發(fā)布時間：2018-03-18 07:47

  本文選題：末端轉(zhuǎn)移酶端粒　切入點：RNA干擾　出處：《中國普通外科雜志》2016年12期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的:構(gòu)建靶向hTERT、hTR的新型RNAi表達(dá)框架,探討單獨及聯(lián)合干擾hTERT、hTR基因?qū)δ[瘤細(xì)胞端粒酶活性、細(xì)胞凋亡及周期的影響,以期找到腫瘤基因治療的新策略。方法:融合PCR構(gòu)建靶向hTERT、hTR的RNAi表達(dá)框架。各表達(dá)框架經(jīng)鑒定后分別或聯(lián)合轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞,TRAP-銀染法及TRAP-q PCR法檢測端粒酶活性,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡及周期。結(jié)果:靶向hTERT、hTR的新型RNAi表達(dá)框架構(gòu)建成功。與空白對照組或陰性對照組比較,無論轉(zhuǎn)染靶向hTERT或靶向hTR的RNAi表達(dá)框架后,A549細(xì)胞的端粒酶活性均明顯降低,細(xì)胞凋亡率均明顯增加,細(xì)胞G1阻滯明顯增加,而聯(lián)合轉(zhuǎn)染靶向hTERT與靶向hTR的RNAi表達(dá)框架后,A549細(xì)胞的上述改變較各自單獨轉(zhuǎn)染更為明顯(均P0.05)。結(jié)論:靶向hTERT、hTR的新型RNAi表達(dá)框架能夠有效抑制A549細(xì)胞的端粒酶活性,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,改變細(xì)胞周期。以人工mi RNA表達(dá)框架為基礎(chǔ)的新型RNAi技術(shù)有望成為腫瘤基因治療的新工具。
[Abstract]:Aim: to construct a novel RNAi expression framework targeting hTERTR, and to investigate the effects of alone and combined interference of hTERThTR gene on telomerase activity, apoptosis and cell cycle in tumor cells. Methods: PCR was fused to construct a RNAi expression framework targeting hTERTTR. The telomerase activity in A549 cells was detected by TRAP-silver staining and TRAP-q PCR after identification or co-transfection of each frame. Results: a novel RNAi expression frame targeting hTERTTR was successfully constructed, which was compared with that of blank control group or negative control group. The telomerase activity of A549 cells was significantly decreased, the apoptosis rate was significantly increased, and G1 arrest was significantly increased, regardless of the RNAi expression frame transfected with targeted hTERT or targeted hTR. These changes were more obvious in A549 cells after co-transfection of RNAi expression frame targeting hTERT and hTR (all P0.05A). Conclusion: the novel RNAi expression framework targeting hTERThTR can effectively inhibit telomerase activity of A549 cells. The new RNAi technique based on artificial mi RNA expression framework is expected to be a new tool for tumor gene therapy.
【作者單位】： 中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗系;
【基金】：中南大學(xué)研究生科研創(chuàng)新基金資助項目(2016zzts500);中南大學(xué)本科生自由探索基金資助項目(201610533579)
【分類號】：R730.5;R450

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本文編號：1628633