本文選題：SOD1 + DNA�。� 參考：《華中師范大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：基因治療為治療疾病提供了新手段,如何將有治療作用的基因?qū)塍w內(nèi)并進(jìn)入靶細(xì)胞表達(dá),是基因治療研究中急需解決的問題；另一方面將活性蛋白質(zhì)載入靶細(xì)胞釋放,治療因蛋白質(zhì)異常而引起的疾病正越來越受到人們的關(guān)注。這些設(shè)想的實現(xiàn)都需要高效的載體。不同細(xì)胞、不同細(xì)胞器具有不同的pH,這使得pH敏感型載體在基因和活性蛋白質(zhì)釋放方面具有天然的優(yōu)勢。為了實現(xiàn)對基因和活性超氧化物歧化酶(SOD1)的共釋放,我們嘗試構(gòu)建pH敏感的SOD1-DNA-CPP三元聚集體。在一定的條件下,SOD1以二聚體形式圍繞DNA模板,由一種協(xié)同的過程自組裝成含DNA的聚集體,可用于組裝仿病毒的基因和SOD1共釋放平臺,CPP的引入可增加聚集體進(jìn)入細(xì)胞的能力。當(dāng)pH改變時聚集體解聚,釋放出DNA和SOD1。我們首先研究了酸性條件下DNA和SOD1的組裝,發(fā)現(xiàn)在pH4.0的環(huán)境中可以形成不同粒徑的聚集體；它們可在pH 7.4的環(huán)境中解聚,將SOD1和質(zhì)粒DNA釋放出來,釋放的SOD1的活性和DNA的結(jié)構(gòu)幾乎沒有改變。引入少量的CPP可以通過非特異性的靜電相互作用與SOD1-DNA形成SOD1-DNA-CPP三元聚集體,提高聚集體進(jìn)入細(xì)胞的能力。延長反應(yīng)時間可以增加聚集體的穩(wěn)定性,但對SOD1的活性和DNA的結(jié)構(gòu)有一定的影響。其次,我們發(fā)現(xiàn)在近生理條件下,CPP、SOD1、質(zhì)粒DNA可通過非特異性的靜電相互作用形成不同粒徑的SOD1-DNA-CPP三元聚集體,聚集過程對SOD1的活性和DNA二級結(jié)構(gòu)的影響較小。與在酸性條件中構(gòu)建的聚集體相比,中性條件下形成的聚集體是通過帶正電荷的CPP與帶負(fù)電荷的SOD1、質(zhì)粒DNA同時作用形成的,所以需要加入過量的CPP。胞內(nèi)pH的改變會使SOD1所帶電荷發(fā)生變化從而可能使聚集體解聚,將目的基因和活性SOD1釋放出來。
[Abstract]:Gene therapy provides a new method for the treatment of disease. How to transfer the therapeutic gene into the body and enter the target cell expression is an urgent problem in gene therapy research; on the other hand, the active protein is loaded into the target cell and released. People pay more and more attention to the treatment of diseases caused by abnormal protein. The realization of these ideas requires efficient carriers. Different cell and organelle have different pH, which makes pH sensitive vector have natural advantages in gene and active protein release. In order to realize the co-release of genes and active superoxide dismutase (SOD1), we try to construct the pH sensitive SOD1-DNA-CPP ternary aggregates. Under certain conditions, the DNA template is surrounded by dimer and self-assembled into DNA-containing aggregates by a synergistic process, which can be used to assemble virus-like genes and SOD1 co-release platform-CPP can increase the ability of aggregates to enter cells. When pH changed, the aggregates depolymerized, releasing DNA and SOD1. We first studied the assembly of DNA and SOD1 under acidic conditions, and found that aggregates with different particle sizes could be formed in pH 4.0, and they could be depolymerized in pH 7.4 to release SOD1 and plasmid DNA. The activity of the released SOD1 and the structure of DNA were almost unchanged. The introduction of a small amount of CPP can form SOD1-DNA-CPP ternary aggregates through non-specific electrostatic interaction with SOD1-DNA, and improve the ability of aggregates to enter cells. Prolonging reaction time can increase the stability of aggregates, but it has a certain effect on the activity of SOD1 and the structure of DNA. Secondly, we found that under near physiological conditions, plasmid DNA can form SOD1-DNA-CPP ternary aggregates with different particle sizes through non-specific electrostatic interaction, and the aggregation process has little effect on the activity of SOD1 and the secondary structure of DNA. Compared with the aggregates constructed in acidic conditions, the aggregates formed under neutral conditions are formed by the interaction of positively charged CPP and negatively charged SOD1, plasmid DNA, so excessive CPP is needed. The change of intracellular pH will change the charge of SOD1, which may depolymerize the aggregates and release the target gene and active SOD1.
【學(xué)位授予單位】：華中師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R450

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 MA Wen li;DNA Diagnosis and Gene Therapy:Advances and Prospects in the 21st Century[J];深圳大學(xué)學(xué)報;2000年04期

2 葛學(xué)銘,陸應(yīng)麟,付生法,范文紅,劉爽;A NOVEL HUMAN DNA SEQUENCE WITH TUMOR METASTASIS SUPPRESSIVE ACTIVITY[J];Chinese Journal of Cancer Research;2000年02期

3 曹暉,劉玉萍,小松かつ子,畢培曦,邵鵬柱;DNA Molecular Profiling:A New Approach to Quality Control of Chinese Drugs[J];Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine;2000年01期

4 ;DNA REPAIR CAPACITY IN LUNG CANCER PATIENTS[J];癌變.畸變.突變;2001年04期

5 黃力拉,朱剛勁;被拐賣及失蹤兒童采血驗DNA前的心理問題及對策[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2001年03期

6 安小惠 ,王一理 ,來寶長 ,耿一萍 ,司履生;CONSTRUCTION OF HUMAN INTERLUEKIN-18 DNA VACCINE AND IT'S EXPRESSION IN MAMMALIAN CELLS[J];Journal of Xi'an Medical University;2001年02期

7 ;A Study of PCR with DNA Extracted from Single Cell Isolated from Histological Sections[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2001年01期

8 王軍陽,范桂香,勝利,袁育康;THE CONSTRUCTION AND PRELIMINARY APPRAISEMENT OF HSV-2 gD GENE DNA VACCINE[J];Academic Journal of Xi'an Jiaotong University;2002年02期

9 董菁 ,成軍 ,王勤環(huán) ,施雙雙 ,王剛 ,斯崇文;CLONING AND ANALYSIS OF THE GENOMIC DNA SEQUENCE OF AUGMENTER OF LIVERR EGENERATION FROM RAT[J];Chinese Medical Sciences Journal;2002年02期

10 ;Real time observation of the photocleavage of single DNA molecules[J];Chinese Science Bulletin;2003年07期

相關(guān)會議論文 前10條

1 Michael J.Siefkes;Cory O.Brant;Ronald B.Walter;;A novel real-time XL-PCR for DNA damage detection[A];漁業(yè)科技創(chuàng)新與發(fā)展方式轉(zhuǎn)變——2011年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2011年

2 ;Hormonal Regulation and Tumorigenic Role of DNA Methyltransferase[A];2011中國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議暨浙江省計劃生育與生殖醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會暨生殖健康講習(xí)班論文匯編[C];2011年

3 Dongmei Zhao;Fan Jin;Yuli Qian;Hefeng Huang;;Expression patterns of Dnmtl and Dnmt3b in preimplantational mouse embryos and effects of in-vitro cultures on their expression[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議婦科內(nèi)分泌會場（婦科內(nèi)分泌學(xué)組、絕經(jīng)學(xué)組、計劃生育學(xué)組）論文匯編[C];2012年

4 姜東成;蔣稼歡;楊力;蔡紹皙;K.-L.Paul Sung;;在聚吡咯微點致動下的DNA雜交行為[A];2008年全國生物流變學(xué)與生物力學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2008年

5 白明慧;翁小成;周翔;;聯(lián)鄰苯二酚類小分子作為DNA交聯(lián)劑的研究[A];第六屆全國化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

6 張曄;杜智;楊斌;高英堂;;檢測外周血中游離DNA的應(yīng)用前景(綜述)[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第29屆學(xué)術(shù)年會暨首屆生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會論文集[C];2009年

7 周紅;鄭江;王良喜;丁國富;魯永玲;潘文東;羅平;肖光夏;;CpG DNA誘導(dǎo)全身炎癥反應(yīng)綜合征的作用及其機制研究[A];全國燒傷創(chuàng)面處理、感染專題研討會論文匯編[C];2004年

8 ;EFFECTS OF Ku70-DEFICIENT ON ARSENITE-INDUCED DNA DOUBLE STRAND BREAKS, CHROMOSOMAL ALTERATIONS AND CELL CYCLE ARREST[A];海峽兩岸第三屆毒理學(xué)研討會論文摘要[C];2005年

9 李經(jīng)建;冀中華;蔡生民;;小溝結(jié)合方式中的DNA媒介電荷轉(zhuǎn)移[A];第十三次全國電化學(xué)會議論文摘要集（下集）[C];2005年

10 ;The interaction between Levofloxacine Hydrochloride and DNA mediated by Cu~(2+)[A];湖北省化學(xué)化工學(xué)會2006年年會暨循環(huán)經(jīng)濟(jì)專家論壇論文集[C];2006年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 本報記者 袁滿;平安：把“領(lǐng)先”作為DNA[N];經(jīng)濟(jì)觀察報;2006年

2 舒放;編織一個DNA納米桶[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2006年

3 閆潔;英兩無罪公民起訴要求銷毀DNA記錄[N];新華每日電訊;2008年

4 何德功;日本制成診斷魚病的“DNA書”[N];農(nóng)民日報;2004年

5 本報記者 張巍巍;DNA樣本也能作假[N];科技日報;2009年

6 周斌偉　鄒巍;蘇州警方應(yīng)用DNA技術(shù)一年偵破案件1887起[N];人民公安報;2011年

7 本報記者 楊天笑;揭秘“神探”DNA[N];蘇州日報;2011年

8 第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室教授 李福洋;破除法老DNA的咒語[N];東方早報;2011年

9 常麗君;DNA電路可檢測導(dǎo)致疾病的基因損傷[N];科技日報;2012年

10 常麗君;效率和質(zhì)量：“DNA制造業(yè)”兩大障礙被攻克[N];科技日報;2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 唐陽;基于質(zhì)譜技術(shù)的基因組DNA甲基化及其氧化衍生物分析[D];武漢大學(xué);2014年

2 池晴佳;DNA動力學(xué)與彈性性質(zhì)研究[D];重慶大學(xué);2015年

3 胡璐璐;哺乳動物DNA去甲基化過程關(guān)鍵酶TET2的三維結(jié)構(gòu)與P暬蒲芯縖D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 馬寅洲;基于滾環(huán)擴(kuò)增的DNA自組裝技術(shù)的研究[D];南京大學(xué);2014年

5 黃學(xué)鋒;精子DNA碎片的臨床意義：臨床和實驗研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

6 隋江東;APE1促進(jìn)DNA-PKcs介導(dǎo)hnRNPA1磷酸化及其在有絲分裂期端粒保護(hù)中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 劉松柏;結(jié)構(gòu)特異性核酸酶FEN1在DNA復(fù)制及細(xì)胞周期過程中的功能性研究[D];浙江大學(xué);2015年

8 王璐;哺乳動物中親本DNA甲基化的重編程與繼承[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2015年

9 齊文靖;染色質(zhì)改構(gòu)蛋白BRG1在DNA雙鏈斷裂修復(fù)中的作用及機制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

10 龍湍;水稻T-DNA插入突變?nèi)后w側(cè)翼序列的分離分析和OsaTRZ2的克隆與功能鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 董洪奎;面向可視化納米操作的DNA運動學(xué)建模及誤差實時校正方法[D];沈陽理工大學(xué);2014年

2 聞金燕;水溶性羧基和吡啶基咔咯大環(huán)與DNA和人血清蛋白的相互作用[D];華南理工大學(xué);2015年

3 江懌雨;水溶性羧酸卟啉及其配合物與DNA和人血清蛋白的相互作用[D];華南理工大學(xué);2015年

4 高志森;比較外周游離循環(huán)腫瘤DNA與癌胚抗原監(jiān)測非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)前后腫瘤負(fù)荷變化的初步研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 丁浩;血漿循環(huán)DNA完整性及多基因甲基化對肺癌診斷價值的研究[D];河北大學(xué);2015年

6 王鵬;基于碳點@氧化石墨烯復(fù)合材料DNA生物傳感器的構(gòu)建及用于PML/RARα基因檢測[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

7 李海青;轉(zhuǎn)堿篷和鹽角草總DNA的耐鹽紫花苜蓿的選育[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

8 李婷婷;小鼠DNA模式識別重要受體的分子結(jié)構(gòu)特征及其功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

9 劉瑞斯;抗癌藥物奧沙利鉑與DNA相互作用的原子力顯微鏡觀察研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

10 熊忠;芳香二肽與一價金屬離子間相互作用及DNA切割活性的研究[D];鄭州大學(xué);2015年

，

本文編號：2077019