【摘要】：內(nèi)毒素休克所導(dǎo)致的肺組織損傷,治療過程棘手,發(fā)病機(jī)制復(fù)雜而且不明確,由其引發(fā)的ALI/ARDS目前仍是危重病領(lǐng)域研究的難點(diǎn)和熱點(diǎn)。剖析這一龐雜的發(fā)病機(jī)制,對(duì)改善其預(yù)后和降低死亡率有著十分重要的臨床意義。我們前期研究的結(jié)果表明,血紅素氧合酶-1(HO-1)被認(rèn)為是對(duì)抗氧化應(yīng)激、炎性刺激等適應(yīng)性的細(xì)胞反應(yīng),HO-1代謝產(chǎn)物中的膽紅素具有強(qiáng)大抗炎、抗氧化性,有肺臟保護(hù)作用,但是有關(guān)誘導(dǎo)HO-1表達(dá)上調(diào)的機(jī)制尚不清楚[1-5],因此明確其誘導(dǎo)表達(dá)機(jī)制,對(duì)內(nèi)毒素休克肺損傷的防治具有十分重要的指導(dǎo)意義。轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子2(Nrf2)具有抗炎、抗氧化,抑制細(xì)胞凋亡等多重生物活性,Nrf2是一種重要轉(zhuǎn)錄因子,在提供細(xì)胞保護(hù)、維系細(xì)胞生存方面具有重要意義,屬于基本亮氨酸拉鏈的一個(gè)子集,其廣泛存在于機(jī)體組織細(xì)胞中。與抗氧化反應(yīng)序列元件(ARE)共同構(gòu)成Keapl-Nrf2/ARE通路[6];而蛋白激酶C(PKC)為蘇氨酸/絲氨酸蛋白激酶,是一種磷脂、Ca2+所依賴的蛋白激酶,參與細(xì)胞的分化、增殖、凋亡、遷移、細(xì)胞支架組構(gòu)等,并承擔(dān)著跨膜信號(hào)傳遞等重要作用,其機(jī)制是誘導(dǎo)了多種蛋白質(zhì)上的Thr/Ser磷酸化。PKC信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是高度保守三級(jí)激酶級(jí)聯(lián)傳遞信號(hào)通路,發(fā)生低血壓性休克時(shí),啟動(dòng)該通路,可減少血液動(dòng)力學(xué)的大幅波動(dòng),維持生命體征相對(duì)平穩(wěn)。PKCα屬傳統(tǒng)或者說是典型的PKC(classicalor conventional PKC,CPKC),隸屬于A組中一個(gè)亞類,其激活的標(biāo)志通常認(rèn)為就是PKCα發(fā)生了轉(zhuǎn)位。它可以活化Nrf2,促使其移入細(xì)胞核,從而發(fā)揮上調(diào)HO-1表達(dá)的作用[9]。目前,關(guān)于PKCα-Nrf2-HO-1在內(nèi)毒素休克急性肺損傷作用的研究尚未見相關(guān)報(bào)道。本研究擬通過建立內(nèi)毒素休克肺損傷模型并應(yīng)用相關(guān)通路阻斷劑及誘導(dǎo)劑來評(píng)價(jià)PKCα-Nrf2-HO-1通路在兔內(nèi)毒素休克急性肺損傷中的作用,為日后相關(guān)研究提供理論依據(jù)。目的本研究擬探討PKCα-Nrf2-HO-1通路在兔內(nèi)毒素休克誘發(fā)急性肺損傷中的作用。方法健康清潔級(jí)新西蘭大白兔70只,雌雄不拘,2月齡,體重2.0~2.5 kg,采用隨機(jī)數(shù)字表法,隨機(jī)分為7組(n=10):空白對(duì)照組(C組)、模型組(M組)、PKC阻斷劑白屈菜赤堿+模型組(CHE+M組)、PKC誘導(dǎo)劑豆蔻酸佛波酰乙酯+模型組(PMA+M組)、PKC阻斷劑白屈菜赤堿組(CHE組)和PKC誘導(dǎo)劑豆蔻酸佛波酰乙酯組(PMA組)、溶媒二甲亞砜組(DMSO組)。CHE+M組、CHE組腹腔注射白屈菜赤堿(Chelerythrine,CHE)8mg/kg(溶于0.5ml DMSO),PMA+M和PMA組腹腔注射豆蔻酸佛波酰乙酯(Phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)0.02 mg/kg(溶于0.5ml DMSO),C組腹腔注射生理鹽水0.5ml,其余各組以同樣方式注射DMSO 0.5 ml。M組、CHE+M組和PMA+M組30min后耳緣靜脈注射LPS 5 mg/kg(溶于2 ml生理鹽水)制備內(nèi)毒素休克急性肺損傷模型,其余各組注射生理鹽水2ml。耳緣靜脈注射LPS后兩小時(shí)后,右頸總動(dòng)脈置管所監(jiān)測(cè)的各組平均動(dòng)脈壓變化至原始值的75%及以下,即可認(rèn)為模型建立成功。在脂多糖注射到達(dá)6小時(shí)后處死各組的實(shí)驗(yàn)兔,采集右頸總動(dòng)脈血樣3.5 ml并取肺組織。留取肺組織行病理學(xué)觀察并進(jìn)行病理評(píng)分,測(cè)定肺組織W/D比率、SOD活性及MDA含量,檢測(cè)血清TNF-α和IL-10濃度以及肺組織Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA、Nrf2總蛋白、Nrf2核蛋白、PKCα蛋白、HO-1蛋白的表達(dá)。結(jié)果與C組比較,M組、PMA+M組和CHE+M組肺組織病理學(xué)評(píng)分、TNF-α和IL-10濃度、W/D比率、MDA含量升高,Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA、Nrf2總蛋白、Nrf2核蛋白及HO-1蛋白的表達(dá)上調(diào),SOD活性降低(P均0.05);M組和PMA+M組PKCα蛋白水平表達(dá)上調(diào)(P0.05),CHE+M組則差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);CHE組、PMA組、DMSO組上述各指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與M組比較,CHE+M組肺組織病理學(xué)評(píng)分、TNF-α濃度、W/D比率、MDA含量升高,Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA、Nrf2總蛋白、Nrf2核蛋白、PKCα蛋白及HO-1蛋白的表達(dá)下調(diào)(P0.05),IL-10濃度、SOD活性降低(P0.05);PMA+M組肺組織病理學(xué)評(píng)分、TNF-α濃度、W/D比率、MDA含量降低,Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA、Nrf2總蛋白、Nrf2核蛋白、PKCα蛋白及HO-1蛋白的表達(dá)上調(diào)(P0.05),IL-10濃度、SOD活性升高(P0.05)。與CHE+M組比較,PMA+M組肺組織病理學(xué)評(píng)分、TNF-α濃度、W/D比率、MDA含量降低,Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA、Nrf2總蛋白、Nrf2核蛋白、PKCα蛋白及HO-1蛋白的表達(dá)上調(diào)(P0.05),IL-10濃度、SOD活性升高(P0.05)。結(jié)論P(yáng)KCα-Nrf2-HO-1通路減輕了兔內(nèi)毒素休克誘發(fā)急性肺損傷,機(jī)制可能與肺組織HO-1表達(dá)上調(diào)有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R459.7

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本文編號(hào)：2462742