發(fā)布時(shí)間：2018-03-28 19:33

  本文選題：碳青霉烯酶　切入點(diǎn)：大腸埃希菌　出處：《浙江大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：碳青霉烯類(lèi)抗生素是臨床治療多重耐藥革蘭陰性菌感染的重要藥物,碳青霉烯耐藥腸桿菌科細(xì)菌的流行給臨床感染性疾病的治療帶來(lái)了很大難題,而耐藥的主要原因即是細(xì)菌產(chǎn)碳青霉烯酶,其中在我國(guó)以KPC型碳青霉烯酶最為常見(jiàn)。 本研究收集2012年7月至2014年1月杭州市中醫(yī)院和浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院臨床共25株產(chǎn)KPC酶大腸埃希菌。利用K-B紙片法測(cè)試所有菌株對(duì)22種常用抗菌藥物的敏感性；改良Hodge實(shí)驗(yàn)確認(rèn)菌株產(chǎn)碳青霉烯酶,PCR擴(kuò)增確認(rèn)blaKPC基因；脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)及多位點(diǎn)序列分型(MLST)技術(shù)進(jìn)行菌株同源性分析。利用濾膜接合實(shí)驗(yàn)將臨床菌株攜帶質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移至受體菌；堿裂解法提取質(zhì)粒；細(xì)菌包埋S1核酸酶酶切再PFGE的方法判斷質(zhì)粒分子量大小；挑選代表菌株進(jìn)行高通量測(cè)序及序列分析,注釋攜帶有blaKPC基因的片段,并設(shè)計(jì)引物PCR擴(kuò)增其余菌株,分析blaKPC基因的周?chē)Y(jié)構(gòu)；PCR擴(kuò)增篩查其它常見(jiàn)的耐藥基因。 25株臨床收集大腸埃希菌經(jīng)確認(rèn)均為產(chǎn)KPC酶菌株,編碼有blaKPC-2基因,這些產(chǎn)KPC酶菌株對(duì)大多常用抗菌藥物的耐藥率很高,均表現(xiàn)為多重耐藥菌。流行病學(xué)分析顯示,產(chǎn)KPC酶菌株來(lái)源病人以中老年為主,送檢的臨床科室分布有一定的集中性,多集中在急診科、ICU和老年病科。PFGE分型可以將25株菌株分為克隆A(4株)、克隆B(5株)和克隆C(2株),其余14株為散發(fā)克隆。MLST分型則分為8個(gè)ST型,其中以ST131型為主,共有14株,另外還包括ST167型3株,ST2003型3株,其余ST型各有1株,這些ST型之間同源性相距較遠(yuǎn)。臨床分離大腸埃希菌往往攜帶多個(gè)質(zhì)粒,質(zhì)粒分子量大小在25kb-200kb之間,而且大多具有可接合性。bldKPC-2基因由質(zhì)粒編碼,高通量測(cè)序所獲得的序列片段分析表明blaKPC-2基因位于一個(gè)Tn3-Tn4401復(fù)合轉(zhuǎn)座子中,并且大部分菌株都擁有一致的周?chē)Y(jié)構(gòu)。這些菌株還常共同編碼blaCTX-M、blaTEM、blaSHV、qnr、 aac(6')-Ib及rmtB等耐藥基因。 產(chǎn)KPC酶大腸埃希菌已經(jīng)出現(xiàn)院內(nèi)流行的趨勢(shì),這些菌株往往由質(zhì)粒編碼blaKPC等多種耐藥基因,耐藥性的傳播轉(zhuǎn)移能力很強(qiáng),急需加強(qiáng)醫(yī)院感染控制及耐藥性監(jiān)測(cè),以防止多重耐藥菌的大范圍播散。
[Abstract]:Carbapenem antibiotics are important drugs for the treatment of multidrug resistant gram-negative bacteria infection. The prevalence of carbapenem resistant Enterobacteriaceae bacteria has brought great difficulties to the treatment of clinical infectious diseases. The main reason of drug resistance is carbapenem produced by bacteria, of which KPC type carbapenem is the most common in China. From July 2012 to January 2014, 25 strains of Escherichia coli producing KPC enzyme were collected from Hangzhou Hospital of traditional Chinese Medicine and the first affiliated Hospital of Zhejiang University Medical College. K-B disk method was used to test the sensitivity of all strains to 22 commonly used antimicrobial agents. The modified Hodge assay confirmed that the blaKPC gene was confirmed by PCR amplification of carbapenem producing enzyme. Pulse field gel electrophoresis (PFGE) and multilocus sequence typing (MLST) were used to analyze the homology of the strains. The plasmids of clinical strains were transferred to the recipient bacteria by filtration membrane bonding experiment, and the plasmids were extracted by alkaline lysis. The method of bacterial embedding S1 nuclease digestion and PFGE was used to determine the molecular weight of plasmids, the representative strains were selected for high-throughput sequencing and sequence analysis, the fragments carrying blaKPC gene were annotated, and primers PCR were designed to amplify the other strains. The peripheral structure of blaKPC gene was analyzed by PCR to screen other common drug resistance genes. All 25 strains of Escherichia coli were confirmed to be KPC producing strains, encoding blaKPC-2 gene. The resistance rate of these KPC producing strains to most commonly used antimicrobial agents is very high, all of them are multidrug resistant bacteria. The patients from KPC producing strains were mainly middle and old people, and the clinical departments submitted for examination had a certain concentration. Most of the 25 strains were divided into four clones, four strains and five clones, and the other 14 strains were classified into 8 ST-types, including ST131 type (14 strains), sporadic clone and MLST type (14 strains), and the other 14 strains were classified into 8 ST-types, and the other 14 strains were classified into 8 ST-types, including ST131 type (14 strains), and the other 14 strains were classified as sporadic clones and MLST genotypes into 8 ST-types. In addition, there were 3 strains of ST167 type ST2003 and 1 strain of other ST-type. The homology of these ST-types was far away. Clinical isolates of Escherichia coli often carried multiple plasmids, and the molecular weight of the plasmids was between 25kb-200kb, and the molecular weight of the plasmids was in the range of 25kb-200kb. Moreover, most of the conjugable. BldKPC-2 genes were encoded by plasmids. Sequence analysis obtained by high throughput sequencing showed that the blaKPC-2 gene was located in a Tn3-Tn4401 complex transposon. And most of the strains have the same surrounding structure. These strains also coencode resistance genes such as blaCTX-Mnr, aac(6')-Ib, rmtB and so on. Escherichia coli producing KPC enzyme has become prevalent in hospitals. These strains are often encoded by plasmids and other multidrug resistant genes such as blaKPC. The ability of transmission and transfer of drug resistance is very strong. It is urgent to strengthen the control of nosocomial infection and surveillance of drug resistance. To prevent the wide spread of multidrug resistant bacteria.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R446.5

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1677776