【摘要】：近年來,隨著檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展,血清雌二醇和四種嘌呤核苷類物質(zhì)成為新的指標(biāo)應(yīng)用于臨床,因此其相關(guān)領(lǐng)域的檢測(cè)也急劇增加,需求日益廣泛,為保證臨床檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化,本文研制了血清雌二醇和四種嘌呤核苷類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)以滿足臨床檢測(cè)需求。 在血清雌二醇基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制過程中,建立了同位素稀釋液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(ID-LC/MS/MS)準(zhǔn)確測(cè)定血清中雌二醇的含量,使用電噴霧三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM),通過優(yōu)化色譜質(zhì)譜參數(shù),確定最佳的儀器分析條件。實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了血清樣品的前處理?xiàng)l件,包括比較不同的雌二醇內(nèi)標(biāo)物、添加提取劑、萃取前血清所需的pH值、摸索淋洗條件以及平衡時(shí)問等,使雌二醇的提取效果最好,建立了合適的樣品制備路線。并進(jìn)一步對(duì)血清樣品進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)、穩(wěn)定性監(jiān)測(cè)以及不確定度評(píng)定,并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證(精密度、準(zhǔn)確性、線性關(guān)系、檢測(cè)限等)；采用2013IFCC RELA比對(duì)(JCTLM)樣品和歐洲標(biāo)準(zhǔn)局標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)血清17β-雌二醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行了方法驗(yàn)證,測(cè)量結(jié)果溯源到JCTLM認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),保證了標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的溯源性和量值的準(zhǔn)確,從而完成了血清雌二醇基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制。 本文結(jié)合國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究技術(shù)基礎(chǔ),采用紅外光譜法和質(zhì)譜法對(duì)四種嘌呤核苷類樣品主成分進(jìn)行了定性分析；通過優(yōu)化分析實(shí)驗(yàn)條件完成了基于高效液相色譜的質(zhì)量平衡法與定量核磁共振法兩種不同原理的定值分析方法,同時(shí)完成了水分、灰分及無機(jī)離子含量的測(cè)定；并進(jìn)一步對(duì)四種嘌呤核苷類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行了均勻性檢驗(yàn)、穩(wěn)定性監(jiān)測(cè)以及不確定度的評(píng)定。結(jié)果表明,四種嘌呤核苷類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度較高,其中鳥苷純度為90.89%,擴(kuò)展不確定度0.56%(k=2)：2'-脫氧鳥苷純度為94.51%,擴(kuò)展不確定度0.34%(k=2)；8-羥基-鳥苷純度為94.22%,擴(kuò)展不確定度0.34%(k=-2)；8-羥基-2'-脫氧鳥苷純度為91.02%,擴(kuò)展不確定度0.28%(k=2)：四種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均勻性良好且一年范圍監(jiān)測(cè)穩(wěn)定性良好。 血清中雌二醇基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)空白,四種嘌呤核苷類純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制填補(bǔ)了國(guó)際空白,該類臨床用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制可用于相關(guān)成分的測(cè)定、分析儀器的校準(zhǔn)、分析方法的確認(rèn)及相關(guān)生產(chǎn)部門和實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制等。
【圖文】：

北京交通大學(xué)碩士學(xué)位論文 表2-4液相色譜分析條件Table 2-4 The liquid chromatographic conditions 色譜優(yōu)化條件 優(yōu)化結(jié)束 色譜柱 Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18(2.1 X ISOmm, Sum)色進(jìn)柱溫度 30T：流動(dòng)相 A: B=H20： ACN梯度洗脫釋序 0—15min, 40%—100%B； 15—17min,100%B； 17—22min, 100%—40%B流速 0.3 mL/min 進(jìn)樣鎮(zhèn)

圖3-15 8-?基-?符樣品的高效液相色譜閣Fig.3-15 The HPLC figure of 8-oxo-Guanosine sample8-經(jīng)基-2’-脫氧鳥苷(8"Oxo-2'-deoxyguanosine )高效液相色譜條件的優(yōu)化：考察了 + 同類型的色譜柱—Atlantis Waters Atlantis dC18 (5 |xm, 2.1x150 mm)柱、Aglient SB C18 (5 nm，4.6x150 mm)柱、Aglient Eclipse C18 (5 nm, 4.6x250 mm)柱--對(duì)8-經(jīng)基-21-脫氧鳥哲純品的純度測(cè)定效果，檢測(cè)的譜閣結(jié)來顯示主峰峰型都比較拖尾，相比而言Aglient Eclipse C18柱分離效果明顯較好于另外兩柱；通過紫外吸收光譜全掃描可知8-經(jīng)基-2'-脫氧鳥苗的最大吸收波長(zhǎng)為250 nm,在此甚礎(chǔ)上分別對(duì)流動(dòng)相比例和流動(dòng)相所需的pH值進(jìn)行了優(yōu)化，流動(dòng)相分別考察了純甲醇與純水相以及分別加入了 50 mmola愃岫#鉀的（pH=3.5)的流動(dòng)相，兩種條件下高效液相色譜峰型均較好，但8-徑基-2'-脫氧鳥苗樣品在酸性條件下不穩(wěn)定，最終選擇了純甲醇與純水相為流動(dòng)相，流動(dòng)相有機(jī)相甲醇與純水相的比例為10： 90時(shí)峰型最好；流速為l.OmL/min;將1 mg樣品溶于1 mL溶劑中，，溶解樣品的溶劑分別選用純水、二甲基亞砜（DMSO)、0.1%甲酸水溶液，8-經(jīng)基-2?-脫
【學(xué)位授予單位】：北京交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R446.11;O652.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2571553