本文選題：人激肽釋放酶結(jié)合蛋白　切入點(diǎn)：細(xì)胞凋亡　出處：《南華大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：目的:探討人激肽釋放酶結(jié)合蛋白(Kallistatin,KS)重組體腺病毒(Ad-KS)對膿毒癥大鼠血清炎癥介質(zhì)及肺組織細(xì)胞凋亡的作用。方法:1、清潔級健康雄性SD大鼠32只,體重280±20g,隨機(jī)分成4組,分別為假手術(shù)組(SC組)、膿毒癥組(SEP組)、Ad-KS處理組(KS組)、空腺病毒(Ad-Null)對照組(AC組)。盲腸穿孔結(jié)扎術(shù)(cecal ligation and puncture,CLP)制備大鼠膿毒癥模型。2、KS組大鼠CLP術(shù)前48h經(jīng)大鼠尾靜脈注射Ad-KS進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染,使大鼠體內(nèi)表達(dá)人KS蛋白。AC組注射Ad-Null腺病毒作為對照。3、所有存活大鼠術(shù)后24h經(jīng)腹主動脈采血行血?dú)夥治?經(jīng)心臟采血行血常規(guī)、血生化,留取血清備用,放血法處死大鼠,快速取肺組織。4、蘇木精-伊紅染色(HE)觀察肺組織病理形態(tài)改變。ELISA法檢測血清炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-6及IL-10水平,Western Blot法檢測肺組織Caspase-3、Bax及Bcl-2的表達(dá)。TUNEL檢測觀察肺組織細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果:1、肺組織常規(guī)病理切片及HE染色發(fā)現(xiàn),SC組肺泡結(jié)構(gòu)完整,間質(zhì)未見增厚水腫,無明顯中性粒細(xì)胞及紅細(xì)胞浸潤。SEP組、AC組肺泡萎陷,肺泡腔縮小,肺間質(zhì)增厚、充血水腫,間質(zhì)內(nèi)大量中性粒細(xì)胞、紅細(xì)胞浸潤,部分可見肺實(shí)變。KS組與SEP組、AC組比較,肺泡萎陷程度減輕,間質(zhì)充血水腫及浸潤減輕。2、ELISA檢測血清炎癥介質(zhì)水平,SEP組、AC組血清促炎因子TNF-α、IL-6較SC組升高(P0.05),但抗炎因子IL-10無明顯升高。KS組血清TNF-α、IL-6較SEP組、AC組下降,抗炎因子IL-10升高(P0.05)。3、Western blot檢測肺組織凋亡相關(guān)蛋白表達(dá),SEP組、AC組肺組織Caspase-3表達(dá)較SC組明顯增加(P0.05)。KS組肺組織Caspase-3表達(dá)較SEP組、AC組減少。促凋亡蛋白Bax及抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)在SC組、SEP組、AC組間無明顯差異。KS組其Bax表達(dá)較其他三組減少,Bcl-2表達(dá)增加(P0.05)。4、TUNEL觀察肺組織細(xì)胞凋亡情況,SEP組、AC組較SC組肺組織細(xì)胞凋亡增加,KS組與SEP組、AC組相比凋亡減少。SEP組與AC組間無明顯差異。結(jié)論:1、Kallistatin重組體腺病毒降低膿毒癥大鼠血清TNF-α、IL-6水平、升高IL-10水平,發(fā)揮抗炎作用。2、Kallistatin重組體腺病毒抑制膿毒癥大鼠肺組織細(xì)胞凋亡及Caspase-3的表達(dá),減輕肺損傷。
[Abstract]:Objective: to investigate the effects of human kallikrein binding protein (Kallistatin- KS) recombinant adenovirus (Ad-KS) on inflammatory mediators in serum and apoptosis of lung tissue in septic rats. Methods: thirty two healthy male SD rats of clean grade, weighing 280 鹵20 g, were randomly divided into 4 groups. Sepsis model was established in sepsis rats 48 h before CLP in the sham operation group, the sepsis group and Ad-KS treatment group, Ad-Null group and AC group, respectively. Cecal ligation and puncture group was ligated by cecal perforation and ligation of caecum. The rat model of sepsis was induced by injection of CLP 48 hours before operation. Ad-KS gene transfection, The Ad-Null adenovirus was injected into the control group of rats expressing human KS protein in vivo. All the surviving rats were collected blood from abdominal aorta for blood gas analysis 24 hours after operation, and blood routine examination, blood biochemistry, blood biochemistry and serum collection were performed through the heart, and the rats were killed by bloodletting method. Lung tissue. 4 and hematoxylin-eosin staining.) to observe the pathological changes of lung tissue. Elisa to detect the level of serum inflammatory mediators TNF- 偽, IL-6 and IL-10. Western Blot method to detect the expression of Caspase-3, Bax and Bcl-2 in lung tissue. Tunel to detect the apoptosis of lung tissue cells. Results 1. Routine pathological sections of lung tissue and HE staining showed that the alveolar structure of SC group was intact. There was no thickening edema, no obvious neutrophil and erythrocyte infiltration. In the SEP group, alveolar collapse, alveolar lumen shrinkage, interstitial thickening, hyperemia edema, neutrophil infiltration and erythrocyte infiltration were observed in the AC group. Compared with the AC group of SEP group, the degree of alveolar collapse was reduced in KS group and SEP group. The level of serum inflammatory mediators in SEP group was higher than that in SC group (P 0.05), but the serum TNF- 偽 IL-6 level in KS group was lower than that in SEP group. Expression of apoptosis-related protein in lung tissue Caspase-3 expression in the AC group was significantly higher than that in the SC group. The expression of Caspase-3 in the lung tissue of the P0.05 + KS group was significantly lower than that in the SEP group, and the expression of Bax and Bcl-2 in the lung tissue was significantly lower than that in the control group (P < 0.05). The expression of apoptosis-related protein (Bax) and anti-apoptotic protein (Bcl-2) in the lung tissue were detected by Western blot. There was no significant difference between the two groups. The expression of Bax in KS group was lower than that in the other three groups. The increase of Bcl-2 expression was observed by Tunel. The apoptosis of lung tissue was observed by Tunel. The apoptosis of lung tissue in AC group was higher than that in SC group. The apoptosis of KS group was higher than that of SEP group. There was no significant difference between SEP group and AC group. Conclusion the recombinant adenovirus of Kallistatin can reduce the level of TNF- 偽 and IL-6 in serum of septic rats. To increase the level of IL-10 and to play an anti-inflammatory effect. 2. The recombinant adenovirus of Kallistatin inhibits the apoptosis of lung tissue and the expression of Caspase-3 in septic rats, and alleviates lung injury.
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R459.7

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本文編號：1665586