【摘要】：目的建立快速準確檢測致病性嗜水氣單胞菌的雙重熒光定量PCR方法。方法針對嗜水氣單胞菌的16S rDNA和氣溶素基因aerA的序列設(shè)計特異性引物及TaqMan探針,優(yōu)化雙重熒光定量PCR反應(yīng)條件,并結(jié)合常規(guī)PCR方法及分離培養(yǎng)鑒定對臨床樣品進行檢測和對比驗證。結(jié)果熒光定量PCR反應(yīng)體系對質(zhì)粒標準品的敏感性為10拷貝/反應(yīng),是常規(guī)PCR檢測方法的100倍;該方法檢測12種其他種屬細菌時未出現(xiàn)假陽性;對實際樣品的檢測結(jié)果其敏感性同樣高于普通PCR,定量檢測目的基因的拷貝數(shù)與樣品中目的菌的分離率成正比。結(jié)論本方法敏感性高,特異性好,可用于致病性嗜水氣單胞菌感染的診斷、疾病防控及流行病學研究。
[Abstract]:Objective to establish a double fluorescence quantitative PCR method for rapid and accurate detection of pathogenic Aeromonas hydrophila. Methods specific primers and TaqMan probes were designed for 16s rDNA and aerA sequences of Aeromonas hydrophila to optimize the dual fluorescence quantitative PCR reaction conditions. The clinical samples were detected and compared with routine PCR method and isolation culture identification. Results the sensitivity of the fluorescent quantitative PCR reaction system to the plasmid standard was 10 copies / reaction, which was 100 times higher than that of the conventional PCR method, and there was no false positive in the detection of 12 other species of bacteria by this method. The sensitivity of the actual sample is also higher than that of the ordinary PCR,. The copy number of the target gene is proportional to the isolation rate of the target bacteria in the sample. Conclusion the method has high sensitivity and specificity, and can be used for the diagnosis, disease control and epidemiological study of pathogenic Aeromonas hydrophila infection.
【作者單位】： 軍事醫(yī)學科學院軍事獸醫(yī)研究所吉林省人獸共患病預防與控制重點實驗室;吉林農(nóng)業(yè)大學食品科學與工程學院;長春中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院;
【基金】：國家科技部傳染病重大專項(No.2013ZX10004-217-002) 吉林省科技計劃項目(No.20140101032JC,20150101110JC)聯(lián)合資助~~
【分類號】：R440

【參考文獻】

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