本文關(guān)鍵詞：結(jié)直腸癌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞相互作用過程中成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為和Cx43表達(dá)研究

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【摘要】：結(jié)直腸癌是一類常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,據(jù)世界癌癥協(xié)會(huì)2014年的研究表明,結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率仍然高居第三位。雖然到目前為止,結(jié)直腸癌的研究已取得較多成果,但腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、耐藥性等問題仍然存在,其發(fā)病機(jī)制并未完全明確。因此,深入研究結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的調(diào)節(jié)因素和機(jī)制,對(duì)于尋找有效的治療靶點(diǎn)至關(guān)重要。腫瘤間質(zhì)對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著重要作用。成纖維細(xì)胞是腫瘤間質(zhì)的重要組成成分,影響著腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、血管生成等,且與腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。腫瘤間質(zhì)中成纖維細(xì)胞活化為癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)是腫瘤細(xì)胞-成纖維細(xì)胞相互作用過程中的一個(gè)重要過程,是成纖維細(xì)胞發(fā)揮腫瘤調(diào)節(jié)作用的關(guān)鍵�？p隙連接蛋白43 (connexin43, Cx43)是一種重要的連接子蛋白,是構(gòu)成細(xì)胞間縫隙連接通道(gap junction)的基本組成成分,是細(xì)胞間縫隙連接通訊(gap junction intercellular communication,GJIC)建立的基礎(chǔ)。我們小組前期在臨床樣本中發(fā)現(xiàn),Cx43在結(jié)直腸癌浸潤(rùn)前沿高表達(dá)。體外運(yùn)用雙層細(xì)胞球和直接共培養(yǎng)模型模擬結(jié)直腸癌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞相互作用證實(shí)Cx43在結(jié)直腸癌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞接觸區(qū)域表達(dá)升高,且成纖維細(xì)胞被活化。且用結(jié)直腸癌細(xì)胞上清培養(yǎng)成纖維細(xì)胞可促進(jìn)成纖維細(xì)胞活化,激活成纖維細(xì)胞中TGFβ信號(hào)和Wnt信號(hào)。而雙層共培養(yǎng)模型,將結(jié)直腸癌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞間接共培養(yǎng)也發(fā)現(xiàn),相互作用可促進(jìn)成纖維細(xì)胞活化,上調(diào)腫瘤細(xì)胞Cx43表達(dá),其機(jī)制與腫瘤細(xì)胞Wnt信號(hào)激活有關(guān)。這表明相互作用可促進(jìn)Cx43表達(dá),也提示我們,腫瘤間質(zhì)中成纖維細(xì)胞的活化可能與Cx43表達(dá)有關(guān)。但相互作用對(duì)成纖維細(xì)胞功能行為有何影響,其Cx43表達(dá)是否有改變,二者是否相關(guān)?這些仍不清楚。有研究發(fā)現(xiàn),Cx43對(duì)成纖維細(xì)胞的活化、增殖和遷移等具有調(diào)節(jié)作用,提示Cx43可能參與成纖維細(xì)胞功能行為的調(diào)節(jié)。因此,我們的目的是研究在結(jié)直腸癌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞相互作用過程中成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為和Cx43的表達(dá)情況,并探究其可能的機(jī)制和意義。為證實(shí)以上猜想,我們構(gòu)建結(jié)直腸癌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞相互作用模型,觀察成纖維細(xì)胞的生物學(xué)行為改變。結(jié)果表明,相互作用后成纖維細(xì)胞活化標(biāo)記α-SMA、FAP、FSP1表達(dá)上調(diào),其(S+G2)期細(xì)胞百分比由32%上升至40%以上,24h和48 h遷移范圍增加�；罨衫w維細(xì)胞Cx43上調(diào),與此同時(shí),Wnt信號(hào)被激活,抑制Wnt通路可下調(diào)成纖維細(xì)胞活化標(biāo)記α-SMA和Cx43表達(dá)。TGF β1可促進(jìn)成纖維細(xì)胞Wnt信號(hào)激活,上調(diào)Cx43表達(dá),促進(jìn)成纖維細(xì)胞活化、增殖和遷移。但Cx43的上調(diào)并未影響成纖維細(xì)胞的GJIC功能。據(jù)報(bào)道,Cx43是Wnt下游一個(gè)靶基因,能調(diào)節(jié)成纖維細(xì)胞活化、增殖和遷移等,由此我們推測(cè)結(jié)直腸癌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞相互作用通過激活Wnt信號(hào),上調(diào)Cx43表達(dá),以一種非通道依賴的方式,促進(jìn)成纖維細(xì)胞活化、增殖、遷移等生物學(xué)行為改變。通過研究,我們得出以下結(jié)論：1.結(jié)直腸癌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞相互作用促進(jìn)成纖維細(xì)胞活化、增殖和遷移；2.相互作用促進(jìn)成纖維細(xì)胞Wnt信號(hào)激活,Cx43表達(dá)上調(diào)；3.Wnt信號(hào)促進(jìn)成纖維細(xì)胞活化,上調(diào)Cx43表達(dá)；4. TGF β1促進(jìn)Wnt信號(hào)激活、Cx43表達(dá)和成纖維細(xì)胞活化；5.Cx43表達(dá)上調(diào)并不影響成纖維細(xì)胞GJIC功能,提示Cx43可能通過非通道依賴機(jī)制發(fā)揮作用。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)直腸癌 相互作用 活化成纖維細(xì)胞 Cx43 GJIC Wnt信號(hào)
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R473.73
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 英文縮略語(yǔ)9-13
• 1 引言13-17
• 2 主要的儀器設(shè)備和試劑17-27
• 2.1 儀器設(shè)備17-19
• 2.2 試劑19-21
• 2.3 所用溶液配方21-27
• 3 材料和方法27-39
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料27
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法27-39
• 4 結(jié)果39-55
• 4.1 結(jié)直腸癌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞相互作用促進(jìn)成纖維細(xì)胞活化、增殖和遷移,但不影響成纖維細(xì)胞凋亡39-46
• 4.2 結(jié)直腸癌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞相互作用后活化成纖維細(xì)胞Cx43表達(dá)增加46-48
• 4.3 結(jié)直腸癌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞相互作用促進(jìn)成纖維細(xì)胞Wnt信號(hào)激活48-52
• 4.4 Wnt信號(hào)抑制劑部分抑制成纖維細(xì)胞活化,下調(diào)Cx43表達(dá)52-53
• 4.5 活化成纖維細(xì)胞中Cx43表達(dá)上調(diào)不影響成纖維細(xì)胞GJIC功能53-55
• 5 討論55-61
• 6 結(jié)論61-62
• 參考文獻(xiàn)62-65
• 綜述65-78
• 參考文獻(xiàn)74-78
• 作者簡(jiǎn)歷78-79
• 1 教育背景78
• 2 在讀期間取得的科研成果78-79
• 3 在讀期間取得的獎(jiǎng)勵(lì)79

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6 張誠(chéng)s，

本文編號(hào)：774364