(yè),徐淑青,劉復(fù)玳;昆蟲(chóng)對(duì)石窟壁畫(huà)的危害與防治研究[J];敦煌研究;2002年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 高永超;遲建國(guó);邱維忠;王加寧;張強(qiáng);;分子生物學(xué)技術(shù)在污染土壤修復(fù)中的應(yīng)用[A];2011中國(guó)環(huán)境科學(xué)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（第二卷）[C];2011年

2 劉新春;吳成強(qiáng);楊清香;楊敏;;PCR-DGGE方法的建立及其在微生物生態(tài)群落分析中的應(yīng)用探討[A];微生物生態(tài)學(xué)研究進(jìn)展——第五屆微生物生態(tài)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2003年

3 羅海峰;齊鴻雁;張洪勛;;不同DNA聚合酶對(duì)PCR-DGGE研究土壤微生物多樣性的影響[A];微生物生態(tài)學(xué)研究進(jìn)展——第五屆微生物生態(tài)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2003年

4 趙立平;;分子生態(tài)學(xué)與微生物群落的動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)、結(jié)構(gòu)解析及功能調(diào)控[A];微生物生態(tài)學(xué)研究進(jìn)展——第五屆微生物生態(tài)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2003年

5 楊清香;張昱;楊敏;;污水處理系統(tǒng)中微生物生態(tài)群落分析技術(shù)進(jìn)展[A];微生物生態(tài)學(xué)研究進(jìn)展——第五屆微生物生態(tài)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2003年

6 呼慶;齊鴻雁;張洪勛;;應(yīng)用PCR—DGGE研究施用BT生物農(nóng)藥對(duì)農(nóng)田土壤細(xì)菌群落的影響[A];生態(tài)學(xué)與全面·協(xié)調(diào)·可持續(xù)發(fā)展——中國(guó)生態(tài)學(xué)會(huì)第七屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)論文摘要薈萃[C];2004年

7 錢(qián)俊龍;熊櫻菲;潘小倫;;從10種期刊的文獻(xiàn)計(jì)量分析看中國(guó)文物保護(hù)的現(xiàn)狀和發(fā)展[A];中國(guó)文物保護(hù)技術(shù)協(xié)會(huì)第三次學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

8 汪萬(wàn)福;藺創(chuàng)業(yè);王濤;馬贊峰;;仿愛(ài)夜蛾成蟲(chóng)排泄物對(duì)敦煌石窟壁畫(huà)的損害及其治理[A];中國(guó)文物保護(hù)技術(shù)協(xié)會(huì)第四次學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2005年

9 費(fèi)小路;劉靜;王菊琳;;中國(guó)古代彩繪顏料和染料種類(lèi)及檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[A];中國(guó)文物保護(hù)技術(shù)協(xié)會(huì)第五次學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2007年

10 黃俊文;;甘露寡糖在養(yǎng)豬業(yè)中的研究應(yīng)用進(jìn)展[A];豬營(yíng)養(yǎng)與飼料研究進(jìn)展——第四屆全國(guó)豬營(yíng)養(yǎng)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李振東;東祁連山高寒草地優(yōu)勢(shì)植物內(nèi)生細(xì)菌多樣性研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 胡安輝;高效短程硝化/厭氧氨氧化富集培養(yǎng)物的研究[D];浙江大學(xué);2010年

3 肖升木;分子生態(tài)學(xué)技術(shù)在環(huán)境微生物群落與功能基因中的應(yīng)用研究[D];東華大學(xué);2010年

4 嚴(yán)耿升;干旱區(qū)土質(zhì)文物劣化機(jī)理及材料耐久性研究[D];蘭州大學(xué);2011年

5 徐e，

本文編號(hào)：2532478