發(fā)布時間：2018-07-02 23:13

  本文選題：表皮葡萄球菌 + 生物膜�。� 參考：《第三軍醫(yī)大學》2015年博士論文

【摘要】：研究背景及目的表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis,S.epidermidis)是寄生于人類體表的一種條件致病菌,具有毒力低、致病力弱等特點,也是引起院內(nèi)感染的病原菌之一。近年來,隨著外科植入物、中心靜脈置管和人工心臟起搏器等生物材料的廣泛應用,S.epidermidis所致生物膜相關感染已引起研究者的密切關注。細菌生物膜的嚴重危害在于:棲身于生物膜中的細菌的耐藥性大大提高,傳統(tǒng)抗菌藥物難以殺滅這些細菌,并且往往導致生物材料相關治療的失敗。因此,研究S.epidermidis的生物膜形成,具有重要臨床意義�？咕幬锸桥R床治療細菌感染的重要手段。體內(nèi)抗菌藥物濃度低于最小抑菌濃度(minimal inhibitory concentrations,MIC)而處于亞抑菌濃度(sub-MIC)狀態(tài),是抗菌藥物治療過程中不可避免的情況,因此,研究這種條件下抗菌藥物對細菌生物膜形成的影響,對于進一步明確細菌生物膜形成過程及其影響因素、sub-MIC抗菌藥物作用下細菌的生物學行為、特征及機制有著重要的科學意義,同時可為開發(fā)治療生物膜感染的新型藥物提供理論參考。大環(huán)內(nèi)酯類藥物是臨床用于治療敏感葡萄球菌所致感染的常用抗菌藥物之一。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),紅霉素(erythromycin,ERY)、阿奇霉素(azithromycin,AZM)及克拉霉素(clarithromycin,CLR)在sub-MIC下,可誘導其耐藥S.epidermidis菌株生物膜形成,但對其敏感S.epidermidis菌株生物膜形成的影響是否與耐藥菌株相同,尚不清楚。最近研究顯示,細菌生物膜的形成能力與其對抗菌藥物的耐藥表型具有相關性,但sub-MIC抗菌藥物對細菌生物膜形成的影響是否也與細菌的耐藥特征相關?目前尚未見文獻報道。多聚糖胞間粘附素(polysaccharide intercellular adhesion,PIA)在S.epidermidis生物膜形成聚集階段具有重要作用,PIA由N-糖基轉(zhuǎn)移酶(N-glycosyltransferase,ica)基因簇編碼的蛋白調(diào)控合成。細菌Lux S/AI-2(autoinducer-2,AI-2)群體感應系統(tǒng)、DNA結合蛋白Sar A及ica基因簇的上游基因ica R編碼的Ica R蛋白均可調(diào)節(jié)ica A基因的轉(zhuǎn)錄表達或者PIA的分泌。雖有研究顯示sub-MIC抗菌藥物誘導S.epidermidis生物膜形成依賴于PIA合成增加,但其機制尚不清楚。本研究以sub-MIC ERY為干預因素,以臨床分離S.epidermidis菌株為研究對象,首先進行生物膜形成能力的檢測和亞抑菌濃度ERY對其生物膜形成的影響研究,結果發(fā)現(xiàn)sub-MIC ERY對生物膜形成的影響與菌株ERY耐藥表型相關,為驗證這種相關性,對11株ERY敏感株進行體外誘導耐藥,使其突變?yōu)镋RY耐藥株,考察sub-MIC ERY對誘導耐藥后菌株生物膜形成的影響;進一步研究發(fā)現(xiàn)耐藥基因erm C的轉(zhuǎn)錄表達發(fā)生了顯著變化,erm C的轉(zhuǎn)錄表達與ERY對S.epidermidis生物膜形成的影響相關;考察菌株PIA及其上游調(diào)控基因ica A、sar A、ica R、pfs及l(fā)ux S的轉(zhuǎn)錄表達,發(fā)現(xiàn)群體感應系統(tǒng)的pfs基因的轉(zhuǎn)錄發(fā)生了顯著變化,繼而又對Lux S/AI-2群體感應系統(tǒng)的信號分子進行了考察。研究方法第一部分亞抑菌濃度紅霉素對臨床分離表皮葡萄球菌生物膜形成的影響及其與細菌紅霉素耐藥表型的關系研究1.1對臨床分離菌株最小抑菌濃度(MIC值)的測定采用“標準瓊脂平板倍比稀釋法”,以標準菌株S.aureus ATCC29213TM作為質(zhì)控菌株,結果判讀參照“2010版實驗室標準化協(xié)會(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)”的標準進行,測定96株臨床分離S.epidermidis菌株的MIC值。1.2細菌生物膜形成的觀察方法采用結晶紫染色法觀察1/4 MIC ERY對S.epidermidis菌株生物膜形成的影響并統(tǒng)計分析1/4 MIC ERY作用下S.epidermidis菌株生物膜形成能力的改變與ERY耐藥表型的相關性。根據(jù)實驗室前期研究結果,如臨床分離S.epidermidis菌株的生物膜OD值≥2倍標準菌株S.epidermidis ATCC12228TM的生物膜OD值,則認為該菌株具有生物膜形成能力。1/4 MIC ERY對臨床分離S.epidermidis菌株生物膜形成的影響分為誘導、抑制或者不受影響三種類型,其區(qū)分標準如下:t檢驗比較各菌株ERY組與TSB對照組的生物膜OD值是否存在統(tǒng)計學差異。如果p0.05且ERY組的OD值大于TSB組的OD值,則認為該菌株生物膜形成發(fā)生了誘導現(xiàn)象;如果p0.05且ERY組的OD值小于TSB組的OD值,則認為該菌株生物膜形成發(fā)生了抑制現(xiàn)象;如果p0.05,則不管ERY組的OD值大于還是小于TSB組的OD值,均認為該菌株生物膜形成未發(fā)生變化。對后續(xù)實驗菌株的篩選標準是:生物膜形成能力強,生物膜形成被1/4 MIC ERY誘導或者抑制最明顯,且標準差小的菌株。1.3使紅霉素敏感菌株突變成紅霉素耐藥株的體外連續(xù)傳代誘導法挑取單菌落,轉(zhuǎn)種于含有1/4 MIC ERY的自制M-H培養(yǎng)皿上,37℃恒溫培養(yǎng)24h-72 h。再次挑取單菌落,轉(zhuǎn)種于含有1/2MIC(前一濃度的2倍)ERY的M-H培養(yǎng)皿上,按照相同條件培養(yǎng)24 h-72 h。此步驟重復至含有ERY的M-H培養(yǎng)皿上不再有菌落生長為止。取ERY最高濃度培養(yǎng)皿上生長的保存菌株,在無ERY的M-H培養(yǎng)皿上連續(xù)轉(zhuǎn)種3次,取末次生長的菌株,測定其誘導后的ERY MIC值,再考察1/4 MIC ERY對這些菌株生物膜形成的影響。1.4實驗菌株生物膜形成的劑量-效應和時間-效應考察條件劑量-效應實驗,ERY的濃度范圍為1/256 MIC~3/4 MIC;時間-效應實驗,生物膜形成考察時間點為2 h、4 h、6 h、12 h和24 h。1.5實驗菌株生長曲線的測定方法細菌培養(yǎng)0 h、1 h、2 h、3 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、24 h,然后取所培養(yǎng)菌液加入無色透明96孔平底培養(yǎng)板中,在酶標儀530 nm波長處測定各菌株菌液的OD值。如果測定值3.0,則2倍稀釋后再次測定,直至測定值在0.1~3.0范圍內(nèi)。菌液實際OD值=菌液平均OD值*稀釋倍數(shù)。第二部分臨床分離表皮葡萄球菌大環(huán)內(nèi)酯類耐藥基因分布及1/4最小抑菌濃度紅霉素作用下erm基因的轉(zhuǎn)錄表達研究2.1聚合酶鏈式反應(PCR)鑒定臨床分離菌株大環(huán)內(nèi)酯類耐藥基因的攜帶情況采用PCR法檢測96株臨床分離S.epidermidis菌株中erm A,erm B及erm C基因的分布情況,并對其中分布最廣的erm C基因進行序列測定和同源性分析。2.2 1/4最小抑菌濃度紅霉素作用下實驗菌株erm C基因轉(zhuǎn)錄表達水平的時間-效應考察采用real time RT-PCR方法,考察與1/4 MIC ERY共同孵育0.5 h、2 h、6h、12 h和24 h,實驗菌株SH04和SH10的erm C基因的轉(zhuǎn)錄表達水平受其影響的情況,分析erm C基因的轉(zhuǎn)錄表達水平變化與1/4 MIC ERY對實驗菌株生物膜形成影響的可能關系。2.3 erm C基因轉(zhuǎn)錄表達水平與生物膜OD值比率的相關性分析根據(jù)erm C基因轉(zhuǎn)錄表達的時間-效應實驗結果,隨機抽取生物膜形成受1/4 MIC ERY抑制、誘導和不受其影響三種表型的菌株各8-9株,采用real time RT-PCR方法,考察與1/4 MIC ERY共同孵育2 h,各菌株erm C基因的轉(zhuǎn)錄表達情況,分析該因素與1/4 MIC ERY作用下S.epidermidis菌株生物膜OD值與無ERY作用下S.epidermidis菌株生物膜OD值的比率之間的可能關系。第三部分多聚糖胞間粘附素及其上游調(diào)控子在1/4最小抑菌濃度紅霉素影響臨床分離表皮葡萄球菌菌株生物膜形成中的作用研究3.1雙熒光染色法觀察實驗菌株生物膜形成及多聚糖胞間粘附素的分泌將蓋玻片生長的生物膜固定晾干后用FITC-Con A和PI先后染色。激光共聚焦顯微鏡1000倍下,觀察1/4 MIC ERY對S.epidermidis菌株生物膜形成過程及PIA分泌量的影響。其中標記為綠色熒光的是細菌多糖和標記為紅色熒光的是細菌核酸(PI-DNA復合物的激發(fā)和發(fā)射波長分別為535 nm和615 nm)。3.2細菌多糖的檢測方法采用硫酸-苯酚法測定實驗菌株多糖的合成量,490 nm波長測定OD值(各樣品稀釋倍數(shù)為40倍)。3.3自誘導分子-2(AI-2)發(fā)光強度測定方法采用生物發(fā)光法考察Lux S/AI-2群體感應系統(tǒng)信號分子AI-2的合成情況,以上樣后第3h的測定值作為各樣本的發(fā)光強度值。主要研究結果第一部分亞抑菌濃度紅霉素對臨床分離表皮葡萄球菌菌株生物膜形成的影響及其與細菌紅霉素耐藥表型的關系研究1.臨床分離表皮葡萄球菌菌株的紅霉素耐藥情況96株臨床分離S.epidermidis中,85株為ERY耐藥(MIC≥8 mg/L)菌株,耐藥率為88.5%。其中15株MIC值在8~128 mg/L范圍內(nèi),70株MIC值≥128 mg/L。2.1/4最小抑菌濃度紅霉素對臨床分離表皮葡萄球菌生物膜形成的影響結果顯示,96株臨床分離S.epidermidis菌株均可形成生物膜。生物膜形成受1/4MIC ERY影響的菌株共27株,且都是ERY耐藥菌株。其中4株生物膜形成發(fā)生了抑制現(xiàn)象(p0.05),23株生物膜形成發(fā)生了誘導現(xiàn)象(p0.05)。生物膜誘導菌株中,18株的生物膜誘導程度在1.11-2.0倍之間,5株的生物膜誘導程度大于2倍。其余58株ERY耐藥菌株及11株ERY敏感菌株的生物膜形成均未受1/4 MIC ERY的明顯影響。統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn),1/4 MIC ERY對臨床分離S.epidermidis ERY耐藥菌株和敏感菌株生物膜形成的影響,差異有統(tǒng)計學意義(p=0.031)。這提示,1/4 MIC ERY作用下,臨床分離S.epidermidis菌株生物膜形成與菌株的ERY耐藥表型相關。3.體外誘導耐藥結果及1/4最小抑菌濃度紅霉素對誘導耐藥前后菌株生物膜形成的影響11株臨床分離ERY敏感S.epidermidis菌株均被成功誘導成ERY耐藥菌株,誘導耐藥后的MIC值分布在16~256μg/ml范圍。平行考察1/4 MIC ERY作用下,11株ERY敏感S.epidermidis菌株及其誘導耐藥后菌株的生物膜形成情況,結果顯示:誘導耐藥后S.epidermidis菌株SH22、SH51和SH67的ERY組生物膜OD值與其對照組比較,明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);誘導耐藥后S.epidermidis菌株SH40、SH46、SH52和SH77的ERY組生物膜OD值與其對照組比較,明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。原11株ERY敏感S.epidermidis菌株ERY組生物膜OD值與其對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。4.亞抑菌濃度紅霉素對實驗菌株生物膜形成影響的劑量-效應結果結果顯示,標準菌株S.epidermidis ATCC35984TM在1/256 MIC~3/4 MIC ERY作用下,其ERY組生物膜OD值與對照組比較,差異均無統(tǒng)計學意義(p0.05)。臨床分離菌株SH04在1/4 MIC、1/2 MIC和3/4 MIC ERY作用下,其ERY組生物膜OD值與對照組比較,均明顯降低,抑制程度分別為13.6%,17.1%和18.5%,差異有統(tǒng)計學意義(p0.01);而1/4 MIC、1/2 MIC和3/4 MIC ERY組組間生物膜OD值比較,差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。臨床分離菌株SH10在1/128 MIC~3/4 MIC ERY作用下,其ERY組生物膜OD值與對照組比較,均明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(p0.01);而1/4 MIC ERY組生物膜OD值明顯高于3/4 MIC、1/2 MIC、1/8 MIC、1/16 MIC、1/32MIC、1/64 MIC和1/128 MIC ERY組,差異有統(tǒng)計學意義(p0.01)。5.1/4最小抑菌濃度紅霉素對實驗菌株生物膜形成影響的時間-效應結果標準菌株S.epidermidis ATCC35984TM各時間點ERY組生物膜OD值與對照組比較,差異均無統(tǒng)計學意義(p0.05);臨床分離菌株SH04與1/4 MIC ERY共同孵育4 h、6 h、12 h和24 h,其ERY組生物膜形成分別被抑制20.1%、19.5%、10.7%和13.6%,生物膜OD值與對照組比較,差異有統(tǒng)計學意義(p0.01)。臨床分離菌株SH10與1/4 MIC ERY共同孵育2 h、4 h和6 h,ERY組生物膜OD值與對照組比較,均明顯減少,差異有統(tǒng)計學意義(p0.01);與1/4 MIC ERY共同孵育12 h和24 h,其生物膜形成分別被誘導49.4%和99.7%,ERY組生物膜OD值與對照組比較,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。6.1/4最小抑菌濃度紅霉素對實驗菌株生長情況的影響1/4 MIC ERY作用下,標準菌株S.epidermidis ATCC35984TM和臨床分離菌株SH04ERY組24 h內(nèi)生長情況與對照組相似(p0.05);臨床分離菌株SH10 ERY組2 h、3h、6 h、8 h和10 h時間點生長受到明顯抑制(p0.05),12 h和24 h時間點ERY組生長情況與對照組相似(p0.05)。第二部分臨床分離表皮葡萄球菌大環(huán)內(nèi)酯類耐藥基因分布及1/4最小抑菌濃度紅霉素作用下erm基因的轉(zhuǎn)錄表達研究1.96株臨床分離表皮葡萄球菌erm A、erm B及erm C基因的分布情況96株S.epidermidis菌株erm C基因的陽性擴增率為94.8%(91/96);erm A及erm B基因的陽性擴增率均為6.2%(6/96)。統(tǒng)計學分析結果提示,各基因的分布情況在生物膜形成不同影響類型臨床分離S.epidermidis菌株之間無差異(p0.05)。其中erm C基因在生物膜形成發(fā)生抑制、誘導和不受影響的S.epidermidis菌株中分布率分別為:100%、95.7%和94.2%。將各菌株擴增出的erm C基因產(chǎn)物進行堿基序列測定,并將測得的堿基序列在Pubmed NCBI基因庫中進行同源序列比對,結果各菌株測得的堿基序列與NCBI基因庫中的同源序列比較,同源性達99%,未發(fā)現(xiàn)有意義的突變位點。2.實驗菌株erm C基因轉(zhuǎn)錄表達水平的時間-效應結果對臨床分離S.epidermidis菌株SH04和SH10 erm C基因的轉(zhuǎn)錄表達水平進行時間-效應考察發(fā)現(xiàn):在0.5 h、2 h和12 h時間點,生物膜抑制菌株SH04的erm C基因的轉(zhuǎn)錄表達發(fā)生明顯抑制(p0.05);在6 h時間點,該菌株erm C基因的轉(zhuǎn)錄表達發(fā)生明顯誘導(p0.05);在24 h時間點,該菌株erm C基因的轉(zhuǎn)錄表達發(fā)生抑制,但與對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。在0.5 h、2 h和6 h時間點,生物膜誘導菌株SH10的erm C基因的轉(zhuǎn)錄表達發(fā)生顯著誘導(p0.05);在12 h和24 h時間點,該菌株erm C基因的轉(zhuǎn)錄表達均發(fā)生抑制,但孵育12 h,ERY組erm C基因的轉(zhuǎn)錄表達與對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義(p0.05);而孵育24 h,ERY組erm C基因的轉(zhuǎn)錄表達顯著低于對照組(p0.05)。3.erm C基因的轉(zhuǎn)錄表達水平與表皮葡萄球菌生物膜OD值比率的相關性根據(jù)erm C基因轉(zhuǎn)錄表達水平的時間-效應結果,本研究考察了25株ERY耐藥S.epidermidis菌株與1/4 MIC ERY共同孵育2 h,erm C基因的轉(zhuǎn)錄表達情況,其中9株生物膜誘導菌株ERY組erm C基因的轉(zhuǎn)錄表達水平是對照組的0.5-2.46倍;8株生物膜抑制菌株ERY組erm C基因的轉(zhuǎn)錄表達水平是對照組的0.74-2.14倍;8株生物膜不受影響菌株ERY組erm C基因的轉(zhuǎn)錄表達水平是對照組的0.76-2.24倍。合并分析上述25株S.epidermidis菌株erm C基因的轉(zhuǎn)錄表達水平與相應菌株ERY組生物膜OD值和對照組生物膜OD值的比率之間的相關性,結果顯示,上述兩個變量之間幾乎不具有直線相關關系(n=25,r=-0.07,R2=0.0044)。進一步分層統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn):在生物膜形成誘導菌株中,erm C基因的轉(zhuǎn)錄表達水平與相應菌株ERY組生物膜OD值和對照組生物膜OD值的比率之間存在線性正相關關系(n=9,r=0.70,R2=0.4992);在生物膜形成抑制菌株中,上述兩個變量之間存在線性負相關關系(n=8,r=-0.61,R2=0.3686);而在生物膜形成不受影響菌株中,上述兩個變量之間僅存在非常微弱的線性正相關關系(n=8,r=0.21,R2=0.0512)。第三部分多聚糖胞間粘附素及其上游調(diào)控子在1/4最小抑菌濃度紅霉素影響臨床分離表皮葡萄球菌菌株生物膜形成中的作用研究1.雙熒光染色法觀察1/4最小抑菌濃度紅霉素對實驗菌株生物膜形成和多聚糖胞間粘附素分泌的影響雙熒光染色法考察與1/4 MIC ERY共孵育6 h、12 h和24 h,各實驗菌株生物膜形成和PIA分泌的變化情況,結果顯示:標準菌株S.epidermidis ATCC35984TM ERY組在各時間點生物膜形成及生物膜內(nèi)綠色熒光強度均與對照組近似。臨床分離株SH04ERY組在各時間點生物膜形成比對照組稀疏;而其生物膜內(nèi)綠色熒光強度均比對照組弱。臨床分離株SH10 ERY組在12 h和24 h時間點生物膜形成均比對照組致密,罕見空洞存在,其生物膜內(nèi)綠色熒光強度均比對照組強;而在6 h時間點,其ERY組生物膜形成較對照組稀疏,而其生物膜內(nèi)綠色熒光強度較對照組弱。2.1/4最小抑菌濃度紅霉素對實驗菌株多聚糖胞間粘附素分泌量的影響與1/4 MIC ERY共孵育6 h、12 h和24 h時間點,標準菌株S.epidermidis ATCC35984TM ERY組PIA含量與對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義(p0.05);而臨床分離S.epidermidis菌株SH04在6 h、12 h和24 h時間點,ERY組PIA含量較對照組明顯減少,差異有統(tǒng)計學意義(p0.01);臨床分離S.epidermidis菌株SH10在12 h和24 h時間點,ERY組PIA含量較對照組明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05),但在6 h時間點,其PIA含量明顯減少(p0.01)。上述結果顯示,各實驗菌株PIA分泌量的變化情況與雙熒光染色法觀察到的1/4 MIC ERY作用下,其生物膜形成的變化情況和PIA的分泌情況相一致。3.1/4最小抑菌濃度紅霉素對實驗菌株多聚糖胞間粘附素合成調(diào)控相關基因轉(zhuǎn)錄表達水平的影響與1/4 MIC ERY共同孵育2 h、4 h、6 h、12 h和24 h,標準菌株S.epidermidis ATCC35984TM ica A基因的轉(zhuǎn)錄表達水平與同時間點對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。與1/4 MIC ERY共同孵育4 h、6 h、12 h和24 h,臨床分離S.epidermidis菌株SH04 ica A基因的轉(zhuǎn)錄表達水平與同時間點對照組比較,發(fā)生明顯抑制,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);而2 h時間點ERY組ica A基因的轉(zhuǎn)錄表達水平與同時間點對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。與1/4 MIC ERY共同孵育6 h、12 h和24 h時間點,臨床分離S.epidermidis菌株SH10 ica A基因的轉(zhuǎn)錄表達水平與同時間點對照組比較,發(fā)生明顯誘導,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);而2 h時間點ERY組ica A基因的轉(zhuǎn)錄表達水平與同時間點對照組比較,發(fā)生明顯抑制,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);而4 h時間點ERY組ica A基因的轉(zhuǎn)錄表達水平與同時間點對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。與1/4 MIC ERY共同孵育2 h、4 h、6 h、12 h和24 h,標準菌株S.epidermidis ATCC35984TM pfs基因的轉(zhuǎn)錄表達水平與同時間點對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義(p0.05);與1/4 MIC ERY共同孵育2 h、4 h、6 h、12 h和24 h,臨床分離S.epidermidis菌株SH04 pfs基因的轉(zhuǎn)錄表達水平與同時間點對照組比較,發(fā)生明顯誘導,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);與1/4 MIC ERY共同孵育2 h、4 h、6 h、12 h和24 h,臨床分離S.epidermidis菌株SH10 pfs基因的轉(zhuǎn)錄表達水平與同時間點對照組比較,發(fā)生顯著抑制,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。同一時間點,不同菌株ERY組pfs基因的轉(zhuǎn)錄表達水平比較,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。與1/4 MIC ERY共同孵育2 h、4 h、6 h、12 h和24 h,標準菌株S.epidermidis ATCC35984TM、臨床分離菌株SH04及SH10的lux S和ica R基因的轉(zhuǎn)錄表達水平均不受1/4 MIC ERY的影響(p0.05)。與1/4 MIC ERY共同孵育4 h、6 h和12 h,各實驗菌株sar A基因的轉(zhuǎn)錄表達水平均不受1/4 MIC ERY的影響(p0.05);但在2 h時間點,菌株SH10 sar A基因的轉(zhuǎn)錄表達水平受到明顯抑制(p0.05);在24 h時間點,各實驗菌株sar A基因的轉(zhuǎn)錄表達均受到明顯抑制(p0.05)。4.1/4最小抑菌濃度紅霉素對實驗菌株群體感應系統(tǒng)信號分子AI-2合成的影響采用生物發(fā)光法檢測各實驗菌株AI-2信號分子的合成情況,結果發(fā)現(xiàn),標準菌株S.epidermidis ATCC35984TM ERY組AI-2發(fā)光強度與同一時間點對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義(p0.05);與1/4 MIC ERY共同孵育2 h、4 h、6 h、8 h和10 h,臨床分離S.epidermidis菌株SH04 AI-2發(fā)光強度與同一時間點對照組比較,明顯增強,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);與1/4 MIC ERY共同孵育2 h、4 h、6 h和8 h,臨床分離S.epidermidis菌株SH10 AI-2發(fā)光強度與同一時間點對照組比較,明顯減弱,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。結論1.1/4 MIC ERY對臨床分離ERY耐藥S.epidermidis菌株生物膜形成可產(chǎn)生誘導和抑制兩種相反的作用。2.ERY耐藥表型與1/4 MIC ERY對S.epidermidis菌株生物膜形成的影響具有一定相關性。3.erm C基因的轉(zhuǎn)錄表達水平可能與1/4 MIC ERY對S.epidermidis生物膜形成的影響具有線性相關關系。4.對PIA及其上游調(diào)控因子Lux S/AI-2群體感應系統(tǒng)的影響,可能是1/4 MIC ERY影響臨床分離S.epidermidis菌株生物膜形成的重要機制之一。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R446.5

【參考文獻】

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本文編號：2091278