本文關(guān)鍵詞： 內(nèi)皮細(xì)胞 EA.hy926細(xì)胞 鈣 嗜鉻粒蛋白A Chromofungin 腫瘤壞死因子-α　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：探討嗜鉻粒蛋白A (Chromogranin A, CGA)衍生多肽Chromofungin (CHR)抑制腫瘤壞死因子-α (TNF-α)誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞高滲透性的鈣相關(guān)信號(hào)機(jī)制。方法：以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系EA.hy926細(xì)胞為研究對(duì)象,CHR、 TNF-α為處理因素。1)利用過(guò)氧辣根氧化物(HRP)穿透Transwell小室吸光度(A)值表示EA.hy926細(xì)胞滲透性變化；2)利用細(xì)胞免疫熒光法、激光共聚焦顯微鏡觀察肌動(dòng)蛋白F-actin表達(dá)和分布；3)利用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)EA.hy926田胞內(nèi)鈣離子濃度([Ca2+]i)的變化。結(jié)果：1)CHR抑制TNF-a誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞滲透性增加。與對(duì)照組相比,TNF-a組明顯增加EA.hy926田胞滲透性(1.20±0.09 vs 1.77±0.20, P0.05); CHR (10nmol/L、100nmol/L和1000 nmol/L)抑制TNF-a誘導(dǎo)的EA.hy926細(xì)胞滲透性增加,其中CHR (10 nmol/L和100 nmol/L)顯著降低TNF-a誘導(dǎo)的EA.hy926細(xì)胞高滲透性(1.77±0.20 vs 1.32±0.13, P0.05; 1.77±0.20 vs 1.24±0.18, P0.05), CHR (1000 nmol/L)能夠降低TNF-a誘導(dǎo)的EA.hy926細(xì)胞高滲透性,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(1.77±0.20 vs 1.41±0.26, P0.1)。2) CHR抑制TNF-a誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞滲透性相關(guān)蛋白的表達(dá)變化和分布異常。與對(duì)照組相比,TNF-a引起F-actin排列紊亂,應(yīng)力纖維形成增多；CHR明顯改善TNF-a誘導(dǎo)的上述效應(yīng)。3)CHR抑制TNF-a誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞外鈣內(nèi)流。CHR (10 nmol/L、100 nmol/L和1000 nmol/L)作用于EA.hy926細(xì)胞時(shí)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度無(wú)明顯變化。TNF-a誘導(dǎo)EA.hy926細(xì)胞外Ca2+快速內(nèi)流,各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞內(nèi)Ca2+熒光強(qiáng)度Ft40、 Ft100與起始熒光值Ft30相比,具有顯著性差異(熒光強(qiáng)度分別為：41.50±0.55 vs 56.19±0.84, P0.01; 41.500±0.55 vs 53.46±0.93, P0.01), CHR (10 nmol/L、100 nmol/L和1000 nmol/L)能夠抑制TNF-α引起的Ca2+快速內(nèi)流,CHR (100 nmol/L)抑制效果最顯著。結(jié)論：CHR抑制TNF-α誘導(dǎo)的EA.hy926細(xì)胞滲透性增加,這一作用可能是通過(guò)阻止TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流來(lái)實(shí)現(xiàn)。
[Abstract]:Objective: to study Chromogranin A (Chromogranin A). CGA-derived peptide Chromofungin) inhibits tumor necrosis factor- 偽 (TNF- 偽). Methods: human umbilical vein endothelial cell line EA.hy926 cells were studied. CHR, TNF- 偽 as the processing factor. 1) HRP (peroxyhorseradish oxide) was used to penetrate the Transwell chamber absorbance (A) value to indicate the change of EA.hy926 cell permeability. 2) the expression and distribution of actin F-actin were observed by laser confocal microscopy and immunofluorescence assay. 3) the intracellular Ca ~ (2 +) concentration in EA.hy926 field was detected by laser confocal microscopy (. [Results: 1: 1 chr inhibited the increase of vascular endothelial cell permeability induced by TNF-a, compared with the control group. In TNF-a group, the cell permeability in EA.hy926 field was significantly increased by 1.20 鹵0.09 vs 1.77 鹵0.20, P 0.05; CHR 10nmol / L, 100nmol / L and 1000nmol / L inhibited the increase of EA.hy926 cell permeability induced by TNF-a. Among them, 10 nmol/L and 100 nmol / L CHR significantly decreased the high permeability of EA.hy926 cells induced by TNF-a (. 1.77 鹵0.20 vs 1.32 鹵0.13. P0.05; 1.77 鹵0.20 vs 1.24 鹵0.18, P 0.05). CHR (1000nmol / L) could reduce the high permeability of EA.hy926 cells induced by TNF-a. But the difference was not statistically significant (1.77 鹵0.20 vs 1.41 鹵0.26). CHR inhibited the expression and distribution of osmotic proteins in vascular endothelial cells induced by TNF-a, compared with the control group. TNF-a caused disorder of F-actin arrangement and increased formation of stress fibers. CHR significantly improved the above effects of TNF-a. 3CHR inhibited the extracellular calcium influx of vascular endothelial cells induced by TNF-a for 10 nmol/L. 100 nmol/L and 1000nmol / L). There was no significant change in intracellular Ca2 concentration in EA.hy926 cells. TNF-a induced rapid Ca2 influx out of EA.hy926 cells. The intracellular Ca2 fluorescence intensity Ft40 and Ft100 were compared with the initial fluorescence value (Ft30) at each time point. There was significant difference (fluorescence intensity was: 41.50 鹵0.55 vs 56.19 鹵0.84, P 0.01); 41.500 鹵0.55 vs 53.46 鹵0.93, P 0.01, CHR 10 nmol/L. 100 nmol/L and 1000nmol / L) could inhibit the rapid influx of Ca2 induced by TNF- 偽. Conclusion CHR can inhibit the increase of TNF- 偽 -induced permeability of EA.hy926 cells. This effect may be achieved by blocking the extracellular Ca2 influx induced by TNF- 偽.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R459.7

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