【摘要】：目的建立嗜麥芽窄食單胞菌16S ribosomal RNA基因的實(shí)時(shí)熒光環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增(Real Amp)快速檢測(cè)方法,為嗜麥芽窄食單胞菌的快速檢測(cè)提供一種新的方法。方法針對(duì)嗜麥芽窄食單胞菌16S ribosomal RNA基因設(shè)計(jì)的特異性引物,利用鏈置換DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)恒溫反應(yīng)60 min,通過實(shí)時(shí)檢測(cè)熒光信號(hào)來檢測(cè)嗜麥芽窄食單胞菌16S ribosomal RNA基因的擴(kuò)增。結(jié)果篩選實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):在使用引物4時(shí),出峰時(shí)間最短,故選擇引物4進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作。在11株相關(guān)菌株的檢測(cè)中,除嗜麥芽窄食單胞菌出現(xiàn)很好的陽(yáng)性外,其余菌株均為陰性。本研究檢測(cè)嗜麥芽窄食單胞菌DNA的靈敏度可達(dá)到4.07×10-5ng/μL。重復(fù)性分析表明:同一樣品重復(fù)檢測(cè)3次,幾乎同時(shí)出峰,擴(kuò)增曲線幾乎重疊,說明Real Amp的重復(fù)性良好。結(jié)論嗜麥芽窄食單胞菌的Real Amp檢測(cè)方法穩(wěn)定性高,反應(yīng)快速,特異性強(qiáng),具有較大的推廣及應(yīng)用前景,可用于嗜麥芽窄食單胞菌的快速檢測(cè)。
[Abstract]:Results the results showed that primer 4 had the shortest peak time, so primer 4 was selected for further experiment. In this study, the sensitivity of detecting the DNA of Stenotrophomonas maltophilia was 4.07 脳 10-5ng/ 渭 L. The repeatability analysis showed that the same sample was detected 3 times, almost at the same time, and the amplification curve almost overlapped, which indicated that Real Amp had good reproducibility.
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院檢驗(yàn)科;廣州醫(yī)科大學(xué)金域檢驗(yàn)學(xué)院;
【基金】：廣州市醫(yī)藥衛(wèi)生科技一般引導(dǎo)項(xiàng)目(編號(hào):20151A011083) 廣州醫(yī)科大學(xué)大學(xué)生科技創(chuàng)新項(xiàng)目(編號(hào):2014A029) 大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào):2015105700045)
【分類號(hào)】：R440

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本文編號(hào)：2126139