本文選題：SIRT1　切入點：Cyclophilin　出處：《南方醫(yī)科大學》2015年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：重癥休克是休克病程的最后階段,出現(xiàn)難以治療的微循環(huán)衰竭、頑固性低血壓和多器官功能衰竭(Multiple Organ Dysfunction Syndrome,MODS),是目前世界范圍內(nèi)致死致殘的主要疾患之一。因此,查明重癥休克的發(fā)生發(fā)展機制并尋求及時有效的治療手段具有重要意義。前期研究表明,線粒體結(jié)構(gòu)和功能障礙是急性休克晚期一個體內(nèi)普遍存在的現(xiàn)象,參與了重癥休克難治期(微循環(huán)衰竭期)的發(fā)生和發(fā)展,是導致血管低反應性和頑固性低血壓的重要機制之一。線粒體保護劑虎杖苷(polydatin,PD),白藜蘆醇(resveratrol,Res)和環(huán)孢霉素A(Cyclosporin A,CsA)可保護線粒體的結(jié)構(gòu)和功能從而改善血管反應性和平均動脈壓(mean blood pressure,MAP),延長動物生存時間。因此,防治血管平滑肌細胞線粒體功能不全將成為重癥休克治療的新靶點。線粒體通透性轉(zhuǎn)變孔(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)是線粒體內(nèi)膜上的一個多蛋白復合體,其分子結(jié)構(gòu)尚不明確。目前多數(shù)學者認為位于外膜上的電壓依賴性陰離子通道(voltage-dependent anion channel,VDAC),內(nèi)膜上腺嘌呤核苷轉(zhuǎn)位蛋白(adenine nucleotide translocase,ANT)和基質(zhì)中的親環(huán)素D(cyclophilinD,CypD)對mPTP的開放具有重要調(diào)控作用。在正常生理狀態(tài)下,mPTP處于瞬間開閉的動態(tài)平衡,氧化應激、胞內(nèi)鈣超載等因素可導致mPTP持續(xù)性開放,允許1.5kDa的小分子物質(zhì)和水分從線粒體透出進入胞質(zhì),而大分子的蛋白不能透出,進而引起線粒體基質(zhì)內(nèi)膠體滲透壓升高,吸引水分進入線粒體,帶來線粒體腫脹,嵴破壞等病理性損壞。因此,mPTP的持續(xù)開放是誘發(fā)線粒體功能障礙的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。親環(huán)素D是mPTP結(jié)構(gòu)中的一個重要調(diào)節(jié)靶點,近年來研究表明CypD的乙�；稍鰪娖渑c線粒體內(nèi)膜上腺嘌呤核苷轉(zhuǎn)位蛋白ANT的親和力,進而促進mPTP的開放。沉默信息調(diào)節(jié)因子2(Silent information regulator 2,Sir2)是首先在酵母中發(fā)現(xiàn)的依賴于煙酷胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotin Amide Adenine Dinucleotide,NAD)的第三類組蛋白去乙酰化酶(Histone Deacetylases,HDACs),在哺乳動物中其家族共有七位成員(SIRT1--SIRT7)。其中SIRT1是與哺乳動物同源性最高的家族成員,研究表明SIRT1激活可增加線粒體的生物合成和能量代謝,增強細胞對抗氧化應激反應的能力;SIRT3是線粒體上最主要的去乙�；�,通過調(diào)控各種線粒體蛋白的乙酰化修飾,進而影響線粒體的功能。目前普遍認為白藜蘆醇是SIRT1的激動劑,我們的前期研究證實白藜蘆醇可抑制重癥休克時腸系膜小動脈平滑肌細胞(arterial smooth muscle cells,ASMCs)mPTP的開放,保護線粒體的功能,有利于恢復血管反應性,但目前關(guān)于重癥休克時SIRT1對小動脈平滑肌細胞線粒體功能的影響,SIRT1和SIRT3在重癥休克時調(diào)控血管低反應性的作用及其機制尚未見報道。由此我們提出假設,重癥休克時,SIRT1活性變化通過調(diào)控血管平滑肌細胞線粒體蛋白CypD的乙�；M而帶來mPTP的開放,引起線粒體損傷和血管平滑肌反應性低下�；谝陨霞僭O,本研究聯(lián)合采用在體復制大鼠重癥失血性休克模型和體外小動脈平滑肌細胞缺氧復氧模型,探討SIRT1調(diào)控血管平滑肌細胞線粒體通透性轉(zhuǎn)變孔的信號通路及其在重癥失血性休克線粒體損傷中的作用和機制。本論文主要包括了以下三個部分研究內(nèi)容:第一部分:SIRT1介導重癥失血性休克大鼠血管、平滑肌細胞線粒體結(jié)構(gòu)損傷和功能障礙第二部分:SIRT1調(diào)控重癥休克血管平滑肌細胞線粒體通透性轉(zhuǎn)變孔開放的機制第三部分:SIRT1激動劑保護重癥休克血管平滑肌細胞線粒體和恢復血管反應性第一部分:SIRT1介導重癥失血性休克大鼠血管平滑肌細胞線粒體結(jié)構(gòu)損傷和功能障礙研究目的:在體復制重癥失血性休克大鼠模型,探討重癥休克過程中SIRT1和SIRT3的變化與血管平滑肌細胞線粒體結(jié)構(gòu)和功能障礙之間的相關(guān)性。研究方法:1.Wistar大鼠隨機分為6組:假手術(shù)組(0 min),休克(hemorrhagic shock,HS)60 min(HS60 min)組,休克 120 min(HS 120 min)組,回輸血 10 min(RI 10 min)組,回輸血60 min(RI 60 min)組和回輸血 120 min(RI120 min)組,復制重癥失血性休克模型,并在休克的不同時間點收集腸系膜動脈小血管,用于后續(xù)實驗。2.利用Western blot技術(shù)和去乙�；富钚詸z測試劑盒分別檢測重癥休克過程中血管組織SIRT1和SIRT3的表達和活性變化,采用細胞免疫熒光技術(shù)檢測重癥休克血管平滑肌細胞SIRT1和SIRT3的空間定位情況和熒光強度的變化,以及CypD的乙�；�。3.采用電子顯微鏡和流式細胞技術(shù)檢測重癥休克不同時間點血管平滑肌細胞線粒體超微結(jié)構(gòu)、氧化應激以及線粒體通透性轉(zhuǎn)變孔的開放情況,采用螢光素-螢光素酶生物發(fā)光法檢測平滑肌細胞內(nèi)ATP含量的變化,進而綜合分析重癥休克時SIRT1/3的活性和蛋白表達變化與線粒體的結(jié)構(gòu)和功能損傷之間的相關(guān)性。4.統(tǒng)計學分析:實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(χ±s)表示。采用SPSS13.0軟件進行分析,不同時間點各組之間的差異使用單因素方差分析(oneway ANOVA)后進行多重比較檢驗,方差齊時用LSD法,方差不齊時用Welch法校正,采用Dunnett'sT3進行兩兩比較。P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。研究結(jié)果:1.重癥休克過程中SIRT1和SIRT3的去乙�；富钚缘淖兓诓煌瑫r間點之間存在顯著性差異(F值分別為6.100和5.377,P值分別為0.001和0.002)。SIRT1和SIRT3的活性在休克60min開始出現(xiàn)顯著下降(P0.001)�；剌斞�120min,SIRT1和SIRT3的蛋白表達顯著降低,不同時間點之間存在顯著性差異(F值分別為3.846和2.848,P值分別為0.015和0.046)。與假手術(shù)組相比,SIRT1和SIRT3的蛋白表達分別下降了42.25±6.06%(P=0.002)和40.67±4.08%(P=0.002)。細胞免疫熒光實驗也證實了在回輸血后120 min SIRT1和SIRT3的蛋白表達下調(diào),CypD乙�；皆黾�,核內(nèi)SIRT1和線粒體SIRT3的分布明顯減少。2.重癥休克過程中,血管平滑肌細胞線粒體超微結(jié)構(gòu)的損傷從休克120 min開始出現(xiàn)進行性加重,Flameng評分顯示不同時間點之間存在顯著性差異(F=77.189,P0.001)。電鏡下觀察到假手術(shù)組的平滑肌細胞線粒體呈橢圓形或圓形,線粒體的嵴排列整齊,內(nèi)外膜結(jié)構(gòu)完整,基質(zhì)電子密度均勻。休克120 min開始出現(xiàn)線粒體的腫脹,嵴排列紊亂,回輸血后逐漸出現(xiàn)進行性加重的線粒體損傷,線粒體呈空泡狀,嵴斷裂輪廓不清,內(nèi)外膜結(jié)構(gòu)破損嚴重,大部分線粒體完整性喪失。3.重癥休克過程中,血管平滑肌細胞內(nèi)ROS水平從休克120 min開始出現(xiàn)顯著升高。不同時間點細胞內(nèi)ROS水平之間存在顯著性差異(F=34.013,P0.001),與假手術(shù)組相比,休克120 min血管平滑肌細胞內(nèi)的ROS增加了 48.12±10.13%(P=0.035),回輸血后 10minROS 增加了 88.04±18.67%(P=0.005),回輸血后60min比和120min分別增加了120.91±26.29%(P=0.001)和152.71±24.20%(P0.001)。4.重重重癥休克過程中,血管平滑肌細胞線粒體的鈣黃綠素平均熒光強度從回輸血后10 min開始顯著降低,提示通透性轉(zhuǎn)變孔開放,不同時間點之間差異具有顯著性(F=6.946,P0.001)。在回輸血后10min、60min和120min,鈣黃綠素的平均熒光強度較假手術(shù)組分別下降了 29.94±9.12%(P=0.001)、23.15±8.53%(P=0.011)和 45.29±7.16%(P0.001)。5.重癥休克過程中,不同時間點血管平滑肌細胞線粒體膜電位下降的細胞數(shù)之間存在顯著性差異(F=10.667,P0.001)。血管平滑肌細胞的線粒體膜電位從休克120 min開始出現(xiàn)顯著下降。在休克過程中,線粒體膜電位降低的細胞數(shù)與假手術(shù)組相比分別增加了 62.35±22.65%(休克 120 min,P=0.005)、88.34±45.64%(回輸血后 10min,P0.001)、66.84±28.14%(回輸血后 60min,P=0.003)和 133.56±15.89%(回輸血后 120min,P0.001)。6.重癥休克過程中,血管平滑肌細胞內(nèi)ATP含量從休克120 min開始出現(xiàn)顯著下降(P0.001),不同時間點細胞內(nèi)ATP含量之間存在顯著性差異(F=17.392,P0.001)。在休克過程中,細胞內(nèi)ATP含量與假手術(shù)組相比分別下降了 34.37±10.59%(休克 120min)、26.52±4.57%(回輸血后 10min)、31.47±2.39%(回輸血后600min)和49.30±5.36%(回輸血后120min),各組P值均0.001。第二部分:SIRT1調(diào)控重癥休克血管平滑肌細胞線粒體通透性轉(zhuǎn)變孔開放的機制研究目的:采用體外培養(yǎng)的人小動脈平滑肌細胞缺氧復氧模型模擬在體重癥失血性休克缺血再灌注損傷,探討SIRT1調(diào)控血管平滑肌細胞線粒體通透性轉(zhuǎn)變孔開放的機制。研究方法:1.復制體外培養(yǎng)的人小動脈平滑肌細胞缺氧復氧模型,采用Western blot,CoIP等技術(shù)檢測SIRT1/3在缺氧復氧時人小動脈平滑肌細胞中的表達以及CypD的乙�；�。2.采用慢病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人小動脈平滑肌細胞過表達SIRT1,明確SIRT1過表達對缺氧復氧時平滑肌細胞CypD乙�；降挠绊�。在此基礎上,采用siRNA干擾技術(shù)下調(diào)人小動脈平滑肌細胞SIRT3,以探討SIRT3在SIRT1調(diào)控平滑肌細胞CypD乙�；街械淖饔�。3.為進一步明確缺氧復氧時,過表達SIRT1對SIRT3活性的調(diào)控,采用siRNA干擾技術(shù)下調(diào)人小動脈平滑肌細胞過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α(Peroxisome proliferator-activated receptor-y coactivator 1α,PGC1α)的表達,同第一部分檢測過表達SIRT1對缺氧復氧處理后人小動脈平滑肌細胞SIRT3去乙�；富钚缘挠绊憽�4.統(tǒng)計學分析:實驗數(shù)據(jù)的處理和分析同第一部分。研究結(jié)果:1.重組SIRT1過表達慢病毒載體感染人小動脈平滑肌細胞后,熒光顯微鏡下檢測到GFP陽性的細胞數(shù)約占90%以上;Western blot結(jié)果進一步證實,不同處理組之間的差異具有顯著性(F=62.712,P0.001),慢病毒感染人小動脈平滑肌細胞后SIRT1的表達水平較對照組約增加了 4.8倍(P0.001)。2.SIRT3介導SIRT1對人小動脈平滑肌細胞線粒體蛋白CypD乙�；降恼{(diào)控。與對照組相比,缺氧復氧時CypD的乙�；斤@著增加;過表達SIRT1可降低CypD的乙�；�,而過表達SIRT1的同時下調(diào)SIRT3則可逆轉(zhuǎn)CypD乙酰化水平的下降,提示SIRT1通過調(diào)控SIRT3的活性進而影響CypD的乙�；健�3.PGC1α參與缺氧復氧時人小動脈平滑肌細胞SIRT1對SIRT3去乙�；富钚缘恼{(diào)控。各不同處理組之間的差異具有顯著性(F=13.154,P0.001)。缺氧復氧處理后SIRT3的去乙酰化酶活性較對照組下降了 46.34±7.50%(n=6,P0.001),而過表達SIRT1可部分恢復SIRT3活性,較缺氧復氧組約增加了36.11 ±9.40%(n=6,P0.001)。過表達SIRT1的同時下調(diào)PGC1α的表達可部分抑制SIRT3的活性,較單獨SIRT1過表達組下降了19.56±6.08%(n=6,P=0.023)。提示PGC1α參與了 SIRT1對SIRT3活性的調(diào)控。第三部分:SIRT1激活劑保護重癥休克血管平滑肌細胞線粒體和恢復血管反應性研究目的:復制重癥失血性休克模型,查明SIRT1激動劑SRT1720、白藜蘆醇和虎杖苷對重癥休克時血管平滑肌細胞線粒體結(jié)構(gòu)和功能,血管反應性和平均動脈壓以及休克大鼠存活時間的影響。研究方法:1.實驗分為8組:假手術(shù)組(sham),溶劑對照組(shock),白藜蘆醇治療組(Res),SIRT1激動劑SRT1720治療組(SRT),虎杖苷治療組(PD)以及在SIRT1抑制劑Ex527+白藜蘆醇組(Ex+Res),Ex527+SRT1720組(Ex+SRT)和Ex527+虎杖苷組(Ex+PD)。假手術(shù)組只進行麻醉和股動靜脈插管,同第一部分復制大鼠重癥失血性休克模型,在回輸血前10 min分別給與白藜蘆醇,SRT1720和虎杖苷,觀察休克過程中的平均動脈壓和血管反應性變化。在Ex527預處理組,放血前1h經(jīng)股靜脈給Ex527,之后同前給激動劑,觀察休克過程中平均動脈壓的變化。在回輸血后120 min完成觀察后拔管,局部消毒后縫合皮膚置于觀察籠內(nèi)記錄24-48 h內(nèi)不同處理組大鼠的生存時間。2.血管反應性的觀察參考實驗室已建立的脊斜肌微循環(huán)觀察標本的制備方法,股動靜脈插管后將大鼠置于微循環(huán)觀察臺上,持續(xù)滴加Kreb液維持脊斜肌的溫度、濕度和pH穩(wěn)定,采用不同濃度的去甲腎上腺素先后刺激小動脈,檢測并記錄引起血管收縮的最小濃度。同步觀察各處理組不同時間點的平均動脈壓和去甲腎上腺素閾值的變化。3.采用SIRT1/3去乙�；富钚詸z測試劑盒分別檢測不同處理組SIRT1和SIRT3的活性變化,同前第一部分分離回輸血后120 min大鼠腸系膜動脈平滑肌細胞,并檢測不同處理組血管平滑肌細胞線粒體超微結(jié)構(gòu)的改變,線粒體通透性轉(zhuǎn)變孔的開放,線粒體膜電位的去極化以及細胞內(nèi)ATP含量的變化。以進一步查明SIRT1激動劑SRT1720,白藜蘆醇和虎杖苷對重癥休克血管平滑肌SIRT1和SIRT3活性,平滑肌細胞線粒體的結(jié)構(gòu)和功能的影響。4.統(tǒng)計學分析:數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(χ±s)表示。采用SPSS13.0軟件進行分析,組間比較使用單因素方差分析(one way ANOVA)后,進行多重比較檢驗,方差齊時用LSD法;方差不齊時使用Welch法校正,采用Dunnett'sT3法進行兩兩比較。不同時間點各組之間平均動脈壓和去甲腎上腺素閾值采用重復測量的方差分析和多元方差分析。采用Kaplan-Meier法分析生存時間,并用Log-Rank方法進行檢驗后采用多重比較法進行兩兩比較。P0.05為差異有統(tǒng)計學意義,n代表實驗動物數(shù)。研究結(jié)果:1.SIRT 1激動劑和虎杖苷可顯著抑制重癥休克血管平滑肌SIRT1和SIRT3活性的下降。在重癥休克回輸血前給于不同的藥物治療后,大鼠動脈血管的SIRT1和SIRT3的活性顯著增加,Ex527預處理后則能顯著降低三種保護劑對SIRT1/3的激活作用,不同處理組之間差異具有顯著性(F值分別為25.142和16.669,P值均0.001)。與休克組相比,白藜蘆醇組SIRT1和SIRT3的活性分別增加了38.19± 2.84%和 47.70±5.78%。SRT1720 組 SIRT1 和 SIRT3 的活性分別增加了36.47±3.75%和33.63±4.80%�；⒄溶战MSIRT1和SIRT3的活性分別增加了33.13±2.97%和45.83±7.30%(P值均0.001)。2.SIRT1激動劑和虎杖苷治療后,血管平滑肌細胞的線粒體損傷與休克組相比顯著得到改善。各組線粒體結(jié)構(gòu)的Flameng評分之間存在顯著性差異(F=86.135,P0.001)。回輸血后120min,休克組線粒體的Flameng評分較假手術(shù)組顯著增加,約增加了2.46倍(P0.001)。虎杖苷治療組,SIRT1激動劑SRT1720和白藜蘆醇治療組的Flameng評分較休克組分別降低了64.30±3.72%,57.78±2.89%和54.18±8.46%(P值均0.001)。3.SIRT1激動劑和虎杖苷可顯著增加重癥休克時血管平滑肌細胞內(nèi)ATP的含量。Ex527則能顯著抑制激動劑對細胞內(nèi)ATP的增加,不同處理組之間存在顯著性差異(F=38.757,P0.001)。與休克組相比,SRT1720治療組血管平滑肌細胞內(nèi)的ATP含量增加了73.60±32.30%,白藜蘆醇組增加了64.91±22.74%,虎杖苷組增加了80.90±23.04%(P值均0.001)。SIRT1特異性抑制劑Ex527預處理后,可抑制上述保護劑對平滑肌細胞內(nèi)ATP含量的增加(P0.001)。其中Ex527+白藜蘆醇組較白藜蘆醇組下降了32.76±12.02%(P=0.019),Ex527+SRT1720組較SRT1720組下降了33.38±16.01%(P=0.036),Ex527+虎杖苷組較虎杖苷組下降42.86±7.88%(P0.001)。4.SIRT1激動劑和虎杖苷可顯著抑制重癥休克時血管平滑肌細胞線粒體通透性轉(zhuǎn)變孔的開放。SIRT1的抑制劑Ex527預處理后,各激動劑組鈣黃綠素的平均熒光強度顯著降低,不同處理組之間存在顯著性差異(F=25.318,P0.001)。在SIRT1激動劑SRT1720治療組和白藜蘆醇治療組,平滑肌細胞內(nèi)鈣黃綠素的平均熒光強度較休克時分別增加了54.00±20.44%和62.86±19.21%(P值均0.001)。Ex527預處理后細胞內(nèi)鈣黃綠素的熒光強度較單純激動劑治療組分別下降了40.83±8.46%和30.79±22.41%(P值均0.001)�；⒄溶罩委熃M線粒體鈣黃綠素的平均熒光強度較休克組增加了68.40±20.79%,Ex527預處理后細胞內(nèi)鈣黃綠素的熒光強度較虎杖苷組下降了30.40±5.39%(P值均0.001)。5.SIRT1激動劑和虎杖苷均能顯著抑制重癥休克時平滑肌細胞線粒體膜電位的下降,Ex527預處理后則能顯著抑制線粒體膜電位的恢復,不同處理組之間存在顯著性差異(F=28.759,P0.001)。與休克組相比,線粒體膜電位去極化的細胞在SRT1720,白藜蘆醇和虎杖苷組分別下降了62.13±5.73%、59.32±4.66%和68.45±5.73%(P值均0.001);而Ex527預處理后,線粒體去極化的細胞較單獨激動劑治療組分別增加了78.66±19.27%(P0.001)、50.55 ± 7.80%(P=0.002)和83.66 ±9.14%(P0.001)。6.SIRT1激動劑和虎杖苷顯著改善重癥休克頑固性低血壓和低血管反應性。SIRT1的抑制劑Ex527可抑制SIRT1激動劑對平均動脈壓和血管反應性的恢復。不同處理組之間存在顯著性差異(F值=154.320,P0.001);不同時間之間也存在顯著性差異(F值=713.811,P0.001),而且不同處理和時間之間存在交互效應(F值= 19.500,P0.001)�；剌斞�120 min,休克組腸系膜小動脈對去甲腎上腺素反應的閾值增加到失血前的22.7倍,平均動脈壓降低到39.50±12.43mmHg,顯著低于假手術(shù)組(P值分別為0.004和0.001)，在SIRT1激動劑SRT1720、白藜蘆醇和虎杖苷治療組,去甲腎上腺素閾值分別增加到失血前的5.68倍,8.72倍和3.60倍,但顯著低于休克組(P值分別為0.008,0.025和0.006);平均動脈壓分別增加到83.45±11.74mmHg(=0.002),71.40±6.30mmHg(P=0.012)和87.98±8.48mmHg(P=0.001),較休克組顯著改善。Ex527預處理1 h后造模,可顯著抑制各激動劑對重癥休克大鼠平均動脈壓的恢復。Ex527+SRT1720,Ex527+Res和Ex527+PD組的平均動脈壓分別降低到45.72±18.16mmHg(P=0.043),37.90±5.47mmHg(P0.001),53.13±9.05mmHg(P=0.001),顯著低于各激動劑組。7.SIRT1激動劑和虎杖苷延長了重癥休克大鼠的存活時間。不同處理組大鼠的生存時間之間存在顯著性差異(LogRank:χ2=69.925,P0.001)。休克組大鼠的中位生存時間是8h,24h死亡率是100%。在休克SIRT1激動劑SRT1720和白藜蘆醇治療組,大鼠的中位生存時間分別是14.0 h和13.5 h;在休克虎杖苷治療組,大鼠的中位生存時間是26h,較休克組顯著延長(P0.001),并優(yōu)于SRT1720組(P=0.003)和白藜蘆醇組(P=0.047);而在SIRT1抑制劑Ex527+白藜蘆醇組、Ex527+SRTI720組和Ex527+虎杖苷組,大鼠的中位生存時間分別減少為7.5 h,6.0 h和10.0 h,與激動劑組相比顯著縮短(Log Rank檢驗后進行多重比較P0.001),與休克組相比無顯著性差異。結(jié)論1.重癥休克過程中血管平滑肌SIRT1和SIRT3去乙�；富钚赃M行性下降,它將促進線粒體通透性轉(zhuǎn)變孔開放,進而引起線粒體結(jié)構(gòu)和功能漸進性損傷。2.體外培養(yǎng)的人小動脈平滑肌細胞缺氧復氧實驗證明缺氧復氧時SIRT1,SIRT3和PGC1α的蛋白表達顯著下調(diào),SIRT3的去乙�；富钚越档�,促使線粒體蛋白CypD過度乙�；Ｓ梅肿由飳W方法(慢病毒載體介導SIRT1過表達和/或siRNA干擾抑制SIRT1或PGC1α的表達)證實過表達SIRT1經(jīng)PGC1α調(diào)控缺氧復氧時SIRT3活性的下降和CypD的過度乙�；�,進一步證明了SIRT1/SIRT3和CypD乙酰化之間的相互關(guān)系,確定了SIRT1-PGC1α-SIRT3-CypD 通路。3.SIRT1激動劑SRT1720、白藜蘆醇和虎杖苷顯著抑制重癥休克時SIRT1去乙�；富钚缘南陆�,抑制血管平滑肌細胞線粒體通透性轉(zhuǎn)變孔的開放和線粒體膜電位的去極化,保護線粒體的結(jié)構(gòu)和功能,進而改善重癥休克時的血管反應性,升高平均動脈血壓,延長動物生存時間。提示重癥休克時SIRT1對血管平滑肌細胞線粒體通透性轉(zhuǎn)變孔的調(diào)控具有重要意義,為重癥失血性休克的治療提供了新的藥物作用靶點。尋找SIRT1的激動劑為防治重癥休克細胞損傷提出新思路�？傊�,本文通過在體和離體實驗證明,重癥休克時血管平滑肌SIRT1/3活性下降引起CypD乙�；皆黾�,CypD與線粒體內(nèi)膜蛋白ANT的親和力增強,促進線粒體通透性轉(zhuǎn)變孔開放,進而導致線粒體和細胞損傷;激活SIRT1可抑制重癥休克時血管平滑肌細胞線粒體通透性轉(zhuǎn)變孔的開放,保護線粒體的功能,改善血管反應性。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R459.7

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本文編號：1626764