【摘要】：目的建立快速準(zhǔn)確檢測(cè)致病性嗜水氣單胞菌的雙重?zé)晒舛縋CR方法。方法針對(duì)嗜水氣單胞菌的16S rDNA和氣溶素基因aerA的序列設(shè)計(jì)特異性引物及TaqMan探針,優(yōu)化雙重?zé)晒舛縋CR反應(yīng)條件,并結(jié)合常規(guī)PCR方法及分離培養(yǎng)鑒定對(duì)臨床樣品進(jìn)行檢測(cè)和對(duì)比驗(yàn)證。結(jié)果熒光定量PCR反應(yīng)體系對(duì)質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的敏感性為10拷貝/反應(yīng),是常規(guī)PCR檢測(cè)方法的100倍;該方法檢測(cè)12種其他種屬細(xì)菌時(shí)未出現(xiàn)假陽(yáng)性;對(duì)實(shí)際樣品的檢測(cè)結(jié)果其敏感性同樣高于普通PCR,定量檢測(cè)目的基因的拷貝數(shù)與樣品中目的菌的分離率成正比。結(jié)論本方法敏感性高,特異性好,可用于致病性嗜水氣單胞菌感染的診斷、疾病防控及流行病學(xué)研究。
[Abstract]:Objective to establish a double fluorescence quantitative PCR method for rapid and accurate detection of pathogenic Aeromonas hydrophila. Methods specific primers and TaqMan probes were designed for 16s rDNA and aerA sequences of Aeromonas hydrophila to optimize the dual fluorescence quantitative PCR reaction conditions. The clinical samples were detected and compared with routine PCR method and isolation culture identification. Results the sensitivity of the fluorescent quantitative PCR reaction system to the plasmid standard was 10 copies / reaction, which was 100 times higher than that of the conventional PCR method, and there was no false positive in the detection of 12 other species of bacteria by this method. The sensitivity of the actual sample is also higher than that of the ordinary PCR,. The copy number of the target gene is proportional to the isolation rate of the target bacteria in the sample. Conclusion the method has high sensitivity and specificity, and can be used for the diagnosis, disease control and epidemiological study of pathogenic Aeromonas hydrophila infection.
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所吉林省人獸共患病預(yù)防與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院;長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院;
【基金】：國(guó)家科技部傳染病重大專項(xiàng)(No.2013ZX10004-217-002) 吉林省科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.20140101032JC,20150101110JC)聯(lián)合資助~~
【分類號(hào)】：R440

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2468443