【摘要】：【目的】確定第98窟壁畫表面白色污染物內(nèi)微生物微觀特征,分析其群落組成、結構特點及誘發(fā)壁畫病害微生物產(chǎn)生的因素,為石窟寺保護和旅游管理提供建議�！痉椒ā坷脽o菌手術刀收集壁畫表面白色污染物樣品;利用掃描電子顯微鏡(SEM)分析樣品中微生物體微觀形貌;通過提取樣品總DNA、擴增細菌16S rDNA、構建克隆文庫、測序和系統(tǒng)發(fā)生關系分析等技術研究壁畫微生物群落組成與結構特點�！窘Y果】壁畫白色污染物中存在大量具有微生物特征的結構體,形態(tài)多呈短桿狀和卵圓形,大小在(3.0 5.5)μm×(1.5 2.5)μm之間。共得到克隆文庫序列111條,主要為變形菌門γ-變形菌亞門腸桿菌科(Enterobacteriaceae)與假單孢菌科(Pseudomonadaceae)成員。群落組成和結構分析表明所得序列主要隸屬于腸桿菌屬(Enterobacter)、埃希菌屬(Escherichia)、固氮菌屬(Azotobacter)、沙雷氏菌屬(Serratia)和克雷伯菌屬(Klebsiella);埃希菌屬和腸桿菌屬為優(yōu)勢屬,分別占克隆文庫中總序列的46.8%和35.1%,二者在自然界分布廣泛,大多屬于人類致病菌。【結論】莫高窟第98窟壁畫表面白色污染物主要為病害細菌生長所形成的菌斑群落集成。變形菌門在壁畫細菌克隆文庫中占絕對優(yōu)勢,壁畫病害微生物的出現(xiàn)和蔓延可能與該洞窟之前長期旅游開放存在一定關聯(lián)。
【圖文】：

1602微生物學通報Microbiol.China2013,Vol.40,No.9http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn物樣品,固定于導電膠帶上,在真空環(huán)境下(<5Pa)噴金90s(I=40mA),完成制樣后使用掃描電子顯微鏡(JSM-6610LV,JEOL.Ltd.)分析供試樣品中菌體的微觀形貌特征。1.2.2樣品總DNA提取:稱取采集到的壁畫表面樣品25mg,使用E.Z.N.ATMSPDNA抽提試劑盒(OMEGABIO-TEK,USA),根據(jù)操作說明完成樣品基因組總DNA的提取,分裝后置于70°C保存?zhèn)溆谩?.2.3目標片段擴增:合成細菌通用引物27F(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和1492R(5′-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′),完成16SrDNA的擴增。反應體系(25μL)包括2.5μL10×緩沖液,1U的Taq聚合酶(TiangenCo.,Beijing,China),dNTPs0.2mmol/L,MgCl22.5mmol/L,引物0.2μmol/L,及2.0μLDNA模板(約含5ngDNA)。擴增程序為:95°C5min;94°C1min,58°C1min,72°C1.5min,共30個循環(huán);72°C10min。用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增片段的大小與特異性。圖1莫高窟第98窟剖面與平面位置信息Fig.1PlaneandsectionprofilesinformationofCave98atMogaoGrottoes圖2莫高窟第98窟微生物病害典型區(qū)域(A,B)及實驗樣品采集(C,D)Fig.2Typicalmicrobialdiseaseareas(A,B)andexperimentalsamplecollecting(C,D)inCave98,MogaoGrottoes

1602微生物學通報Microbiol.China2013,Vol.40,No.9http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn物樣品,固定于導電膠帶上,在真空環(huán)境下(<5Pa)噴金90s(I=40mA),完成制樣后使用掃描電子顯微鏡(JSM-6610LV,JEOL.Ltd.)分析供試樣品中菌體的微觀形貌特征。1.2.2樣品總DNA提取:稱取采集到的壁畫表面樣品25mg,使用E.Z.N.ATMSPDNA抽提試劑盒(OMEGABIO-TEK,USA),根據(jù)操作說明完成樣品基因組總DNA的提取,分裝后置于70°C保存?zhèn)溆谩?.2.3目標片段擴增:合成細菌通用引物27F(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和1492R(5′-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′),完成16SrDNA的擴增。反應體系(25μL)包括2.5μL10×緩沖液,1U的Taq聚合酶(TiangenCo.,Beijing,China),dNTPs0.2mmol/L,MgCl22.5mmol/L,引物0.2μmol/L,及2.0μLDNA模板(約含5ngDNA)。擴增程序為:95°C5min;94°C1min,58°C1min,72°C1.5min,共30個循環(huán);72°C10min。用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增片段的大小與特異性。圖1莫高窟第98窟剖面與平面位置信息Fig.1PlaneandsectionprofilesinformationofCave98atMogaoGrottoes圖2莫高窟第98窟微生物病害典型區(qū)域(A,B)及實驗樣品采集(C,D)Fig.2Typicalmicrobialdiseaseareas(A,B)andexperimentalsamplecollecting(C,D)inCave98,MogaoGrottoes
【作者單位】： 敦煌研究院保護研究所;國家古代壁畫與土遺址保護工程技術研究中心;甘肅省古代壁畫與土遺址保護重點實驗室;古代壁畫保護國家文物局重點科研基地;蘭州大學生命科學學院;
【基金】：國家自然科學基金項目(No.31260136,31070344) 國家文物局文物保護科學與技術研究重點課題(No.20110208) 國家科技支撐計劃項目(No.2013BAC07B02) 敦煌莫高窟第98窟保護修復工程項目
【分類號】：K879.41;Q938

【參考文獻】

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1 李最雄;敦煌石窟的保護現(xiàn)狀和面臨的任務[J];敦煌研究;2000年01期

2 張國彬,薛平,侯文芳,郭青林;游客流量對莫高窟洞窟內(nèi)小環(huán)境的影響研究[J];敦煌研究;2005年04期

3 徐淑青;莫高窟第98窟現(xiàn)狀調查報告[J];敦煌研究;2005年05期

4 武發(fā)思;汪萬福;賀東鵬;陳港泉;馬燕天;張曉東;馮虎元;;嘉峪關魏晉墓腐蝕壁畫細菌類群的分子生物學檢測[J];敦煌研究;2011年06期

5 張f:林;唐德平;張楠;王婉如;張東明;武發(fā)思;薛林貴;;敦煌莫高窟中細菌多樣性的研究[J];微生物學通報;2012年05期

【共引文獻】

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1 吳利;余育和;馮偉松;;PCR-DGGE技術在環(huán)境微型生物群落研究中的應用[J];合肥師范學院學報;2010年06期

2 趙躍光;;分子水平上的微生物研究技術與方法進展[J];安徽農(nóng)學通報(上半月刊);2009年17期

3 馬少杰;趙勇;戴習林;潘迎捷;;南美白對蝦養(yǎng)殖系統(tǒng)中氨氧化菌多樣性研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2008年10期

4 李懷;關衛(wèi)省;歐陽二明;王曉慧;張杰;;DGGE技術及其在環(huán)境微生物中的應用[J];環(huán)境科學與管理;2008年10期

5 鄒莉;黃藝;謝曙光;;武進港浮游微生物群落研究[J];北京大學學報(自然科學版);2011年03期

6 方明珠;王晏民;侯妙樂;;基于ArcGIS Engine的館藏壁畫病害調查[J];北京建筑工程學院學報;2010年01期

7 劉云國;周海舟;馮寶瑩;樊霆;潘翠;;錳污染稻田土壤微生物群落結構和遺傳多樣性研究[J];湖南文理學院學報(自然科學版);2007年04期

8 劉瑋;鄧光華;張嘉超;楊清培;;不同施肥處理對毛竹根際微生物影響及其PCR-DGGE分析[J];東北林業(yè)大學學報;2011年05期

9 鄭彩霞,秦全勝,汪萬福;敦煌莫高窟窟區(qū)林地土壤水分的入滲規(guī)律[J];敦煌研究;2001年03期

10 汪萬福,馬贊峰,藺創(chuàng)業(yè),徐淑青,劉復玳;昆蟲對石窟壁畫的危害與防治研究[J];敦煌研究;2002年04期

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1 高永超;遲建國;邱維忠;王加寧;張強;;分子生物學技術在污染土壤修復中的應用[A];2011中國環(huán)境科學學會學術年會論文集（第二卷）[C];2011年

2 劉新春;吳成強;楊清香;楊敏;;PCR-DGGE方法的建立及其在微生物生態(tài)群落分析中的應用探討[A];微生物生態(tài)學研究進展——第五屆微生物生態(tài)學術研討會論文集[C];2003年

3 羅海峰;齊鴻雁;張洪勛;;不同DNA聚合酶對PCR-DGGE研究土壤微生物多樣性的影響[A];微生物生態(tài)學研究進展——第五屆微生物生態(tài)學術研討會論文集[C];2003年

4 趙立平;;分子生態(tài)學與微生物群落的動力學監(jiān)測、結構解析及功能調控[A];微生物生態(tài)學研究進展——第五屆微生物生態(tài)學術研討會論文集[C];2003年

5 楊清香;張昱;楊敏;;污水處理系統(tǒng)中微生物生態(tài)群落分析技術進展[A];微生物生態(tài)學研究進展——第五屆微生物生態(tài)學術研討會論文集[C];2003年

6 呼慶;齊鴻雁;張洪勛;;應用PCR—DGGE研究施用BT生物農(nóng)藥對農(nóng)田土壤細菌群落的影響[A];生態(tài)學與全面·協(xié)調·可持續(xù)發(fā)展——中國生態(tài)學會第七屆全國會員代表大會論文摘要薈萃[C];2004年

7 錢俊龍;熊櫻菲;潘小倫;;從10種期刊的文獻計量分析看中國文物保護的現(xiàn)狀和發(fā)展[A];中國文物保護技術協(xié)會第三次學術年會論文集[C];2004年

8 汪萬福;藺創(chuàng)業(yè);王濤;馬贊峰;;仿愛夜蛾成蟲排泄物對敦煌石窟壁畫的損害及其治理[A];中國文物保護技術協(xié)會第四次學術年會論文集[C];2005年

9 費小路;劉靜;王菊琳;;中國古代彩繪顏料和染料種類及檢測方法的研究進展[A];中國文物保護技術協(xié)會第五次學術年會論文集[C];2007年

10 黃俊文;;甘露寡糖在養(yǎng)豬業(yè)中的研究應用進展[A];豬營養(yǎng)與飼料研究進展——第四屆全國豬營養(yǎng)學術研討會論文集[C];2003年

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1 李振東;東祁連山高寒草地優(yōu)勢植物內(nèi)生細菌多樣性研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2010年

2 胡安輝;高效短程硝化/厭氧氨氧化富集培養(yǎng)物的研究[D];浙江大學;2010年

3 肖升木;分子生態(tài)學技術在環(huán)境微生物群落與功能基因中的應用研究[D];東華大學;2010年

4 嚴耿升;干旱區(qū)土質文物劣化機理及材料耐久性研究[D];蘭州大學;2011年

5 徐e，

本文編號：2532478