【摘要】：目的:1.了解福州市臨床分離的耐碳青霉烯類不動桿菌耐藥性的產生與B類和D類碳青霉烯酶之間的關系。2.探討A類碳青霉烯酶、外膜孔蛋白和外排泵在攜帶NDM-1型基因的耐碳青霉烯類不動桿菌中的作用。3.研究NDM-1、NDM-6及NDM-9型酶對亞胺培南的水解能力。4.研究福州市臨床分離的耐碳青霉烯類不動桿菌的分子流行病學特點。方法:1.收集2010年9月~2014年8月福州市臨床分離的391株非重復的耐碳青霉烯類不動桿菌,采用VITEK-2 compact全自動微生物分析儀進行菌種鑒定和藥敏試驗,然后通過K-B法驗證菌株對亞胺培南的耐藥性。通過42℃生長實驗、OXA-51-like基因檢測和rpoB基因序列分析進行菌種鑒定。PCR法檢測B類和D類碳青霉烯酶基因。2.對攜帶有NDM-1型基因的不動桿菌,運用PCR法篩查A類碳青霉烯酶基因、外膜孔蛋白基因和外排泵基因。構建含NDM-1、NDM-6及NDM-9型酶的pCR 2.1載體,導入TOP10感受態(tài)細胞中,利用瓊脂稀釋法測定不同類型重組菌對亞胺培南的最小抑菌濃度值。3.利用DiversiLab細菌DNA指紋圖譜分析系統(tǒng)對福州市臨床分離的50株耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌、5株Pittii不動桿菌和3株Nosocomialis不動桿菌進行基因分型。在50株耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌中,39株來自福建醫(yī)科大學附屬協(xié)和醫(yī)院,9株來自福建醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院,2株來自南京軍區(qū)福州總醫(yī)院。5株Pittii不動桿菌和3株Nosocomialis不動桿菌均來自福建醫(yī)科大學附屬協(xié)和醫(yī)院。結果:1.①391株耐碳青霉烯類不動桿菌中,382株為鮑曼不動桿菌,5株為pittii不動桿菌,4株為nosocomialis不動桿菌。②在382株耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌中,oxa-23-like基因陽性率為93.46%(357株),oxa-24-like基因陽性率1.05%(4株),oxa-58-like基因陽性率0.52%(2株),均未檢出oxa-143-like基因;2株檢出ndm-1型基因。③在5株pittii不動桿菌中,2株檢出oxa-58-like基因,5株均未檢出oxa-23-like、oxa-24-like及oxa-143-like基因;5株均檢出ndm-1型基因。④在4株nosocomialis不動桿菌中,4株均未檢出oxa-23-like、oxa-24-like、oxa-58-like及oxa-143-like基因;3株檢出ndm-1型基因。⑤該391株耐碳青霉烯類不動桿菌的其余金屬β-內酰胺酶基因篩查結果均為陰性。2.①在2株攜帶ndm-1型基因的鮑曼不動桿菌中,1株檢出oxa-23-like基因,均未檢出其它碳青霉烯酶基因;2株均檢出外膜孔蛋白caro基因,1株檢出外膜孔蛋白oprd基因;2株均檢出adeb、adei、adej及adek基因。②在5株攜帶ndm-1型基因的pittii不動桿菌中,2株檢出oxa-58-like基因,均未檢出其它碳青霉烯酶基因;5株均檢出外膜孔蛋白oprd基因,5株均未檢出外膜孔蛋白caro基因;5株均檢出外排泵adei、adek基因,4株檢出adej基因,1株檢出adeb基因。③在3株攜帶ndm-1型基因nosocomialis不動桿菌中,均未檢出其它碳青霉烯酶基因;3株均檢出外膜孔蛋白caro、oprd基因;3株均檢出外排泵adeb、adei、adej及adek基因。④以上10株攜帶ndm-1型基因的不動桿菌,均未檢出外排泵調節(jié)基因ades。⑤表達ndm-1、ndm-6及ndm-9酶的重組菌,對亞胺培南的mic值分別為32、128和64μg/ml。3.福州市50株耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌可分為a~g七個型別,其中a、b、e和g型各1株,c型4株,d型7株,f型35株。5株pittii不動桿菌和3株nosocomialis不動桿菌可分為a和b兩型。結論:1.福州市臨床分離的耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌對碳青霉烯類抗生素的耐藥機制主要與產oxa-23-like碳青霉烯酶相關。2.第一次在耐碳青霉烯類pittii不動桿菌中同時檢出ndm-1型基因與oxa-58-like基因。3.第一次在福建省內發(fā)現(xiàn)攜帶OXA-24-like、OXA-58-like和NDM-1型基因的耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌。4.NDM-1型基因陽性的Pittii不動桿菌對碳青霉烯類抗生素耐藥主要可能是由外膜孔蛋白CarO缺失,AdeIJK外排泵及NDM-1酶共同作用的結果。而NDM-1型基因陽性的Nosocomialis不動桿菌與鮑曼不動桿菌對碳青霉烯類抗生素耐藥可能主要與AdeIJK外排泵及和NDM-1酶有關。5.NDM-1、NDM-6及NDM-9酶水解亞胺培南能力從強到弱依次為NDM-6、NDM-9和NDM-1酶。6.福州市流行的耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌的基因型為F型。在福建醫(yī)科大學附屬協(xié)和醫(yī)院燒傷ICU和綜合ICU流行的耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌的基因型不同,前者為D型,后者為F型。
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【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R446.5

【參考文獻】

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1 王賀;徐英春;王輝;陳民鈞;;不動桿菌屬菌種主動外排系統(tǒng)的研究進展[J];中華檢驗醫(yī)學雜志;2007年11期

2 周午瓊;;2005-2010年不動桿菌屬感染及耐藥性檢測[J];中華醫(yī)院感染學雜志;2012年07期

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本文編號：2322717