【摘要】：目的建立嗜麥芽窄食單胞菌16S ribosomal RNA基因的實(shí)時熒光環(huán)介導(dǎo)恒溫擴(kuò)增(Real Amp)快速檢測方法,為嗜麥芽窄食單胞菌的快速檢測提供一種新的方法。方法針對嗜麥芽窄食單胞菌16S ribosomal RNA基因設(shè)計的特異性引物,利用鏈置換DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)恒溫反應(yīng)60 min,通過實(shí)時檢測熒光信號來檢測嗜麥芽窄食單胞菌16S ribosomal RNA基因的擴(kuò)增。結(jié)果篩選實(shí)驗發(fā)現(xiàn):在使用引物4時,出峰時間最短,故選擇引物4進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗操作。在11株相關(guān)菌株的檢測中,除嗜麥芽窄食單胞菌出現(xiàn)很好的陽性外,其余菌株均為陰性。本研究檢測嗜麥芽窄食單胞菌DNA的靈敏度可達(dá)到4.07×10-5ng/μL。重復(fù)性分析表明:同一樣品重復(fù)檢測3次,幾乎同時出峰,擴(kuò)增曲線幾乎重疊,說明Real Amp的重復(fù)性良好。結(jié)論嗜麥芽窄食單胞菌的Real Amp檢測方法穩(wěn)定性高,反應(yīng)快速,特異性強(qiáng),具有較大的推廣及應(yīng)用前景,可用于嗜麥芽窄食單胞菌的快速檢測。
[Abstract]:Results the results showed that primer 4 had the shortest peak time, so primer 4 was selected for further experiment. In this study, the sensitivity of detecting the DNA of Stenotrophomonas maltophilia was 4.07 脳 10-5ng/ 渭 L. The repeatability analysis showed that the same sample was detected 3 times, almost at the same time, and the amplification curve almost overlapped, which indicated that Real Amp had good reproducibility.
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院檢驗科;廣州醫(yī)科大學(xué)金域檢驗學(xué)院;
【基金】：廣州市醫(yī)藥衛(wèi)生科技一般引導(dǎo)項目(編號:20151A011083) 廣州醫(yī)科大學(xué)大學(xué)生科技創(chuàng)新項目(編號:2014A029) 大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目(編號:2015105700045)
【分類號】：R440

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 于新芬;潘勁草;汪皓秋;孟冬梅;鄭偉;張蔚;;實(shí)時熒光PCR檢測腸產(chǎn)毒性大腸埃希菌耐熱腸毒素基因[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2007年05期

2 劉金華;賀丹;史艷宇;黃宇;王麗;任常菲;;黑曲霉實(shí)時熒光PCR檢測方法的建立[J];中國生物制品學(xué)雜志;2009年03期

3 高秀潔;李杰;劉紅軍;;耐甲氧西林金黃色葡萄球菌實(shí)時熒光PCR檢測方法的建立和評價[J];分子診斷與治療雜志;2009年01期

4 張海平;楊莉佳;陶詩沁;趙英偉;;實(shí)時熒光PCR檢測病原真菌方法的建立及其臨床應(yīng)用[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2009年12期

5 劉曉岑;金玉娟;劉渠;許欣;陳應(yīng)堅;甘麗萍;楊慧;徐亞軍;;腸出血性大腸埃希菌雙重實(shí)時熒光PCR檢測方法的建立[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2012年07期

6 胡興文;實(shí)時熒光PCR影響因素分析[J];實(shí)用醫(yī)技雜志;2005年18期

7 彭雁忠;賈宏;鄒原;肖性龍;黃勝中;林鏡中;;多聯(lián)實(shí)時熒光PCR檢測幾種重要腸道致病菌的實(shí)驗研究[J];中國熱帶醫(yī)學(xué);2006年12期

8 邱楊;唐麗霞;趙麗;劉建麗;;志賀氏菌實(shí)時熒光PCR檢測試劑的研制[J];現(xiàn)代食品科技;2008年11期

9 張子群;謝曉峰;袁金錢;由軒;徐義剛;單琳琳;宋銘忻;;旋毛蟲實(shí)時熒光PCR檢測方法的建立與應(yīng)用研究[J];檢驗檢疫學(xué)刊;2009年03期

10 鄧平建;楊冬燕;;探討降低實(shí)時熒光PCR定量分析系統(tǒng)誤差的對策[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2011年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 李樹清;易建平;胡永強(qiáng);李健;王巧全;陳志飛;羅滿林;周筱華;夏謙;潘曉鐘;方怡;陳敏;;套式PCR和實(shí)時熒光PCR在檢測胸膜肺炎放線桿菌上的應(yīng)用[A];第六屆全國會員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會論文集（上）[C];2005年

2 李樹清;易建平;胡永強(qiáng);李健;王巧全;陳志飛;羅滿林;周筱華;夏謙;潘曉鐘;方怡;陳敏;;套式PCR和實(shí)時熒光PCR在檢測胸膜肺炎放線桿菌上的應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第六屆全國會員代表大會暨第11次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2005年

3 王金玲;張瑩;王芳;李俊環(huán);賈金生;;飼料中魚源性成分實(shí)時熒光PCR檢測方法的建立[A];動物檢疫學(xué)分會2010年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2010年

4 懷雁;徐麗慧;謝關(guān)林;余山紅;;水稻細(xì)菌性谷枯病菌的實(shí)時熒光PCR檢測技術(shù)研究[A];第四屆中國植物細(xì)菌病害學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

5 趙曉麗;李曉霞;胡大春;邵建春;陳弟;;自建實(shí)時熒光PCR方法與傳統(tǒng)血培養(yǎng)方法的比較[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國中青年檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

6 馬榮群;宋正旭;黃粵;岳文輝;李梅;;實(shí)時熒光PCR技術(shù)及其在植物病害檢測中的應(yīng)用[A];科技創(chuàng)新與綠色植�！袊参锉Ｗo(hù)學(xué)會2006學(xué)術(shù)年會論文集[C];2006年

7 陳丹;潘世揚(yáng);黃s顂，

本文編號：2126139