【摘要】：目的呼吸道病毒是引起嬰幼兒呼吸道感染的最主要病原體,為快速準(zhǔn)確診斷其感染,文中建立一種基于液相芯片系統(tǒng)的4種常見呼吸道病毒快速分子檢測方法,為有效防控其發(fā)生和流行提供有力手段。方法采集南京總醫(yī)院兒科就診的有急性呼吸道感染癥狀的患兒咽拭子標(biāo)本120例及30例正常對照標(biāo)本,分別納入患兒組和對照組。針對A型流感病毒(Flu A)、B型流感病毒(Flu B)、呼吸道合胞病毒A型(RSVA)和B型(RSVB)的保守區(qū)序列分別設(shè)計并合成了特異性引物、探針和通用引物,構(gòu)建4種病原體陽性參比品,通過對擴增和雜交條件的優(yōu)化,建立了靶序列富集多重PCR(Tem-PCR)和Luminex液相芯片(x MAP)技術(shù)相結(jié)合的檢測系統(tǒng),并對該檢測系統(tǒng)進行了特異性、靈敏度評價。收集以急性上呼吸道感染為主要表現(xiàn)的患兒咽拭子標(biāo)本,用上述建立的方法進行檢測分析,分別與單病毒基因熒光定量PCR檢測方法及x TAG液相芯片法進行比對檢測。結(jié)果建立了Flu A、Flu B、RSVA和RSVB4種呼吸道病毒的特異性快速分子檢測方法且靈敏度可達10拷貝/μL。用快速分子檢測方法和單病毒基因熒光定量PCR法對120例疑似患兒咽拭子標(biāo)本進行檢測,快速法陽性檢出率為31.7%(38/120),熒光定量法陽性檢出率為29.2%(35/120)。經(jīng)一致性檢驗分析提示2種方法一致性較強(k0.7)。部分標(biāo)本同時采用x TAG液相芯片試劑盒進行檢測,經(jīng)一致性檢驗分析提示2種方法一致性較好(k0.6)。結(jié)論臨床的初步應(yīng)用證實了4種常見呼吸道病毒快速分子檢測方法具備靈敏、特異、快速等優(yōu)點,為臨床早期、準(zhǔn)確判斷呼吸道感染的病原體提供實驗依據(jù)。
[Abstract]:Objective Respiratory tract virus (RTV) is the most important pathogen causing respiratory tract infection in infants. In order to diagnose respiratory tract infection quickly and accurately, a rapid molecular detection method of four common respiratory viruses based on liquid chip system was developed in this paper. For effective prevention and control of its occurrence and prevalence to provide effective means. Methods the throat swabs of 120 children with symptoms of acute respiratory tract infection and 30 normal controls were collected from pediatrics department of Nanjing General Hospital. Specific primers, probes and universal primers were designed and synthesized for the conserved regions of (Flu B), respiratory syncytial virus A (RSVA) and B type (RSVB) (RSVB) of influenza A virus (Flu A), B). Four kinds of pathogen positive reference products were constructed. By optimizing the conditions of amplification and hybridization, a detection system combining target sequence enrichment multiple PCR (Tem-PCR) and Luminex liquid chip (x MAP) technique was established. The specificity and sensitivity of the detection system were evaluated. The pharyngeal swabs of children with acute upper respiratory tract infection were collected and analyzed by the established method. The results were compared with single virus gene fluorescence quantitative PCR assay and x TAG liquid chip assay. Results A rapid and specific molecular method for the detection of respiratory viruses from Flu Agna Flu BRSVA and RSVB4 was established with a sensitivity of up to 10 copies / 渭 L. The rapid molecular detection method and single virus gene fluorescence quantitative PCR method were used to detect the throat swabs of 120 suspected children. The positive rate of rapid detection was 31.7% (38 / 120). The positive rate of fluorescence quantitative method was 29.2% (35 / 120). The results of consistency test showed that the two methods had strong consistency (k 0.7). Some samples were detected by X TAG liquid chip kit at the same time. The results of consistency analysis showed that the two methods had good consistency (K0.6). Conclusion the preliminary clinical application has proved that the four rapid molecular detection methods of respiratory tract virus have the advantages of sensitivity specificity and rapidity which provides experimental basis for the early clinical diagnosis of respiratory tract infection pathogens.
【作者單位】： 南京軍區(qū)南京總醫(yī)院中心實驗科;南京軍區(qū)南京總醫(yī)院兒科;
【基金】：全軍醫(yī)學(xué)科技“十二五”科研項目(CWS129811298) 南京軍區(qū)醫(yī)學(xué)科技重大專項(14ZX17)
【分類號】：R725.6;R440

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本文編號：2391527