本文選題：金黃色葡萄球菌腸毒素B　切入點：金納米粒子　出處：《重慶醫(yī)科大學》2015年碩士論文

【摘要】：目的：金黃色葡萄球菌是引起人類感染的一種重要致病菌,其在自然界中分布廣泛,耐藥譜廣,耐藥性強,因此在體外能夠很好的存活。金黃色葡萄球菌通過產生和分泌一系列毒素來攻擊人體的防御系統(tǒng)。其中SEB是最致命的毒素,SEB耐熱、耐酸,性質穩(wěn)定,能夠引起許多人類疾病,例如,爆發(fā)性紫癜、高熱、過敏性皮炎、壞死性肺炎。因此,采用快速、敏感的方法對低濃度的SEB進行檢測是我們研究的方向。本研究充分發(fā)揮納米復合材料的優(yōu)勢,構建了一種靈敏度高、特異性強的電化學適體傳感器。該傳感器采取目標物介導適體釋放策略,來實現(xiàn)對SEB的檢測,具有良好的分析性能和實際應用價值。方法：1.GNPs-ZrO2-Chits復合物的制備：利用Chits的還原性及生物相容性將HAuCl4原位還原成GNPs,并對進行ZrO2分散溶解,制備成GNPs-ZrO2-Chits復合物。2.SEB適體傳感器的制備：采用制備所得GNPs-ZrO2-Chits復合物修飾金電極表面,捕獲探針通過Au-S鍵固定于電極表面納米材料復合層,通過堿基互補配對原則,與適體鏈進行雜交反應。利用目標物介導適體釋放策略,定量檢測樣本中的SEB。3.優(yōu)化適體傳感器檢測的實驗條件：孵育時間、工作溶液pH值、SA-HRP和H2O2濃度等。4.考察電化學適體傳感器性能：線性范圍、最低檢測限、選擇性、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性等。5.實際標本的檢測：本方法與ELISA分別檢測13份血清標本中的SEB,進行方法學比較。結果：1.對制備所得的復合物分別進行形態(tài)學、光譜學和電化學分析,在透射電鏡圖中可見GNPs大小形態(tài)均勻的分散在Zr02表面,形成明顯的殼核結構,成像清晰；UV-vis及EDX進一步證實殼核結構的形成,表明GNPs-ZrO2-Chits復合物制備成功。循環(huán)伏安法和電化學交流阻抗共同證實了修飾電極的步驟。2.在實驗優(yōu)化條件下,將制備好的適體傳感器對SEB進行檢測,其電流響應達到最好。在此條件下,對不同濃度的目標物SEB進行檢測,在濃度2～512 ng/mL范圍內與DPV信號呈線性相關,相關系數(shù)為0.992,最低檢測限為0.24 ng/mL(S/N=3)。3.該傳感器性能優(yōu)越：4℃干燥情況下儲存15天后,電流響應僅下降了8.2%,穩(wěn)定性好；能特異的分辨SEA, SEC和凝血酶,選擇性好；相同條件下制備一批6個適體傳感器,分別檢測濃度32,64,128,256,和512 ng/mL目標物,得到相對標準偏差(RSD)分別為4.0%,5.6%,4.8%,5.2%和3.8%,重現(xiàn)性好。4.用所制備的適體傳感器和ELISA分別檢測實際樣本中的SEB,進行方法學比較,結果顯示兩種檢測方法的相關系數(shù)為0.998,表明該適體傳感器可以應用于實際標本的檢測。結論：本研究結果表明,將納米金-氧化鋯-殼聚糖膜修飾在電極上不僅能增加電極的導電性和有效表面積,并且可以增加核酸分子的固定量。更重要的是,采取目標物介導適體釋放的策略,使該適體傳感器擁有較寬的檢測范圍,較低的檢測限和較高的特異性。本研究的方法具有通用性,在置換相應的適體后,可以用于SEA、SEC等其他腸毒素的檢測,因此,能夠用于臨床上對腸毒素感染等相關疾病進行篩查。
[Abstract]:Objective: Staphylococcus aureus is an important cause of human infection of pathogenic bacteria, which is widely distributed in nature, broad resistance spectrum, strong resistance, so in vitro can survive well. Staphylococcus aureus through produce and secrete a series of toxins to attack the body's defense system in which SEB is the most deadly. SEB toxin, heat resistance, acid resistance, stable property, can cause many human diseases, for example, purpura fulminans, high fever, allergic dermatitis, necrotizing pneumonia. Therefore, the rapid and sensitive method for detection of low concentration of SEB is the direction of our research. This study give full play to nano composite material advantage, construct a high sensitivity, specificity and strong electrochemical aptamer sensor. The sensor to the target aptamer mediated release strategy, to achieve the detection of the SEB, has good performance analysis and practical application value. The party Method: the preparation of 1.GNPs-ZrO2-Chits composite by reducing Chits and biocompatibility of HAuCl4 in situ reduction GNPs, and dissolution of ZrO2, preparation of GNPs-ZrO2-Chits composite.2.SEB aptamer sensor preparation: the prepared GNPs-ZrO2-Chits composite modified gold electrode surface of the system, the capture probes immobilized on the electrode surface nano material composite layer by Au-S bond, through complementary base pairing, hybridization reaction with the aptamer. The target aptamer mediated release strategy, the SEB.3. optimal experimental conditions of body sensor detection quantitative detection of samples: the incubation time, solution pH value, SA-HRP and H2O2 concentration of.4. the electrochemical performance of suitable body sensor: the linear range, detection limit, selectivity, reproducibility and stability of.5. detection and ELISA: the actual samples were detected 13 serum specimens The SEB method was compared. Results: 1. of the complexes prepared respectively, morphology, and electrochemical spectroscopy analysis, TEM, visible GNPs in size and shape evenly dispersed on the surface of Zr02, the formation of core-shell structure, clear clear imaging; UV-vis and EDX further confirmed the formation of core-shell structure, show GNPs-ZrO2-Chits composite was prepared successfully. Cyclic voltammetry and electrochemical impedance confirmed by modified electrode process.2. under the optimized conditions, the prepared aptamer sensor for the detection of SEB, the current response to the best. Under these conditions, to detect different concentrations of target SEB in concentration in the range of 2~512 ng/mL and DPV signal was linearly correlated, the correlation coefficient was 0.992, the lowest detection limit was 0.24 ng/mL (S/N=3).3. performance of the sensor location: 4 C under dry condition after 15 days of storage, electric Flow response only decreased by 8.2%, the stability is good; the specific resolution SEA, SEC and thrombin, good selectivity; preparation of a batch of 6 aptasensors were detected under the same conditions, the concentration of 32,64128256, and 512 ng/mL target, relative standard deviation (RSD) were 4%, 5.6%, 4.8%, and 5.2% 3.8%, good reproducibility of.4. with the preparation of the aptamer and ELISA were detected in real samples SEB, methodology, results showed that the correlation coefficient of the two detection methods was 0.998, showed that the aptamer sensor can be applied to the actual specimen test. Conclusion: the results of this study show that the nano gold - zirconia - chitosan film modified electrode on the electrode can not only increase the conductivity and the effective surface area, and can increase the fixed amount of nucleic acid molecules. More importantly, take the target aptamer mediated release strategy, make the aptasensors. It has wide detection range, low detection limit and high specificity. The method of this research is universal. After replacement of corresponding aptamers, it can be used for other enterotoxin detection such as SEA and SEC, so it can be used for screening enterotoxin infection and other related diseases in clinic.

【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R446.5;TP212.3

【相似文獻】

相關期刊論文 前7條

1 王曉宇;孫李平;朱全剛;張瑋;張敏;張麗娟;戴子淵;高申;;透明質酸/聚酰胺-胺三元納米基因復合物的構建及其體外評價[J];第二軍醫(yī)大學學報;2012年12期

2 王[?鈞;操鋒;平其能;;雙氯芬酸鈉層狀雙金屬氫氧化物納米復合物的制備及性質研究[J];中國藥科大學學報;2009年04期

3 胥洪鵑;張陽德;陳玉祥;汪啟爐;;CTAB@SiO_2納米復合物作為基因轉染載體的研究[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志;2013年06期

4 孫曉利;宋繼斌;劉東華;李鵬;魯在君;張娜;;PEG-b-PLL的合成及其自組裝納米基因載體的研究[J];中國生化藥物雜志;2010年05期

5 白祖海;張瑾;吾爾葉提;;基于Cu~(2+)和碳納米管納米復合物的過氧化氫生物傳感器測定過氧化氫[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2014年18期

6 耿海霞;郭秀娟;錢君榮;封偉;;羥基磷灰石/凝膠納米復合物修復兔顱骨缺損的影像學評估[J];中國組織工程研究;2014年34期

7 ;[J];;年期

相關會議論文 前10條

1 祁寧;王元為;王丹丹;陳志權;;Co_3O_4/ZnO納米復合物微結構的正電子湮沒研究[A];第十四屆全國核物理大會暨第十屆會員代表大會論文集[C];2010年

2 吳麗艷;郭志華;滕利榮;高波;;羥基磷灰石/藥物納米復合物的制備研究[A];吉林省第六屆生命科學大型學術報告會論文集[C];2008年

3 陳譜;曹菲菲;張俐娜;;大豆蛋白／氫氧化鋁納米復合物的結構與性能[A];2005年全國高分子學術論文報告會論文摘要集[C];2005年

4 王曉亮;顧強;孫平川;H H Winter;薛奇;;固體核磁共振雙量子氫譜對聚丁二烯/粘土納米復合物中鏈動力學的研究[A];2011年全國高分子學術論文報告會論文摘要集[C];2011年

5 鄭田;盧曉峰;邊秀杰;張城城;王策;;CNT/PPy/K_xMnO_2三元納米復合物的制備及電催化性能研究[A];中國化學會第28屆學術年會第4分會場摘要集[C];2012年

6 武海青;何光裕;陳海群;孫小強;汪信;;多價態(tài)銀-還原氧化石墨烯納米復合物的光合成及其抗菌應用[A];中國化學會第28屆學術年會第5分會場摘要集[C];2012年

7 葉春雪;楊榮杰;儀德啟;;聚磷酸銨/鈣基蒙脫土納米復合物的結構與性質[A];2012年中國阻燃學術年會論文集[C];2012年

8 周輝輝;李娟;劉又年;;自組裝法制備茶多酚-明膠-葡聚糖納米復合物[A];2011年全國高分子學術論文報告會論文摘要集[C];2011年

9 李輝;吳思多;吳錦榮;黃光速;;石墨烯/聚苯乙烯納米復合物的導電性研究[A];2011年全國高分子學術論文報告會論文摘要集[C];2011年

10 仇士龍;袁鉆如;潘磊;王玉婷;謝鴻峰;程昒時;;氧化石墨/環(huán)氧樹脂納米復合物的固化行為研究[A];中國化學會第十五屆全國化學熱力學和熱分析學術會議論文摘要[C];2010年

相關博士學位論文 前10條

1 陳真真;智能響應性納米載體的基因輸送與腫瘤治療的研究[D];蘭州大學;2015年

2 劉莉;含c(RGDfk)環(huán)肽的自組裝納米復合物RPM/siRNA在腫瘤靶向治療中的應用[D];南方醫(yī)科大學;2015年

3 羅慶平;Al/Fe_2O_3-RDX納米復合物的反應特性研究[D];北京理工大學;2015年

4 陳美玲;石墨烯納米復合物的制備及其在生物成像中的應用研究[D];東北大學;2013年

5 劉媛媛;基于普魯蘭多糖的納米藥物遞送系統(tǒng)靶向抗肝癌作用研究[D];天津醫(yī)科大學;2015年

6 李雪;含咪唑陽離子功能化聚合物及其納米復合物的制備與性能研究[D];浙江大學;2012年

7 劉偉祿;新型納米復合物的制備及在電化學分析中的應用[D];吉林大學;2013年

8 司華艷;應用表面功能化的納米顆粒制備新型納米復合物的研究[D];蘭州大學;2009年

9 楊傳孝;核/殼量子點納米復合物的制備及其可視化熒光識別研究[D];華僑大學;2013年

10 董延茂;納米硫化物修飾的支鏈含雜原子功能高分子的合成與性能研究[D];蘇州大學;2008年

相關碩士學位論文 前10條

1 李嘉琳;功能化石墨烯納米復合物及其生物小分子電化學實時傳感研究[D];西南大學;2015年

2 黎青勇;纖維素基納米稀土發(fā)光復合材料的制備及發(fā)光性能研究[D];華南理工大學;2015年

3 余波杰;可共載化療藥物和基因以協(xié)同增強其抗腫瘤功效的葉酸修飾兩親性殼聚糖納米載體[D];復旦大學;2014年

4 季衛(wèi)東;近紅外光響應的納米復合物的制備及其藥物控釋性能研究[D];蘇州大學;2015年

5 盛仲夷;有機化改性蒙脫土的制備及其在聚合物中的應用[D];浙江大學;2013年

6 柳素青;合成MTX/LDHs納米復合物的研究及其抗腫瘤效應的探索[D];南京師范大學;2015年

7 霍曉磊;MTX納米復合物的可控合成、組裝及其對腫瘤細胞的抑制作用研究[D];南京師范大學;2015年

8 葉亞;碳載錫及其合金納米復合物的制備及儲鋰性能研究[D];南京師范大學;2015年

9 王日明;鐵基氧化物降解DDT性能的研究[D];山東大學;2015年

10 黃磊;氧化石墨烯基磁性熒光多功能復合納米材料的研究[D];重慶理工大學;2015年

，

本文編號：1672541