朊病毒是一種可感染人和動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的傳染性蛋白質(zhì),其引起的疾病包括人的克雅氏病、庫魯病、吉斯曼綜合征、致死性家族失眠癥以及動物的羊瘙癢癥、瘋牛病等,死亡率達100%。目前普遍認為其致病原因是具有正常生理結構的朊蛋白PrPc在未知因素誘導下發(fā)生異常折疊轉(zhuǎn)變?yōu)榫叩鞍酌缚剐缘闹虏‰玫鞍譖rPSc。在朊病毒感染的早期階段,異常折疊的PrPsc蛋白可激發(fā)多種應激反應引起神經(jīng)元的損傷,同時被感染的神經(jīng)元試圖通過自噬或凋亡的方式以達到清除PrPsc的目的；在感染的晚期階段,由于大量的PrpSc蛋白無法被及時清除,引起的神經(jīng)毒性造成了一系列的病理學改變,如神經(jīng)元的死亡、星型膠質(zhì)和小膠質(zhì)細胞的增生、淀粉樣斑塊沉積和腦組織內(nèi)空泡樣變性等。盡管目前對朊病毒引起神經(jīng)元死亡的機制已有一定了解,但其詳細的機制尚未闡明。長期以來的研究認為成熟的神經(jīng)元屬于終末分化的細胞,處于不可分裂的狀態(tài),無法越過Go期而進入細胞周期。然而近年來的研究表明在阿爾茲海默癥（Alzheimer’s disease, AD）和帕金森癥（Parkinson’s disease, PD）等中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病患者的腦組織切片中檢測到神經(jīng)... 

【文章來源】：江蘇大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：127 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
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中英文縮寫對照表
第一章 緒論
    1.1 朊病毒病
        1.1.1 朊病毒病概述
        1.1.2 朊蛋白的結構和功能
        1.1.3 朊病毒的傳播和致病機理
        1.1.4 朊病毒相關轉(zhuǎn)基因小鼠
        1.1.5 PrP毒性肽106-126
        1.1.6 朊病毒病的細胞模型
        1.1.7 其他疾病中朊病毒病樣的傳播形式
        1.1.8 朊病毒病的輔助診斷、檢測和治療
    1.2 Polo樣激酶
        1.2.1 PLK的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 PLK的結構及生物學功能
        1.2.3 PLKs的表達和功能
        1.2.4 PLK1/3的底物及其在G2/M期的作用
        1.2.5 PLK1/3在腫瘤組織中的表達變化及治療
        1.2.6 PLKs與神經(jīng)退行性疾病
        1.2.7 細胞周期再進入與神經(jīng)退行性疾病
第二章 研究目的、方法、實驗設計方案和意義
    2.1 研究目的
    2.2 研究方法
    2.3 實驗設計方案
        2.3.1 朊病毒病倉鼠腦組織中PLKs信號通路的變化
        2.3.2 PLKs在腦組織中的細胞定位與分布
        2.3.3 PrP毒性片段106-126處理細胞后PLKs及底物和細胞周期的變化
        2.3.4 PLK1/3與PrP~C、PrP~(Sc)的相互作用及作用區(qū)域
        2.3.5 PLK3致神經(jīng)細胞凋亡作用機制的初步研究
    2.4 本研究的意義
第三章 朊病毒病中PLK1/3信號介導神經(jīng)元細胞周期的阻滯
    3.1 實驗儀器和材料
        3.1.1 主要儀器及設備
        3.1.2 主要化學試劑,試劑盒
        3.1.3 常用緩沖液及溶液
        3.1.4 抗體
        3.1.5 朊病毒毒株、細胞株及細胞株菌株
    3.2 實驗方法
        3.2.1 腦組織勻漿的制備
        3.2.2 細胞的復蘇傳代和凍存
        3.2.3 原代小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元的細胞培養(yǎng)
        3.2.4 SMB感染性細胞系的培養(yǎng)
        3.2.5 朊病毒類似肽
        3.2.6 細胞瞬時轉(zhuǎn)染
        3.2.7 免疫印跡
        3.2.8 組織免疫化學染色
        3.2.9 組織和細胞免疫熒光染色
        3.2.10 統(tǒng)計學處理
    3.3 實驗結果
        3.3.1 朊病毒病終末期倉鼠腦組織勻漿中PLKs的表達變化
        3.3.2 朊病毒病終末期倉鼠腦組織切片中PLKs的表達變化
        3.3.3 PLK1和PLK3信號在腦組織中的定位與分布
        3.3.4 PLK1和PLK3在朊病毒感染細胞系中的變化
        3.3.5 朊病毒病倉鼠腦組織中PLKs信號通路與細胞周期的變化
        3.3.6 PrP106-126肽處理后小鼠原代皮質(zhì)神經(jīng)元PLKs和細胞周期的改變
    3.4 討論
第四章 PLK3介導對異常朊蛋白的降解作用
    4.1 實驗儀器和材料
        4.1.1 主要化學試劑,試劑盒
        4.1.2 抗體
        4.1.3 質(zhì)粒載體和蛋白
        4.1.4 PLK3 RNAi序列
    4.2 實驗方法
        4.2.1 RNAi序列的瞬時轉(zhuǎn)染
        4.2.2 免疫共沉淀實驗
        4.2.3 構建真核質(zhì)粒
        4.2.4 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化、提取和鑒定
        4.2.5 GST-PLK3原核蛋白的表達和純化
        4.2.6 GST pull-down
        4.2.7 細胞膜蛋白和胞漿蛋白的組分提取
        4.2.8 蛋白酶K抗性的檢測
    4.3 實驗結果
        4.3.1 PLK3與PrP蛋白在體外的相互作用
        4.3.2 正常倉鼠和263K倉鼠腦勻漿中PrP和PLKs形成復合物
        4.3.3 PLK3的PBD和KD區(qū)與PrP的相互作用
        4.3.4 過表達正常和突變PrP蛋白對內(nèi)源性PLK3表達水平的影響
        4.3.5 過表達PLK3對PrPs表達的影響
        4.3.6 PLK3清除異常PrP依賴于KD區(qū)
        4.3.7 RNAi沉默PLK3蛋白對PrPs表達的影響
        4.3.8 在SMB-S15細胞中過表達PLK3對Prp~(SC)聚集的影響
        4.3.9 PLK3通過溶酶體途徑降解異常PrP
    4.4 討論
第五章 結論及展望
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
攻讀博士學位期間發(fā)表的學術論文


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3573168