RNA干擾（RNA interference,RNAi）是普遍存在于真核生物體內(nèi)的一種能夠?qū)μ囟ǖ膍RNA序列進行降解的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機制。在包括肝癌在內(nèi)的多種癌癥疾病的治療研究中具有良好的應用前景。然而,由于RNA本身具有的易降解、不易穿過細胞膜等特點,為RNAi的臨床應用制造了很大的阻礙。新型基因載體能夠提高RNA的遞送效率,但其生物相容性、RNA釋放以及對RNAi效率的影響需要更加深入的評估。生物相容性是評價非病毒載體與機體相互作用的一個指標,載體與免疫系統(tǒng)的相互作用不僅反映了免疫系統(tǒng)對載體的應答情況,也是衡量載體是否對人體組織損傷程度的一個指標。本文以不同N/P比（1：2、1：1、2：1、5：1和10：1）使LHRH-TAT-殼聚糖（LHRH-TAT-chitosan,TLC）以及未進行任何修飾的低分子量殼聚糖（low molecular weight chitosan,LMWC）包裹siRNA后形成TLC/siRNA納米復合體。與未進行任何修飾的殼聚糖相比,TLC具有更好的siRNA結(jié)合能力。以不同N/P（10：1、20：1）與siRNA形成納米復合體后,其粒徑分布于90-150... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２納米復合物與細胞的相互作用??Ｆｉｇ．?２?Ｐｏｌｙｐｌｅｘｅｓ?ｉｎｔｅｒａｃｔ?ｗｉｔｈ?ｃｅｌｌ．??

解決上述問題的一個方法是利用質(zhì)子海綿效應，即當溶酶體內(nèi)ｐＨ下降時，??陽離子聚合物載體將大量捕獲質(zhì)子，從而引起ｃｒ的內(nèi)流，溶酶體滲透性腫脹后??破裂，內(nèi)涵體中的物質(zhì)最終釋放到細胞質(zhì)中（圖３）。另外，將經(jīng)由內(nèi)吞所造成的??ｐＨ變化作為一個＂開關＂，使其中包裹的核酸或藥品在ｐＨ變小時得到充分釋??放，也可Ｗ作為有效物質(zhì)在細胞內(nèi)部釋放的一個標志。根據(jù)這些概念，吳傳保等??于２００８年將己二胺、二己胺、Ｈ己胺＆及乙醇胺為陽離子聚合物材料，用酸堿??滴定法探討質(zhì)子海綿效應的根源。研究表明，質(zhì)子海綿效應與上述材料中氨基Ｂ??位甚至更遠的位置是否有強電子吸附基團有關［４５ｌ．??ＴＡＴ蛋白是由ＨＩＶ病毒基因編碼的反式激活因子（ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ?ｏｆ??ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ，?ＴＡＴ），通過與反式激活應答ＲＮＡ序列的結(jié)合，起始基因的轉(zhuǎn)錄。??在該多膚的中部序列中，包含一個由２個賴氨酸和６個精氨酸殘基組合而成的高??豐度陽離子區(qū)域，在Ｎ－端有一個ａ－螺旋結(jié)構(gòu)ｔＷ。ＴＡＴ通過細胞膜的相關機制尚??不清楚。早期的研巧中

Ｆｉｇ．?１０?Ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?也ｅ?ｂｒｉｇｈ化。ｓ?ｏｆ?ｂａｎｄｓ??利用Ｉｍａｇｅ?Ｊ軟件分析ＡＦＰ條帶與內(nèi)參ｐ－ａｃｔｉｎ條帶亮度，兩者的比值可Ｗ??反映該基因的抑制情況。由表５與圖１０可知，ＨｅｐＧ２細胞的ＡＦＰ基因表達沒有??受到明顯的抑制，而Ｂｅｌ７４０２?＾＾＾及Ｌ０２兩種細胞的ＡＦＰ－ｍＲＮＡ則受到了明顯的??抑制。對Ｌ０２的作用能夠表明ＴＰＰ的連接影響了載體的祀向性。陽性對照的結(jié)??果顯示，ＡＦＰ－ｓｉＲＮＡ對ＨｑｊＧ２的影響比Ｂｅｌ７４０２大。此ＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果需要進一??步驗證。??４．討論??人們通常利用化學修飾的方式為常規(guī)的載體賦予一定的特性，使其獲得更好??的組織相容性。ＴＰＰ主要用于殼聚糖載體的修飾，近期的研究也將ＴＰＰ應用于??ＰＥＧｂＰＰＡ載體中ＰＰＡ氨基端的修飾。在ＴＰＰ的作用下，兩種載體均獲得了更??加穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)和粒徑，Ｗ及更高的腫瘤細胞殺傷力。因此，本文試圖利用ＴＰＰ??來修飾多膚載體ＬＨＲＨ－ＭＰＧ＆ＷＵ，并觀察ＴＰＰ對載體各種指標的影響。??３９??


本文編號：3409020