【摘要】：研究背景膿毒癥(Sepsis)是重癥醫(yī)學(xué)科(Intensive care unit,ICU)的主要疾病,是機(jī)體對感染引起的全身系統(tǒng)性有損于機(jī)體的炎癥反應(yīng)。嚴(yán)重膿毒癥的患者可以并發(fā)多臟器功能損傷(Multiple organ dysfunction syndrome,MODS),而并發(fā)急性肺損傷(Acute lung injury,ALI)是臨床常見的危重情況,嚴(yán)重者可出現(xiàn)急性呼吸窘迫綜合癥(Acute respiratory distress syndrome,ARDS)。盡管抗感染及器官功能支持治療技術(shù)有了顯著的發(fā)展,膿毒癥誘導(dǎo)的ALI仍然是ICU臨床的巨大難題�；谏鲜鲈�,對膿毒癥導(dǎo)致ALI的研究迫在眉睫。由于從ALI發(fā)展到ARDS的時間極其短暫,且死亡率較高,其病因及發(fā)病機(jī)制錯綜復(fù)雜、致病環(huán)節(jié)眾多,已成為ICU病人死亡的第一因素。到目前為止,膿毒癥致ALI/ARDS的確切機(jī)制仍不完全清楚,臨床上仍缺少有確切治療效果的藥物,因此探究和開發(fā)治療膿毒癥的有效藥物具有極其重要的意義。膿毒癥發(fā)生時,首先啟動先天性免疫防御病原微生物入侵,Toll樣受體家族(Toll like receptor,TLR)是病原體入侵的首道防線。TLR能識別外來病原體、傳遞下游信號、介導(dǎo)炎癥因子的生成。其中TLR4能識別革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的主要成分,觸發(fā)了下游多條信號通路的激活,其中核轉(zhuǎn)錄因子-κB (Nuclear factor-κB, NF-κB)通路的激活最為關(guān)鍵,NF-κB通路一旦激活,具有調(diào)控細(xì)胞表面受體、促炎癥因子和粘附分子生成的作用,如腫瘤壞死因-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α),白細(xì)胞介素-1β(Interleukin-1,IL-1β),細(xì)胞間粘附分子-1 (Intercellular Adhesion Molecule-1,ICAM-1)等。這些細(xì)胞因子能潛在的誘導(dǎo)多種生物學(xué)反應(yīng),如控制病原體的生長和傳播,提高整個適應(yīng)性免疫應(yīng)答。但持續(xù)的炎癥反應(yīng)是有害的甚至導(dǎo)致機(jī)體死亡,為避免不適當(dāng)?shù)难装Y反應(yīng),通過負(fù)調(diào)控機(jī)制,不同途徑的清除刺激的來源,或者抑TLR/NF-κB的活化和表達(dá),在一定程度上能起到減輕局部炎癥反應(yīng)的作用,可能是臨床控制炎癥反應(yīng)的新靶點(diǎn)。鑒于膿毒癥發(fā)病的病理生理基礎(chǔ)為炎癥反應(yīng)與凝血纖溶失衡,抗凝藥物作為抗炎癥治療藥物發(fā)揮抗凝外的抗炎癥作用已成為目前膿毒癥治療研究的熱點(diǎn)。肝素(Unfractionated Heparin,UFH)及低分子肝素(Low Molecular Weight Heparin, LMWH)是臨床上常用的抗凝藥物。而且己在體外實(shí)驗(yàn)證明肝素及其衍生物可通過TLR4抑制炎癥反應(yīng)；肝素的衍生物能通過介導(dǎo)對TLR4-髓樣分化因子(myeloid differentiation factor 88,MyD88)的途徑抑制NF-κB通路,有效的抑制脂蛋白(Lipopolysaccharide,LPS)刺激的巨噬細(xì)胞釋放TNF-α,發(fā)揮抗凝以外的抗炎作用。低分子肝素能通過抑制NF-κB的表達(dá),減少促炎因子的產(chǎn)生和釋放,發(fā)揮抗炎癥的作用；因LMWH比UFH分子量更小,生物利用度更高,抗凝作用更強(qiáng),半衰期長,出血等副作用更少,使其在臨床應(yīng)用中越來越廣泛,甚至有取代普通肝素的趨勢。它對膿毒血癥引起的急性肺損傷中有無保護(hù)作用仍不清楚,因此本研究中,我們選擇LMWH作為研究對象,評估其對膿毒癥誘發(fā)的ALI有無保護(hù)作用及其可能的作用機(jī)制,為LMWH在臨床治療Sepsis并發(fā)的ALI提供理論基礎(chǔ)。我們采用最經(jīng)典的盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(Cecal ligation and puncture,CLP)來確立膿毒癥的動物模型,研究低分子肝素對CLP誘導(dǎo)的大鼠膿毒癥ALI是否具有保護(hù)性作用,并通過不同組大鼠肺組織病理學(xué)改變、肺水腫程度、髓過氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)測定,并結(jié)合TLR4-MyD88-NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的變化,以及炎癥細(xì)胞因子如TNF-α、IL-1β及ICAM-1在基因及分子水平的變化,進(jìn)一步闡明低分子肝素對膿毒癥誘發(fā)的ALI的作用及可能的作用機(jī)制,為Sepsis急性肺損傷的臨床診治提供新的研究思路。第一章低分子肝素對膿毒癥誘導(dǎo)的大鼠ALI的保護(hù)作用目的：評價低分子肝素對膿毒癥誘導(dǎo)的大鼠ALI有無保護(hù)作用。方法：將雄性Wistar大鼠隨機(jī)分組如下：假手術(shù)(Sham)組；CLP模型組；LMWH小劑量(75 U/Kg-1)治療組,LMWH中劑量(150 U/Kg-1)治療組和LMWH大劑量(300U/Kg-)治療組；每組30只。術(shù)后觀察并記錄大鼠行為、生命體征、生存率等情況,于造模后6h、12h及24h收集各組支氣管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)、血清及肺組織。行動脈血?dú)夥治鲇^察氧分壓(pressure of oxygen,PO2)的變化；肺組織標(biāo)本行形態(tài)學(xué)研究,通過大體標(biāo)本、HE染色和Masson染色觀察肺水腫、肺炎癥細(xì)胞浸潤、肺出血及膠原蛋白在間質(zhì)沉積的情況；肺組織水腫通過組織水含量評價；通過血球計數(shù)器計數(shù)各組BALF中各炎癥細(xì)胞的數(shù)量；二喹啉甲酸(Bicinchoninic acid,BCA)法測定BALF中的蛋白濃度；測定各組肺組織MPO活性,酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)法測肺組織ICAM-1水平,放射免疫法測定血中TNF-α、IL-1β的含量。結(jié)果：1.LMWH對大鼠一般狀況的影響：膿毒癥大鼠CLP術(shù)后4h開始出現(xiàn)弓背、活動減少,進(jìn)食量減少,精神萎靡等表現(xiàn),6h后大鼠出現(xiàn)呼吸急促,約120-150次/min,部分存在咳嗽、弓背、前肢縮抬現(xiàn)象,12h后呼吸急促進(jìn)行性加重,約200-250次/min,口唇、耳梢及四肢末梢可見發(fā)紺,皮毛失光澤、立毛,隨病情進(jìn)展嚴(yán)重者可出現(xiàn)呼吸節(jié)律不規(guī)則,俯伏不動等表現(xiàn)。解剖腹腔示：腹腔出血傾向明顯,近段腸管擴(kuò)張,被結(jié)扎的盲腸顏色灰暗,肝腫大、肺充血明顯,部分大鼠存在腸系膜粘連、血性腹水并伴惡臭；低分子肝素不同劑量治療組大鼠呼吸急促及活動情況均較CLP組明顯減輕；解剖腹部可見肝臟輕度腫大,肺輕度充血,HLMWH治療組出血傾向明顯；Sham組沒有相關(guān)表現(xiàn)。2.各組大鼠呼吸頻率變化：①造模后,CLP組與同時間點(diǎn)Sham組相比,大鼠的呼吸頻率逐漸升高,組問差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；CLP組組內(nèi)12h到24h時大鼠呼吸窘迫最明顯,12h時、24h時較6h時大鼠呼吸頻率明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),但CLP組12h時與24h時無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；②經(jīng)治療后,LLMWH治療組的大鼠呼吸頻率與CLP組相比,在各時間點(diǎn)均無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；而其余兩組治療組僅在12h時和24h時,與CLP組大鼠相比,呼吸頻率均下降,組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；③同時間點(diǎn)內(nèi),LMWH治療組不同劑量組問相比,大鼠呼吸頻率無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；3.各組大鼠不同時間點(diǎn)PO2變化：①造模后,CLP組與同時間點(diǎn)Sham組相比,大鼠的血?dú)釶02明顯下降,組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；其中CLP組組內(nèi)12h時P02下降最低,12h較6h時PO2減低,組內(nèi)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；12h時與24h時P02相比,無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；6h時與24h時P02相比,無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；②經(jīng)治療后,MLMWH治療組、HLMWH治療組與CLP組相比,PO2在各個時問點(diǎn)均升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),其中12h時,差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；LLMWH治療組在12h時,較CLP組大鼠的PO2升高,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),6h和24h時與CLP組相比,PO2無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；4.肺組織病理學(xué)變化：4.124h時大體觀察：Sham組大鼠肺臟表面紅潤,包膜彈性好,無出血及滲血,肺切面無血性泡沫樣液體及凝血溢出。CLP組肺臟表面蒼白,充血水腫明顯,包膜下可見較多點(diǎn)、片狀淤血,部分大鼠肺臟表面可見重力依賴性肺水腫,并有較多泡沫樣液體沿支氣管斷面溢出；LLMWH和MLMWH治療組肺臟表面呈粉紅色,水腫較CLP組明顯減輕,氣管切口可見少量血性液體溢出；HLMWH臺療組部分大鼠肺臟水腫減輕,部分大鼠肺表面可見彌漫性出血點(diǎn)。4.2光學(xué)顯微鏡下改變：HE染色可觀察到正常組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)較清晰、完整,肺泡壁薄,炎性細(xì)胞無滲出,而CLP模型組大鼠肺組織可觀察到肺泡壁增厚,中性粒細(xì)胞滲出,少量紅細(xì)胞滲出,富含蛋白質(zhì)的水腫液滲出,透明膜形成以及上皮細(xì)胞脫落。3個治療組鏡下可見：部分肺小葉的結(jié)構(gòu)清晰,肺泡腔內(nèi)有少量滲出,肺泡壁略增厚,肺泡問質(zhì)炎癥細(xì)胞的浸潤減少,肺泡腔出血和滲出明顯減少,氣管上皮細(xì)胞接近完整。4.3 Masson染色可觀察到造模后24h時Sham組可見極少量綠染的膠原蛋白沉積,而CLP組可觀察到肺問質(zhì)中大量綠染的膠原蛋白沉積,3個LMWH治療組綠染的膠原蛋白沉積介于Sham組和CLP組之間。5.各組大鼠的肺水含量(W/D)變化：①CLP模型組與同時間點(diǎn)Sham組相比,大鼠的肺水含量明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；且CLP組組內(nèi)在12h時肺水腫程度較6小時及24h時明顯增高,組內(nèi)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；②經(jīng)治療后,MLMWH治療組在各個時間點(diǎn)與CLP組相比,W/D均下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；LLMWH治療組及HLMWH治療組僅在6h及24h時,肺水含量較CLP組下降有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；③同時間點(diǎn)內(nèi),LMWH治療組不同劑量組間相比,大鼠W/D無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。6. BALF中各炎癥細(xì)胞計數(shù)：6.1 BALF中白細(xì)胞總數(shù)計數(shù)：①CLP組與同時間點(diǎn)Sham組相比,BALF中白細(xì)胞總數(shù)明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；CLP組術(shù)后12h-24h,白細(xì)胞總數(shù)升高至最高,12時及24h時均較6h時升高,有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),24h與12h時相比,BALF中白細(xì)胞總數(shù)呈下降趨勢,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；②經(jīng)治療后,6h時,HLMWH治療組BALF中白細(xì)胞計數(shù)較CLP組下降有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；12h及24h時,3個治療組較CLP組白細(xì)胞計數(shù)明顯下降,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；③同時間點(diǎn)內(nèi),LMWH治療組不同劑量組間相比,無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。6.2 BALF中中性粒細(xì)胞計數(shù)：①與同時間點(diǎn)Sham組相比,其余四組在CLP術(shù)后各時間點(diǎn),中性粒細(xì)胞計數(shù)明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；至12h時升至最高,12h時均高于6h及24h時中性粒細(xì)胞數(shù)目,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；24h時中性粒細(xì)胞計數(shù)仍明顯高于6h時,差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；②經(jīng)治療后,6h時,HLMWH治療組BALF中中性粒細(xì)胞計數(shù)較CLP組下降有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；12h及24h時,3個治療組較CLP組中性粒細(xì)胞計數(shù)明顯下降,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；③同時間點(diǎn)內(nèi),LMWH治療組不同劑量組組間相比,無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。7.各組大鼠不同時間點(diǎn)肺組織MPO活性的變化：①造模后,CLP組與同時間點(diǎn)Sham組相比,MPO活性均明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；CLP組在12h時,肺組織MPO活性達(dá)到最高,12h與6h組相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；12h與24h相比,6h與24h相比,均無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；②經(jīng)過治療,6h時HLMWH治療組大鼠MPO活性與CLP組相比,肺組織中MPO活性下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；12h時,3組治療組大鼠的肺組織MPO活性均下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),其中MLMWH組和HLMWH組下降顯著(P0.01)；24h時,三組治療組與CLP組肺組織MPO活性相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；③同時間點(diǎn)內(nèi),LMWH治療組不同劑量組組間相比,在12h時,MLMWH組及HLMWH組肺組織MPO活性較LLMWH組下降,組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；6h及24h時,三組之間肺組織MPO活性無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；8.各組大鼠BALF中蛋白含量的變化：①CLP模型組大鼠的BALF中蛋白含量與同時間點(diǎn)Sham組相比明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；CLP組組內(nèi)在12h-24h時,BALF中蛋白量達(dá)到最高,12h及24h時較6小時時BALF中蛋白量顯著增高,組內(nèi)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；12h時與24h時相比,組內(nèi)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；②經(jīng)治療后,3組治療組大鼠BALF中蛋白含量與同時間點(diǎn)的CLP組相比均明顯下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；6h時,三組治療組與Sham組大鼠相比,BALF中蛋白含量無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；在12h和24h時,三組治療組與Sham組同時間點(diǎn)大鼠相比,BALF中蛋白含量仍增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。9.各組大鼠不同時間點(diǎn)血中炎癥因子的變化：9.1各組大鼠血中不同時間點(diǎn)TNF-α(fmol/ml)的水平變化：①造模后,CLP組與同時間點(diǎn)Sham組相比,血中TNF-α明顯增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；CLP組組內(nèi)在12h時達(dá)到最高,24h時有降低趨勢,12h時及24h時血TNF-α含量較6h時明顯增高,組內(nèi)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；24h時血TNF-α含量較12h時降低,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；②經(jīng)治療后,3組治療組血TNF-α較CLP組有不同程度減低；12h及24h時,3組治療組大鼠 TNF-α與CLP組相比明顯下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；6h時HLMWH治療組與CLP組相比,血中TNF-α明顯下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),LLMWH治療組、MLMWH治療組與CLP組相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。9。2各組大鼠血中不同時間點(diǎn)IL-1β(ng/ml)的水平變化：①造模后,CLP組與同時間點(diǎn)Sham組相比,血中IL-1p明顯增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；CLP組術(shù)后12h-24h時血IL-1p達(dá)到最高,12h時及24h時血IL-1p含量較6h時明顯增高,組內(nèi)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；②經(jīng)治療后,在6h及12h時,3個不同劑量LMWH治療組與CLP組相比,血IL-1β含量均明顯下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；治療后24h時,MLMWH治療組與CLP組相比,血IL-1β含量下降有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),HLMWH治療組與CLP組相比,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),HLMWH治療組與CLP組無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；3.10各組大鼠不同時間點(diǎn)肺組織中ICAM-1的變化：①與同時間點(diǎn)Sham組相比,CLP組大鼠肺組織中ICAM-1的含量明顯增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；CLP組組內(nèi)12h時肺組織中ICAM-1達(dá)到最高,12h時較6h時ICAM-1的含量明顯增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；24h時較6h時ICAM-1含量增高,組內(nèi)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；24h與12h時相比,ICAM-1含量無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；②經(jīng)治療后, LLMWH治療組與CLP組相比,在6h及12h時大鼠肺組織ICAM-1含量下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；MLMWH治療組與CLP組相比,在各個時間點(diǎn)大鼠肺組織ICAM-1均下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),其中24h時差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；HLMWH治療組與CLP組相比,在各個時間點(diǎn)大鼠肺組織ICAM-1均下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),其中12h時差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。3.11各組大鼠死亡率觀察：72h內(nèi)Sham組大鼠無死亡,CLP組死亡率為55%；不同劑量LMWH治療組能有效降低ALI大鼠的死亡率,其中LLMWH治療組72h死亡率為40%,MLMWH治療組72h死亡率為25%,HLMWH治療組72h死亡率為35%。描繪各組大鼠的生存率曲線提示,LMWH治療組能提高ALI大鼠生存率。研究結(jié)論：1.本研究通過大鼠CLP術(shù)可以成功復(fù)制膿毒癥合并AL1的病理生理過程。且發(fā)現(xiàn)在術(shù)后12h時CLP組肺水腫程度最高、炎癥細(xì)胞浸潤最重,血中及肺組織中炎癥因子表達(dá)水平最高,提示ALI的損傷程度最重,可為后續(xù)研究提供理論基礎(chǔ)。2.低分子肝素治療組能夠通過對血中’TNF-α、IL-1β和肺組織中ICAM-1水平的抑制,降低ALI的炎癥程度,改善了CLP導(dǎo)致的微結(jié)構(gòu)改變,減輕了CLP致ALI的肺水腫,改善了肺部氣體交換功能,起到了肺保護(hù)功能。3.中劑量低分子肝素治療組(150IU/Kg-1)遠(yuǎn)期效果優(yōu)于高、低劑量治療組,改善AL1大鼠的生存率最明顯。第二章LMWH對CLP誘導(dǎo)的大鼠膿毒癥ALI模型的保護(hù)機(jī)制研究目的：評估LMWH對CLP誘導(dǎo)的大鼠AL1的保護(hù)作用機(jī)制是否是通過抑制TLR4-MyD88-NF-κB信號通路發(fā)揮抗炎癥的效果。方法：參考本實(shí)驗(yàn)第一部分,所有大鼠隨機(jī)分為3組,每組20只：Sham組,CLP組和CLP+LMWH治療組(150 U/Kg-1)。造模后12h收集血液和肺組織,肺組織標(biāo)本行形態(tài)學(xué)研究,肺組織中ICAM-1的表達(dá)采用ELISA法檢測,血中炎癥因子TNF-α及IL-1β的檢測采用放射免疫法,Western-Blot法測定肺組織中肺組織中TLR4-MyD88-NF-κB信號通路的相關(guān)蛋白的表達(dá),定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶連鎖反應(yīng)(quantificational reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)法測定肺組織中TNF-α、IL-1β和ICAM-1 mRNA的表達(dá)。結(jié)果：1.肺組織病理學(xué)變化：假手術(shù)組支氣管粘膜上皮完整,肺泡腔干凈,肺小葉結(jié)構(gòu)清晰,肺泡壁無增厚,肺泡間質(zhì)內(nèi)無炎性細(xì)胞浸潤,纖維結(jié)締組織無增生；CLP模型組：肺小葉結(jié)構(gòu)不清,肺泡腔內(nèi)有出血和滲出,肺泡壁增厚,肺泡間質(zhì)內(nèi)可見炎性細(xì)胞浸潤,纖維結(jié)締組織增生,支氣管粘膜上皮不完整。CLP+LMWH治療組：肺泡腔有少量出血和滲出,氣管上皮細(xì)胞接近完整,部分肺小葉結(jié)構(gòu)清晰,肺泡壁輕度增厚,肺泡間質(zhì)中炎癥細(xì)胞的浸潤減少,檢測到少量增生的纖維結(jié)締組織。2.血漿中細(xì)胞因子TNF-α, IL-1β和IL-6的表達(dá)：CLP組血漿中細(xì)胞因子TNF-α,IL-1p和IL-6的表達(dá)明顯高于Sham組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而在CLP+LMWH組炎癥因子的表達(dá)明顯低于CLP組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3. ICAM-1的檢測：與CLP模型組相比,ICAM-1的水平顯著高于Sham組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05), 而與CLP組相比,ICAM-1在CLP+LMWH組的表達(dá)明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4.血漿中細(xì)胞因子TNF-α, IL-1β的表達(dá)：CLP組血漿中細(xì)胞因子TNF-α, IL-1β和IL-6的表達(dá)顯著高于假手術(shù)組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而在LMWH組明顯低于CLP組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5. ICAM-1的檢測：CLP組ICAM-1的水平明顯高于sham組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而與CLP組相比,ICAM-1在LMWH組的表達(dá)明顯減低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。6.肺組織中炎癥相關(guān)蛋白的表達(dá)水平：6.1 TLRs信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)：①TLR-4蛋白水平：CLP組大鼠肺組織TLR-4蛋白水平較Sham組升高,組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；LMWH治療組較CLP組明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；②MyD88蛋白水平：CLP組大鼠肺組織MyD88蛋白水平較Sham組升高,組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；LMWH治療組較CLP組明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；(見圖3-3)6.2 NF-κB信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)：①NF-κB通路調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)：CLP組大鼠肺組織IKKα、IKKβ和：IκBα蛋白水平均較Sham組升高,組問差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；LMWH治療組較CLP組明顯降低(P0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義；②NF-κB蛋白在CLP組的表達(dá)顯著高于Sham組和CLP+LMWH組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。7.肺組織IL-1βmRNA、TNF-α mRNA和ICAM-1mRNA的表達(dá)：CLP組大鼠肺組織IL-1βmRNA、TNF-α mRNA和ICAM-1mRNA表達(dá)明顯增高(P0.05),LMWH治療組大鼠肺組織IL-1βmRNA、TNF-α mRNA和HCAM-1mRNA表達(dá)明顯減低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：LMWH對CLP誘導(dǎo)的大鼠AL1的保護(hù)作用可能與抑制TLR4-MyD88-NF-κB信號通路的活化,下調(diào)炎癥因子的基因轉(zhuǎn)錄,減少炎癥因子的生成有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R459.7

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2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;

本文編號：2802270