本文選題：Ⅱ型單純皰疹病毒 + 實時熒光定量PCR��； 參考：《中國病原生物學雜志》2016年05期

【摘要】：目的建立一種快捷、靈敏、特異的Ⅱ型單純皰疹病毒(Herpes simplex virus 2,HSV-2)實時熒光定量PCR檢測體系。方法設(shè)計HSV-2糖蛋白E基因特異性引物,PCR擴增gE基因片段,并與pGEM-T-easy載體連接,構(gòu)建pGEM-T-easy-gE2重組質(zhì)粒。以連續(xù)10倍稀釋的濃度梯度制備PCR體系標準品質(zhì)粒,應(yīng)用SYBR Green法建立gE2real-time PCR方法并優(yōu)化引物濃度、Mg2+濃度、退火溫度和循環(huán)程序等條件,繪制標準曲線,并驗證方法的敏感性、特異性和穩(wěn)定性;用該方法檢測HSV-2感染小鼠生殖道拭子標本。結(jié)果 gE2real-time PCR的標準品線性關(guān)系良好(r2=0.997),其他婦科常見病原體無特異擴增;方法的最低檢測質(zhì)粒濃度為3.85×101 copy/μl,試驗的變異系數(shù)1%,檢測30份小鼠HSV-2感染生殖道拭子標本的陽性率為96.7%,高于常規(guī)PCR方法(80.0%)。結(jié)論gE2real-time PCR法檢測HSV-2具有靈敏、特異、重復(fù)性好,可用于HSV-2定性分析和病毒載量檢測。
[Abstract]:Objective to establish a rapid, sensitive and specific real-time quantitative PCR system for the detection of herpes simplex virus 2 HSV-2. Methods the ge gene fragment was amplified by PCR with HSV-2 glycoprotein E gene specific primer and ligated with pGEM-T-easy vector to construct pGEM-T-easy-gE2 recombinant plasmid. The standard quality particles of PCR system were prepared by continuous 10-fold dilution concentration gradient. The method of SYBR Green was used to establish gE2real-time PCR method. The conditions of primer concentration, annealing temperature and cycle procedure were optimized, the standard curve was drawn, and the sensitivity of the method was verified. The specificity and stability of this method were used to detect the reproductive tract swabs of mice infected with HSV-2. Results there was a good linear relationship between gE2real-time PCR standard and other common gynecological pathogens (R2D0.997), but no specific amplification was found in other gynecological pathogens. The lowest detection plasmid concentration was 3.85 脳 101 copy/ 渭 l. The coefficient of variation of the test was 1. The positive rate of 30 mouse reproductive tract swabs infected with HSV-2 was 96.7%, which was higher than that of routine PCR (80.0%). Conclusion the method of gE2 real-time PCR is sensitive, specific and reproducible for the detection of HSV-2. It can be used for qualitative analysis of HSV-2 and detection of viral load.
【作者單位】： 吉林醫(yī)藥學院檢驗學院;吉林大學生命科學學院;吉林省電力有限公司電力科學研究院;吉林省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗院;
【基金】：國家自然科學基金青年基金項目(No.31200692) 吉林省衛(wèi)生廳青年項目(No.2015Q042) 吉林市科技發(fā)展計劃資助項目(No.20156427)
【分類號】：R440

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本文編號：2085789