半巢式熒光定量PCR快速檢測(cè)登革Ⅰ型病毒成熟microRNA方法的建立
發(fā)布時(shí)間:2018-05-07 19:13
本文選題:成熟miRNA + 登革病毒Ⅰ型; 參考:《中國(guó)病原生物學(xué)雜志》2016年06期
【摘要】:目的建立外周血中登革病毒微小RNA檢測(cè)方法,探討其作為登革熱病毒感染生物標(biāo)記物的可行性。方法設(shè)計(jì)并篩選半巢式實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)登革病毒miRNA引物,驗(yàn)證方法的靈敏度、特異性和重復(fù)性。結(jié)果設(shè)計(jì)的登革病毒莖環(huán)引物和擴(kuò)增引物可區(qū)分健康人和登革熱Ⅰ型感染者;重復(fù)試驗(yàn)確定Ct≤35為登革病毒感染陽(yáng)性,Ct35為陰性,同一樣品內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.05%,樣品間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.15%,總體樣品的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為5%;該方法檢測(cè)miRNA的靈敏度為1×10-7μmol/L,檢測(cè)1~10-4μmol/L內(nèi)的miRNA呈良好的線性關(guān)系。該方法也顯示了較好的特異性。結(jié)論成功建立了半巢式SYBR GreenⅠ熒光定量qRT-PCR檢測(cè)Ⅰ型DENV的miRNA方法。外周血中成熟的miRNA可以作為一種潛在的DENV感染生物標(biāo)志物。
[Abstract]:Objective to establish a method for detection of dengue virus micro in peripheral blood and explore its feasibility as a biomarker of dengue virus infection. Methods Semi-nested real-time fluorescent quantitative PCR primers were designed and screened for the detection of dengue virus miRNA, and the sensitivity, specificity and reproducibility of the method were verified. Results the stem ring primers and amplified primers of dengue virus could be used to distinguish healthy persons from dengue virus type 鈪,
本文編號(hào):1858129
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