背景據(jù)報道全世界有超過85%的成年人經(jīng)受過頸腰痛的痛苦。因頸腰疼痛到醫(yī)院就診的病人數(shù)位居第2位,僅次于上呼吸道感染,尤其對于兒童和青年人頸椎椎間盤源性疼痛而言,雖然發(fā)病率罕見,但由于生活方式的改變,社會心理因素(如環(huán)境或情感等)均與之有較大的關(guān)系。此疾病不單給患者造成了很大的疾苦,也造成巨額的醫(yī)療成本損失。研究認為引起頸腰疼痛的主要病因是由于椎間盤退變所引起,生活節(jié)奏快和工作壓力大的現(xiàn)代生活方式使得椎間盤退變的發(fā)病年齡逐漸趨于年輕化,因此對該疾病的研究引起國內(nèi)外臨床醫(yī)生和科研工作者的廣泛重視。在椎間盤退變早中期階段一般采用緩解疼痛的姑息性理化療法；晚期階段則以有創(chuàng)性手術(shù)治療為主。但目前的醫(yī)療技術(shù)尚未找到一種治愈椎間盤退變的方法。自1987年Friedenstein等發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細胞以來,其在再生醫(yī)學領(lǐng)域的應(yīng)用得到飛速發(fā)展。間充質(zhì)干細胞來源廣泛,具有很強的增殖和多向分化潛能,目前已廣泛應(yīng)用于多種疾病的免疫和再生治療的應(yīng)用研究。相應(yīng)地,干細胞再生醫(yī)學的發(fā)展也為椎間盤治療帶來了新的希望。研究者將具有多向分化潛能的間充質(zhì)干細胞通過注射器注入到實驗動物退變的髓核內(nèi),可再生修復(fù)髓核組織。但是由于髓核組織內(nèi)壓力過大,注射的干細胞懸液容易通過注射針孔發(fā)生返流而產(chǎn)生其他副作用,諸如形成骨贅等引起額外的疼痛。再者,退變的髓核組織內(nèi)環(huán)境相當惡劣,注入的干細胞可能大部分無法耐受而走向凋亡或死亡。生物醫(yī)學工程的發(fā)展為干細胞再生治療椎間盤退變提出了新的策略,組織相容性生物材料可以包裹干細胞以提供保護和微環(huán)境支持,且水凝膠等材料可以為細胞提供類似在體的三維環(huán)境。一些溫敏性水凝膠的體內(nèi)原位成膠性能,使其成為良好的可注射的組織工程材料,因此可用于微創(chuàng)修復(fù)椎間盤退變。然而已有報道表明,水凝膠的機械性能較差,不能為高負載的椎間盤提供足夠的力學支持。再者,溫敏性水凝膠在未成膠前的細胞混懸液仍然可能被較高的髓核內(nèi)壓擠出針孔外。椎間盤退變與下腰痛有關(guān)已被廣泛證實,人體椎間盤內(nèi)細胞外基質(zhì)具有高特異性的特點,其對物理化學微環(huán)境要求較高,椎間盤內(nèi)細胞數(shù)量少,并且生化代謝緩慢,此微小環(huán)境還不能夠被目前的細胞培養(yǎng)技術(shù)或動物模型所模擬反映。器官培養(yǎng)模型技術(shù)的發(fā)展具有很好的潛力,通過組織內(nèi)三微環(huán)境相互作用,精確力學載荷和化學干預(yù)可反映人體間盤內(nèi)的微環(huán)境。椎間盤器官培養(yǎng)技術(shù)發(fā)展較快,從先前比較單一的溶劑培養(yǎng)到后來的計算機精確控制干預(yù),到采用多腔室、多軸系統(tǒng)維持間盤結(jié)構(gòu)完整性、控制組織營養(yǎng)供應(yīng),模擬椎間盤生理條件或?qū)嵤┝W加載破壞間盤組織等。通過一系列施加條件阻止細胞外基質(zhì)膨脹及增加營養(yǎng)傳輸,成熟的器官培養(yǎng)實驗?zāi)軌蚪鉀Q一些關(guān)鍵科學問題。由于犬椎間盤具有高度重復(fù)性、一致性、相似的成分比例和代謝速率特點,這種動物椎間盤模型能夠為治療藥物篩選的研發(fā),尋求退變病理過程中的力學機制轉(zhuǎn)變和生理生化反應(yīng)機理研究。因此,這種模型可初步用于探索抑制椎間盤內(nèi)分解代謝和促進合成代謝的治療機制。清華大學合作課題組前期研究工作發(fā)明了一種新型可注射微冰膠,這種微型冰膠以生物相容性材料聚乙二醇丙烯酸(Poly (ethylene glycol), PEG)為原材料,加入一定濃度化學交聯(lián)劑低溫緩慢成膠,冷凍干燥冰晶而獲得多孔隙結(jié)構(gòu)。PEG微冰膠大小和形狀可控,伸縮性能良好,體內(nèi)可降解。此種微冰膠與水凝膠干細胞細胞混懸液結(jié)合,為干細胞提供了不被體內(nèi)退變微環(huán)境損傷的三維支持；同時,可以實現(xiàn)非溫敏性水凝膠的注射治療方式；還可以增強水凝膠的機械性能,形象地講,微冰膠為水凝膠提供了骨架支持。同時,微冰膠良好的彈性使其可以通過臨床微量注射器針頭(27G)實現(xiàn)注射治療,且形態(tài)立即恢復(fù),不會被擠出針孔外,并且細胞極少發(fā)生死亡。經(jīng)過定向誘導(dǎo)能夠高效促進(Mesenchymal Stem Cells, MSCs)向髓核樣細胞分化。從這些特征看來,微冰膠是潛在的治療椎間盤退變的細胞載體系統(tǒng)。因此我們認為本研究的意義在于,一種新型可注射和可降解的細胞載體和傳輸系統(tǒng)有望提高椎間盤退變的再生治療效果。首先,微冰膠可為MSCs提供保護及三維支持,輔助干細胞治療可發(fā)揮再生修復(fù)的作用；再者,可注射微冰膠系統(tǒng)實現(xiàn)了治療的微創(chuàng)性；其次,微冰膠良好膨脹收縮性能使其注射后不會從針孔擠出,最大程度的保留了細胞和減少了因細胞溢出而產(chǎn)生的副作用；第四,微冰膠良好的機械性能可為脊柱提供一定程度的力學支撐；最后,微冰膠生物相容性好,不會產(chǎn)生毒副作用。椎間盤退變的早期發(fā)現(xiàn)主要依賴于核磁影像學(Magnectic Reasonance Imaging, MRI)的檢測,生物學治療的檢測結(jié)果一直采用傳統(tǒng)MRI進行隨訪觀察。Pfirrmann分級是評估椎間盤退行性病變的經(jīng)典檢測手段,但由于Pfirrmann分級是一種半定量檢測方法,因此需要一種更為早期、敏感的影像學檢測技術(shù)來更為準確的評估退變程度或治療效果。傳統(tǒng)的組織學技術(shù)是檢驗椎間盤退變的金標準,但由于有創(chuàng)操作無法在臨床中實施。T2弛豫時間值(T2 relaxation times)是應(yīng)用T2圖(T2 mapping)進行量化測定的指標,可以通過描述氫質(zhì)子系統(tǒng)(組織)橫向馳豫衰減來量化反映組織水分子狀態(tài)的變化,通過衡量不同回波時間的MRI信號強度計算得出值。T2弛豫時間成像是MRI研究組織水分子狀態(tài)的一項新技術(shù),國內(nèi)外已有報道椎間盤內(nèi)髓核的T2值與膠原的排列方向、膠原、蛋白及水的含量相關(guān),能夠定量地反映髓核內(nèi)生化成分的改變,因此通過定量T2弛豫時間成像技術(shù)能夠反映早期椎間盤內(nèi)生化的改變,為早期椎間盤的生化改變及鑒定提供一種新的方法。綜上所述,首先,本研究擬將PEG制備的微冰膠材料,通過體外器官長期培養(yǎng)觀察其對脂肪來源間充質(zhì)干細胞(Adipose-Derived Stem Cells, ADSCs)的存留情況及對犬退行性椎間盤退行性病變的修復(fù)研究,期望這種新型可注射微冰膠材料不僅可以為ADSCs提供三維培養(yǎng)環(huán)境,而且還具有防止注射細胞滲漏,延長其作用時間,提高干細胞的生物學活性及修復(fù)椎間盤退變功能。其次,本研究首先通過測量青年人頸椎間盤MRI T2弛豫時間值,量化分析頸椎間盤早期含水量、大分子蛋白多糖和膠原纖維成分等的生化狀態(tài)變化與傳統(tǒng)Pfirrmann半定量分級之間的關(guān)系,探究T2弛豫時間成像技術(shù)在早期頸椎間盤退行性病變中應(yīng)用的可行性,為MRI對椎間盤退行性改變的客觀評價提供量化標準。目的1、應(yīng)用PEG微冰膠(Microcryogels, MGs)裝載包裹MSCs的海藻酸鈉水凝膠(PEG-Microcryogels, PMs),體外器官培養(yǎng)觀察PMs支架材料對ADSCs的存留觀察及微環(huán)境對MSCs的影響；2、體內(nèi)觀察利用PMs支架材料裝載ADSCs長期修復(fù)退變椎間盤的可行性。3、通過測量青年志愿者頸椎間盤髓核MRI T2弛豫時間值,探討T2弛豫時間成像技術(shù)在早期頸椎間盤退變中應(yīng)用的可行性。方法1、PMs微冰膠制備：用計算機輔助系統(tǒng)制圖軟件制作微孔陣列圖形,以聚甲基丙烯酸酯(Polymethyl methacrylate, PMMA)薄板為原料,在激光雕刻機上制作微孔模具板,長75cm,寬25cm,厚300μm,約600個孔每板；為增加模具板親水性,等離子處理2min;10%質(zhì)量/體積(Weighte/volum, w/v) PEGDA與0.2%w/v四甲基乙二胺(Tetramethylethylenediamine, TEMED)和0.5% w/v過硫酸銨(Ammonium Persulfate, APS)配成微冰膠預(yù)備液；用刮片的方法使微冰膠預(yù)備液進入每一個微孔,置于零下20度成膠；真空冷凍干燥形成多空聯(lián)通結(jié)構(gòu)(-45℃,30min)；微冰膠浸泡于雙蒸水中可以即可從模具板上脫出,收集到70μm漏網(wǎng),用蒸餾水清洗后濾除多余水分；將微冰膠置于小皿中鋪成薄層,二次冷凍備用。使用之前,冷凍干燥后紫外線(Ultraviolet, UV)滅菌或環(huán)氧乙烷滅菌后即可裝載細胞。2、選用4個含有兩段完整的椎骨及椎間盤的運動節(jié)段(T12-L1, L2-L3, L4-L5, L6-L7)的椎間盤組織,利用10ml注射器和21G針頭從纖維環(huán)(Annulus Fibrosus, AF)扎入,抽取髓核(Nucleus Pulposus, NP)組織(約25mmg)。吸取40μl1×105 Luc-GFP的MSCs懸液,另一組為40μl負載相同數(shù)量MSCs的PMs重懸于0.5%透明質(zhì)酸溶液,均由21G針頭注射入髓核進行對比,于器官營養(yǎng)液中培養(yǎng)一月后,每5天觀察生物熒光圖像,評估細胞在NP中的停留,第30天福爾馬林液固定椎間盤并用于組織學染色分析。3、選用15只比格犬作為實驗動物,用髓核抽吸法建立犬椎間盤退變模型(L3-4/L4-5/L5-6/L6-7),動物實施造模術(shù)后4周行腰椎正側(cè)位X線和MRI檢查建立犬椎間盤退行性病變椎間盤模型,證實退變模型造模成功后,對剩余12只動物模型行ADSCs移植手術(shù)。每只犬的椎間盤被分為4組：退變組(Sham,L3-4),單純干細胞注射組(MSCs, L4-5),單純材料注射組(PMs,L5-6),材料裝載干細胞移植組(PMs+MSCs,L6-7),其中L7-S1作為陰性對照組,不做任何處理。細胞移植術(shù)后4、8、12和24周進行動物腰椎正側(cè)位X線片及MRI檢查,量化椎間盤相對高度指數(shù)及髓核相對灰度指數(shù)；組織學評分觀察內(nèi)層纖維環(huán)破壞程度,術(shù)后12、24周處死動物取材,對髓核組織進行冰凍切片,利用熒光顯微鏡觀察冰凍切片綠色熒光蛋白表達情況；整體椎間盤及髓核組織普通切片,利用HE染色和番紅O染色觀察組織形態(tài)學變化,利用免疫組織化學染色觀察各組椎間盤周圍組織的Ⅱ型膠原、蛋白聚糖(ACAN)及移植組GFP的表達；并用EL1SA法檢測細胞蛋白多糖、Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原蛋白水平(PG,COL1和COL2)。4、對40例無任何癥狀的青年健康志愿者進行頸椎3.0 T MRI T2加權(quán)成像(T2 weighted image, T2 WI)和T2弛豫時間成像技術(shù)掃描。男19例,女21例,年齡18-25歲,平均年齡22.80±2.11歲,所有受試志愿者均無頸痛和頸椎部畸形/外傷/手術(shù)病史,C3-C7的T2WI和T2弛豫時間成像技術(shù)掃描均在GE Signa 3.0 T-HD-MRI掃描儀上實施,GE-ADW 4.3后處理工作站Functool軟件對原始數(shù)據(jù)進行處理,生成T2偽彩圖。在C3-C7髓核及前后纖維環(huán)內(nèi)分別放置感興趣區(qū)域(Region of Interest, ROIs),測量T2弛豫時間值。分別對每個頸椎間盤進行Pfirrmann (Ⅰ-Ⅴ)分級,分別評估性別之間、不同解剖部位之間的T2弛豫值,研究T2弛豫值與Pfirrmann退變級別之間的相關(guān)性。5、采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學分析(SPSS Inc., Chicago, IL, USA),用雙因素方差分析研究分組與時間的主效應(yīng)和交互效應(yīng),兩個重復(fù)測量因素的方差分析或Post Hoc進行多重平均值比較,Kappa檢驗評價觀察者IVDD分級的一致性。采用Pearson相關(guān)分析分別評價椎間盤NP和AF前后緣T2值與年齡、分級與年齡的相關(guān)性。三因素方差分析研究性別、解剖部位及解剖節(jié)段之間的交互效應(yīng),誤差限圖及受試者操作特點用于數(shù)據(jù)分析,P值小于0.05為差異有統(tǒng)計學意義,數(shù)據(jù)采用平均值±標準差表示。結(jié)果1、椎間盤注射GFP染色細胞后立即通過生物發(fā)光活體成像儀觀察,可以發(fā)現(xiàn)單純細胞注射組明顯的細胞滲漏,而PMs+MSCs注射組無滲漏現(xiàn)象,PMs+MSCs注射組能夠顯著存留細胞,細胞信號持續(xù)表達長達25天,而單純MSCs注射組在15天后即無法觀察到光子信號。大體觀察和HE染色可觀察到PMs+MSCs注射組能夠顯著維持椎間盤高度,而MSCs注射組明顯觀察到椎間盤高度減低。PMs+MSCs注射組中可以顯著保留髓核組織。番紅O染色顯示了椎間盤中的糖胺聚糖和少量的髓核細胞,PMs支架結(jié)構(gòu)仍然可以觀察到。免疫組化染色顯示PMs+MSCs注射組較強陽性表達ACAN和COL2。2、術(shù)后4周X線結(jié)果顯示造模節(jié)段椎間盤相對高度指數(shù)與對照組對有無差異(P0.05),而MRI檢查結(jié)果顯示髓核相對灰度指數(shù)下降,與對照組相比有統(tǒng)計學差異(P0.05),與正常組比較,其他組椎間盤高度在觀察時間內(nèi)持續(xù)降低。然而與造模組比較,MSCs注射組和PMs注射組在8、12、24周能夠顯著提高DHI%(P0.05)。PMs+MSCs注射組的椎間盤降低程度與其他組相比有明顯延緩(P0.05)。NC組的T2信號強度(Signal Intensity, SI)在觀察時間內(nèi)基本無任何變化,與NC對比后發(fā)現(xiàn),其他所有組的平均SI在4周時明顯減少(P0.05),而在8周時,PMs+MSCs注射組SI較其他治療組高(P0.05),MSCs注射組和PMs+MSCs注射組之間SI無顯著性統(tǒng)計學差異(P0.05),但與造模組對比具有顯著性統(tǒng)計學差異(P0.05)。24w時收集6只犬標本行HE染色,結(jié)果顯示造模組組織學評分為4-5,PMs+MSCs注射組評分為1-2分,而PMs注射組和MSCs注射組評分為1-3分。整個實驗過程中,NC組評分一致(0分)。HE染色顯示NC組椎間盤高度無任何狹窄,而單純造模組則顯示嚴重退變程度,表現(xiàn)為AF斷裂及高度降低,其他治療組則顯示髓核中度退變,但椎間盤高度變化均有一定程度的延緩。PMs+MSCs注射組顯示較為滿意的高度維持。番紅O染色顯示MSCs注射組和PMs+MSCs注射組內(nèi)細胞外基質(zhì)GAG類似,在sham組和部分PMs注射組中顯示髓核退變比較嚴重。然而,PMs注射組與MSCs注射組對椎間盤功能的維持效果類似。番紅O染色顯示治療后12周PMs注射組和PMs+MSCs注射組可見疑似PM網(wǎng)絡(luò)支架,在24周時,PM材料在所有切片中幾乎看不見,而在這兩組中可見疑似海藻酸鈉材料。24周時可在MSCs注射組和PMs+MSCs注射組均可觀察到少許GFP陽性MSCs。而在PMs+MSCs組內(nèi)似乎可見到更多陽性表達。ELISA檢測了各組髓核中SOX9、PG、COL2和COL1蛋白表達結(jié)果,與正常組對比,其他組軟骨相關(guān)標記物均顯著降低。然而,與sham組比較,PMs注射組和MSCs注射組的成軟骨相關(guān)蛋白表達顯著增高。與MSCs注射組比較,PMs+MSCs注射組內(nèi)SOX9和COL1表達無顯著性統(tǒng)計學差異(P0.05),而PG和COL2表達均顯著增加(P0.05)。1月后在單純MSCs注射組椎間盤周圍組織中可以明顯觀察到纖維化組織,而PMs+MSCs注射組則較少陽性表達,在單純MSCs組椎間盤注射周圍組織中也可以觀察到GPF-MSCs陽性染色表達。HE染色可以觀察到單純MSCs組椎間盤注射周圍組織較多纖維化組織,而在PMs+MSCs組則纖維化組織較其他組均明顯減少。COL2及PG染色顯示單純細胞注射組椎間盤注射周圍組織有強陽性表達。3、無任何癥狀性青年人頸椎椎間盤的Pfirrmann分級主要為Ⅰ-Ⅱ級,但Ⅲ級發(fā)病率仍較高(36%)。所有解剖節(jié)段的髓核T2值均比同節(jié)段的AF值高(P0.000),在同一節(jié)段,男女之間的髓核、前、后纖維環(huán)值均無顯著性統(tǒng)計學差異(P0.05)。髓核T2值與Pfirrmann值呈一致性降低。線性相關(guān)分析顯示Pfirrmann分級與髓核的T2值呈強負相關(guān)(P=0.000),但與纖維環(huán)的T2值無明顯相關(guān)性(P=0.854),然而,統(tǒng)計學分析顯示非退行性改變的椎間盤(PfirrmannⅠ-Ⅱ級)T2值極值分布較大。ROC曲線分析顯示Ⅰ級椎間盤的T2可信度界值為(62.03ms),Ⅱ級椎間盤的T2可信度界值為(54.60-62.03 ms),Ⅲ級椎間盤的T2可信度界值為(54.60 ms)。結(jié)論首先,體外器官培養(yǎng)模型顯示PMs能夠有效改善的細胞存留和存活狀態(tài)。PMs微冰膠輔助ADSCs移植犬退行性病變椎間盤髓核后能夠促進間充質(zhì)干細胞長期存活,并且能夠增加髓核內(nèi)細胞外基質(zhì)的含量及含水量,延緩椎間盤高度及亮度的降低,能夠有效延緩椎間盤退變的進展。該研究結(jié)果證實了PMs微冰膠輔助間充質(zhì)干細胞體內(nèi)修復(fù)退變椎間盤的潛能,可注射PMs在細胞治療椎間盤退變的方法中可能是一種十分有效的策略。其次,T2弛豫值為鑒別青年人早期椎間盤退變提供一種更加敏感及更有力的檢測手段,并且為青年人頸椎間盤的早期診斷提供可信的量化區(qū)間。
【學位單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：R681.53;R445.2
【部分圖文】：

值與腦脊液的灰度值比作為相對灰度指數(shù)Ｓ護３１。腰椎正側(cè)位Ｘ線平片及ＭＲＩ的??測量均由Ｈ個觀察員盲法進行測量，每幅圖像重復(fù)測量３次，取其平均值，作為??測量結(jié)果（若測量誤差較大，則數(shù)據(jù)舍去）（圖１－２）。??圖１－２椎間盤信號值的測量??Ｆｉｇ?１－２?Ｔｈｅ?ｓｉｇｎａｌ?ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ?０?ｆ?ｉｎｔｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｌ?ｄｉｓｃ??１丄８．２．３免疫組化染色和免疫巧光染色??①

利用慢病毒轉(zhuǎn)染犬脂肪源ＭＳＣｓ，使細胞表達綠色巧光蠶白（如Ｐ）??用于動物體內(nèi)實驗，使細胞融合表達莖火蟲英冠素酶（Ｌｕｃ）和ＧＦＰ用于體外器??官培養(yǎng)檢測（圖１－４Ａ）。單個犬運動節(jié)段的體外器官培養(yǎng)模型用于追蹤注射后的??細胞。通過生物光活體成像觀察注射到器官中的ＬＵＣ－ＧＦＰ＋陽性細胞，可Ｗ觀察??到細胞存留及存活情況。ＭＳＣ轉(zhuǎn)染病毒后用流式細胞術(shù)篩選陽性細胞，ＭＳＣｓ??可Ｗ高表達巧光素酶至少一個月Ｗ上。抽吸髓核后，利用２１Ｇ注射器針頭將懸??浮在０．５％的透明質(zhì)酸溶液中４０叫ＬＵＣ－ＧＦＰ＋?ＭＳＣｓ裝載的ＰＭｓ?（ＰＭｓ?＋?ＭＳＣｓ注??射組）混合液注射到椎間盤中，單純ＭＳＣｓ注射組作為對照組，如圖４Ｂ所示，??將每兩個運動節(jié)段培養(yǎng)在一個玻璃瓶中１月余。向椎間盤注射后立即通過生物??發(fā)光活體成像儀觀察，均發(fā)現(xiàn)單純ＭＳＣｓ注射組明顯的細胞滲漏，而ＰＭｓ?＋?ＭＳＣｓ??注射組均無滲漏現(xiàn)象（圖１－４Ｃ）。持續(xù)培養(yǎng)１月期間

??光素底物溶液中，記錄與細胞反應(yīng)產(chǎn)生的光子。如圖１－４Ｅ和Ｆ，分組與培養(yǎng)時??間的交互效應(yīng)對于ＰＭｓ＋ＭＳＣｓ均有盈著性統(tǒng)計學差異（Ｆ＝１７．２３１，Ｆ＝２４．４９２，??ＰＯ．ＯＯＯ）。而在５天、１０天、１５天的同一時間點，ＰＭｓ＋ＭＳＣｓ與ＭＳＣｓ組對比??均有顯著性統(tǒng)計學差異（Ｐ＜０．０５），２０天和２５天兩組對比均無顯著性差異??（Ｐ＞０．０５），ＰＭｓ＋ＭＳＣｓ注射組能夠顯著存留細胞，細胞信號持續(xù)表達長達２５??天。但單純ＭＳＣｓ注射組在１５天后即無法觀察到光子信號，１個單純ＭＳＣｓ注??射椎間盤組光子信號表達僅為１０天。??㈱壁芭’?ｉ：ｌｉＵｌｌ??Ｅ?ｃＭ?ｄ５?ｄ１０?ｄ１５?ｄ２０?ｄ巧?ＭＳＣｓ??只朽。ｎｎｆｉ．。］、?＊ｐｍｓ＋ｍｓｃｓ??Ｉ?起�。。停螅悖�??跑匪隱心??ＭＳＣｓ?ＰＭｓ?＋?ＭＳＣｓ??圖１－４?ＰＭｓ輔助的細胞注姑在體外椎間盤器官培養(yǎng)模型中展現(xiàn)了良好的防細胞滲漏及改善??細胞存留的巧能??（Ａ）利用慢病毒轉(zhuǎn)染法令犬脂肪來源ＭＳＣｓ表達ＧＦＰ?（上行）或Ｌｕｃ－ＧＦＰ?（下行），成像??系統(tǒng)為以１１１山１３１￥１５１１。（：８）體外器官培養(yǎng)系統(tǒng)示意圖，８〇１１１１玻璃瓶，瓶口巧松。（０生??物冷光成像顯示了細胞的直接注巧會導(dǎo)致嚴重滲漏

本文編號：2844795