本文選題：紅細(xì)胞　切入點(diǎn)：異種輸血　出處：《重慶大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：血液作為一種特殊的資源,在臨床急救中有非常重要的應(yīng)用。然而,由于血液本身的特性及條件限制,無(wú)法進(jìn)行長(zhǎng)期保存,世界各國(guó)均存在不同程度的血源短缺。人們一直在努力尋找一種來(lái)源充足,安全有效的血液替代品作為目前庫(kù)血體系的補(bǔ)充。血液代用品研究主要有血紅蛋白類氧載體和異種紅細(xì)胞改性兩條發(fā)展思路。異種輸血的主要障礙是動(dòng)物與人的種間免疫排斥問題。近年來(lái),異種器官移植領(lǐng)域的一系列研究進(jìn)展,使異種輸血研究也逐漸成為輸血醫(yī)學(xué)新的研究熱點(diǎn)。本課題運(yùn)用微囊化免疫隔離技術(shù)包封紅細(xì)胞,正是異種紅細(xì)胞改性后作為潛在血液替代品研究的一種新嘗試。目的基于聚電解質(zhì)絡(luò)合原理,研究殼聚糖-海藻酸鈉包封紅細(xì)胞的工藝流程和適宜條件,制備單細(xì)胞包封的殼聚糖-海藻酸鈉改性紅細(xì)胞。分析殼聚糖-海藻酸鈉包封對(duì)紅細(xì)胞性質(zhì)與結(jié)構(gòu)功能的影響,研究殼聚糖-海藻酸鈉包封紅細(xì)胞的免疫原性與體內(nèi)循環(huán)時(shí)間,探討殼聚糖-海藻酸鈉包封的免疫隔離效果。研究包封紅細(xì)胞輸入動(dòng)物體內(nèi)的效果和影響,探索殼聚糖-海藻酸鈉包封紅細(xì)胞用于異種輸血的潛在可能性。方法采用不同濃度的殼聚糖和海藻酸鈉孵育紅細(xì)胞,通過(guò)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行紅細(xì)胞計(jì)數(shù),計(jì)算單包封紅細(xì)胞得率,優(yōu)化包封條件。運(yùn)用顯微(細(xì)胞)電泳實(shí)驗(yàn)測(cè)定包封過(guò)程中紅細(xì)胞表面電荷變化,并采用熒光標(biāo)記海藻酸鈉包封紅細(xì)胞的方法鑒定殼聚糖-海藻酸鈉包封紅細(xì)胞的結(jié)構(gòu)。采用光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡觀察包封紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)和完整性。測(cè)定包封前后紅細(xì)胞的尺寸和滲透脆性變化,采用紅細(xì)胞變形儀和血氧分析儀檢測(cè)包封紅細(xì)胞的變形性,聚集性以及氧親和力,分析包封紅細(xì)胞的力學(xué)特性和攜氧功能。運(yùn)用交叉配血試驗(yàn)觀測(cè)包封紅細(xì)胞與人標(biāo)準(zhǔn)血清,人血漿及大鼠血漿的聚集反應(yīng);采用小鼠尾靜脈注射紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)測(cè)定包封紅細(xì)胞的動(dòng)物體內(nèi)循環(huán)時(shí)間,分析聚糖-海藻酸鈉包封的免疫隔離效果。通過(guò)大鼠換血模型,失血性休克-微循環(huán)觀測(cè)模型以及大鼠重度失血性休克-復(fù)蘇模型研究殼聚糖-海藻酸鈉包封紅細(xì)胞輸入動(dòng)物體內(nèi)的攜氧功能、改善微循環(huán)和血流動(dòng)力學(xué)的特性以及綜合抗休克療效,探討包封紅細(xì)胞用于異種輸血的可行性。結(jié)果利用聚電解質(zhì)層層自組裝技術(shù),殼聚糖和海藻酸鈉在紅細(xì)胞外形成微囊膜,可以制備單包封的紅細(xì)胞,單包封紅細(xì)胞的得率接近90%。包封過(guò)程中紅細(xì)胞表面電荷由帶負(fù)電轉(zhuǎn)變?yōu)閹д?再轉(zhuǎn)為帶負(fù)電,制備完成的包封紅細(xì)胞帶負(fù)電荷的量與天然紅細(xì)胞相當(dāng)。殼聚糖-海藻酸鈉包封后紅細(xì)胞直徑略有增加,而形態(tài)學(xué)和滲透脆性基本沒有改變。包封紅細(xì)胞變形能力有所降低,與保存3周的人紅細(xì)胞相當(dāng),其聚集性沒有顯著變化。殼聚糖-海藻酸鈉微囊包封后紅細(xì)胞的氧親和力增大(P50值從接29.8下降到25.4mmHg),但更接近天然人紅細(xì)胞的氧親和力。殼聚糖-海藻酸鈉微囊包封使豬紅細(xì)胞與人標(biāo)準(zhǔn)血清反應(yīng)聚集程度由強(qiáng)陽(yáng)性下降為接近陰性,而與人冰凍混合血漿及大鼠混合血漿交叉配血的反應(yīng)強(qiáng)度降為接近陰性和陰性。紅細(xì)胞動(dòng)物體內(nèi)循環(huán)時(shí)間數(shù)據(jù)顯示,殼聚糖-海藻酸鈉包封豬紅細(xì)胞的24小時(shí)存活率接近50%,在小鼠體內(nèi)的半壽期為20.7小時(shí),約為未包封紅細(xì)胞的9倍。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,異種紅細(xì)胞經(jīng)過(guò)殼聚糖-海藻酸鈉包封后輸入大鼠體內(nèi)后不會(huì)被機(jī)體快速清除,與右旋糖酐溶液相比可以維持更高的平均動(dòng)脈壓和血液紅細(xì)胞壓積,提高換血大鼠的存活時(shí)間。加入包封紅細(xì)胞后,并沒降低右旋糖酐40良好的改善微循環(huán)的效果,能有效的改善并恢復(fù)由失血性休克引起的微循環(huán)障礙。在失血性休克-復(fù)蘇過(guò)程中輸入一定量的包封紅細(xì)胞有利于恢復(fù)和維持大鼠更高的平均動(dòng)脈壓,部分恢復(fù)剩余堿、動(dòng)脈血氧分壓以及pH等血?dú)庵笜?biāo),改善缺氧引起的機(jī)體代謝性酸中毒。與同種異體紅細(xì)胞類似,包封紅細(xì)胞一定時(shí)間內(nèi)能夠在體內(nèi)發(fā)揮正常紅細(xì)胞的功能,具有顯著的抗休克效果。結(jié)論本課題基于聚電解質(zhì)層層自組裝技術(shù),實(shí)現(xiàn)了紅細(xì)胞的殼聚糖-海藻酸鈉單細(xì)胞包封。殼聚糖-海藻酸鈉包封對(duì)紅細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能略有影響,但包封紅細(xì)胞仍具有與天然紅細(xì)胞類似的力學(xué)特性和攜氧功能。殼聚糖-海藻酸鈉微囊的免疫隔離效果能夠顯著降低異種紅細(xì)胞的免疫原性,延長(zhǎng)其體內(nèi)循環(huán)時(shí)間。包封紅細(xì)胞輸入動(dòng)物體內(nèi)后能夠在一定時(shí)間內(nèi)發(fā)揮正常紅細(xì)胞的功能,具有用于異種輸血的潛在可能性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R457.1

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