發(fā)布時間：2018-04-04 16:02

  本文選題：大腸埃希菌O　切入點(diǎn)：H　出處：《環(huán)境與健康雜志》2016年01期

【摘要】：目的篩選出能特異性識別大腸埃希菌O157:H7的單鏈DNA(ss DNA)適配體并進(jìn)行鑒定。方法利用全菌消減SELEX技術(shù),以完整菌體為靶標(biāo)菌和消減菌,通過體外篩選方法篩選出大腸埃希菌O157:H7特異性ss DNA適配體。利用熒光分光光度計、激光共聚焦顯微鏡、克隆測序、Chromas和DNAMAN分析軟件,分析適配體的一、二級結(jié)構(gòu),并對篩選得到的適配體進(jìn)行特異性鑒定。結(jié)果經(jīng)過7輪全菌消減SELEX篩選,熒光分光光度計檢測結(jié)果鑒定第六輪文庫富集達(dá)到飽和;通過測序分析、熒光分光光度計和激光共聚焦顯微鏡特異性檢測,獲得1條與大腸埃希菌O157:H7特異性結(jié)合的適配體Aptamer1。結(jié)論利用全菌消減SELEX技術(shù)成功篩選獲得大腸埃希菌O157:H7特異性ss DNA適配體。
[Abstract]:Objective to screen and identify a single strand DNA(ss DNA aptamer that can specifically recognize Escherichia coli O157:H7.Methods by means of full-bacterial subtractive SELEX technique, the specific SS DNA aptamer of Escherichia coli was screened by screening in vitro with intact bacteria as target and subtractive bacteria.The first and secondary structures of the aptamer were analyzed by fluorescence spectrophotometer, laser confocal microscope, clone sequencing and DNAMAN analysis software, and the specific identification of the aptamer was carried out.Results after 7 rounds of subtractive SELEX screening, the results of fluorescence spectrophotometer confirmed that the sixth round library was enriched to saturation, and the specificity of fluorescent spectrophotometer and laser confocal microscope was detected by sequencing analysis.An aptamer 1 was obtained which specifically binds to Escherichia coli O157:H7.Conclusion O157:H7 specific ss DNA aptamer of Escherichia coli was successfully screened by subtractive SELEX.
【作者單位】： 南昌大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所天津市環(huán)境與食品安全風(fēng)險監(jiān)控技術(shù)重點(diǎn)實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81270041)
【分類號】：R446.5

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