本文選題：疼痛 + 活體　； 參考：《中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2015年碩士論文

【摘要】：目的：建立清醒狀態(tài)下小鼠背根神經(jīng)節(jié)(DRG, dorsal root ganglion)觀測模型,并初步應(yīng)用于疼痛研究中,觀察疼痛模型中背根神經(jīng)節(jié)中神經(jīng)元的放電變化,為清醒狀態(tài)下疼痛模型小鼠背根神經(jīng)節(jié)觀測提供可行方法。方法：本研究分為三部分：1.建立清醒狀態(tài)下小鼠背根神經(jīng)節(jié)雙光子熒光顯微鏡成像觀察模型：研究對象為體重20-25g成年YFP (Yellow Fluorescent Protein,黃色熒光蛋白)轉(zhuǎn)基因熒光小鼠和GFP (Green Fluorescent Protein,綠色熒光蛋白)轉(zhuǎn)基因熒光小鼠。通過自制的一套小鼠脊椎固定裝置,建立背根神經(jīng)節(jié)雙光子熒光顯微鏡觀察窗,并對清醒狀態(tài)下背根神經(jīng)節(jié)觀察模型進(jìn)行成像時長、炎癥反應(yīng)、運動學(xué)和行為學(xué)驗證。該模型驗證指標(biāo)包括：成像時長;第1天和第7天兩時間段,背根神經(jīng)節(jié)固有炎癥相關(guān)的小膠質(zhì)細(xì)胞的密度變化;1-3天,4-6天,8-10天,14-15天四個不同階段的平均運動速度、后足距、步幅、靜止時間、整飾時間、進(jìn)食時間;術(shù)后即時,1-3天,4-6天,8-10天,14-15天五個不同階段的最大運動速度。另外,通過雙光子熒光顯微鏡成像效果和脊髓灰質(zhì)區(qū)電勢差記錄效果,初步檢測該裝置在清醒狀態(tài)下脊髓側(cè)面及脊髓背側(cè)觀察模型和脊髓灰質(zhì)電勢差記錄模型中的制動效果。2.小鼠背根神經(jīng)節(jié)AAV-CAG-GcaMP6 (Adeno-associated virus-CAG-GFP based-Calcium CaM probe,腺相關(guān)病毒-cag啟動子-綠色熒光蛋白結(jié)合鈣調(diào)蛋白和M13肽段探針)病毒注射及清醒狀態(tài)下雙光子熒光顯微鏡成像觀察：研究對象為體重20-25g成年C57BL/6j (C57)小鼠。通過自制的一套小鼠脊椎固定裝置對脊椎進(jìn)行固定,暴露背根神經(jīng)節(jié),并進(jìn)行背根神經(jīng)節(jié)AAV-CAG-GcaMP6病毒注射。病毒注射14-18天后,通過雙光子熒光顯微鏡成像進(jìn)行制動效果驗證和AAV-CAG-GcaMP6病毒注射后GcaMP6轉(zhuǎn)染效果檢測。3.小鼠疼痛模型的建立及活體清醒狀態(tài)下小鼠背根神經(jīng)節(jié)雙光子熒光顯微鏡成像觀察：研究對象為體重20-25g成年C57BL/6j (C57)小鼠。通過自制的一套小鼠脊椎固定裝置對脊椎進(jìn)行固定,暴露背根神經(jīng)節(jié),并進(jìn)行背根神經(jīng)節(jié)AAV-CAG-GcaMP6病毒注射。應(yīng)用小鼠足底注射福爾馬林建立疼痛模型。通過雙光子熒光顯微鏡成像檢測制動效果和GcaMP6轉(zhuǎn)染效果,并初步觀察疼痛模型中背根神經(jīng)節(jié)中神經(jīng)元的放電變化。結(jié)果：1.成功建立了清醒狀態(tài)下小鼠背根神經(jīng)節(jié)雙光子熒光顯微鏡成像觀察模型：小鼠制動效果良好,且能實現(xiàn)YFP轉(zhuǎn)基因小鼠背根神經(jīng)節(jié)長期活體觀察。裝置植入后運動功能得以保留。手術(shù)后連續(xù)15天連續(xù)成像,能持續(xù)穩(wěn)定顯示背根神經(jīng)節(jié)中假單級神經(jīng)元,神經(jīng)元胞核,軸突和樹突形態(tài)和數(shù)量。術(shù)后第7天,背根神經(jīng)節(jié)中小膠質(zhì)細(xì)明顯增多。小鼠內(nèi)置裝置后連續(xù)1-3天,4-6天,8-10天,14-15天,足間距(后肢的橫向距離),步幅長度,以及奔跑速度,在任意時間點,我們都沒有發(fā)現(xiàn)其步態(tài)有差異;術(shù)后1-3天,4-6天時,小鼠整飾時間會明顯增加,但是,隨著時間延長,這種差異會逐漸消失。不同時間段小鼠進(jìn)食時間并未發(fā)現(xiàn)差異。另外,我們發(fā)現(xiàn)內(nèi)置裝置的小鼠的最快速度會有些輕微的變化,但是并沒有統(tǒng)計學(xué)意義。同時,應(yīng)用該裝置能夠滿足清醒狀態(tài)下脊髓側(cè)／背面成像及脊髓灰質(zhì)區(qū)電勢差隨運動變化信號錄入時的制動要求。2.實現(xiàn)了AAV-CAG-GcaMP6病毒注射,并且GcaMP6病毒轉(zhuǎn)染效果良好。病毒注射14-18天后,我們能夠清晰觀察到整個背根神經(jīng)節(jié)中的神經(jīng)元,并發(fā)現(xiàn)背根神經(jīng)節(jié)中神經(jīng)元能夠隨著電刺激發(fā)生相應(yīng)的放電活動。3.該清醒狀態(tài)下小鼠背根神經(jīng)節(jié)觀察模型能夠很好的與疼痛研究相結(jié)合。通過自制脊椎固定裝置建立背根神經(jīng)節(jié)觀察窗,完成背根神經(jīng)節(jié)AAV-CAG-GcaMP6病毒注射,實現(xiàn)了疼痛模型中背根神經(jīng)節(jié)中神經(jīng)元放電活動的變化。我們發(fā)現(xiàn)足底注射福爾馬林疼痛模型小鼠背根神經(jīng)節(jié)中部分神經(jīng)元放電增快,我們推測該部分神經(jīng)元可能是背根神經(jīng)節(jié)中疼痛相關(guān)神經(jīng)元。結(jié)論：成功建立了清醒狀態(tài)下小鼠背根神經(jīng)節(jié)觀測模型,并將該模型成功的應(yīng)用到疼痛研究實驗中。為清醒狀態(tài)下背根神經(jīng)節(jié)疼痛覺甚至背根神經(jīng)節(jié)其他感覺的生理病理研究提供了新型的可行方法。
[Abstract]:Objective : To establish an observation model of dorsal root ganglion ( DRG ) and dorsal root ganglion ( DRG ) in conscious state , and to provide a feasible method for observing dorsal root ganglia in pain model . The model is divided into three parts : 1 . Establishment of a mouse dorsal root ganglion double photon fluorescence microscope observation window for conscious state . The model verification index includes : 1 - 3 days , 4 - 6 days , 8 - 10 days , 14 - 15 days , 4 - 6 days , 8 - 10 days , 14 - 15 days . The results were as follows : 1 . The results were as follows : 1 . After 14 - 18 days after operation , the results showed that the mice were 20 - 25g adult C57BL / 6j ( C57 ) mice . The results were as follows : 1 . The results showed that the mice were 20 - 25g adult C57BL / 6j ( C57 ) mice . We speculated that the partial neurons might be the pain - related neurons in dorsal root ganglia . Conclusion : The model of dorsal root ganglia observation in conscious state was successfully established and the model was successfully applied to pain research .

【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R402

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1877099