本文關鍵詞： 內(nèi)皮細胞 EA.hy926細胞 鈣 嗜鉻粒蛋白A Chromofungin 腫瘤壞死因子-α　出處：《重慶醫(yī)科大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的：探討嗜鉻粒蛋白A (Chromogranin A, CGA)衍生多肽Chromofungin (CHR)抑制腫瘤壞死因子-α (TNF-α)誘導血管內(nèi)皮細胞高滲透性的鈣相關信號機制。方法：以人臍靜脈內(nèi)皮細胞系EA.hy926細胞為研究對象,CHR、 TNF-α為處理因素。1)利用過氧辣根氧化物(HRP)穿透Transwell小室吸光度(A)值表示EA.hy926細胞滲透性變化；2)利用細胞免疫熒光法、激光共聚焦顯微鏡觀察肌動蛋白F-actin表達和分布；3)利用激光共聚焦顯微鏡檢測EA.hy926田胞內(nèi)鈣離子濃度([Ca2+]i)的變化。結果：1)CHR抑制TNF-a誘導的血管內(nèi)皮細胞滲透性增加。與對照組相比,TNF-a組明顯增加EA.hy926田胞滲透性(1.20±0.09 vs 1.77±0.20, P0.05); CHR (10nmol/L、100nmol/L和1000 nmol/L)抑制TNF-a誘導的EA.hy926細胞滲透性增加,其中CHR (10 nmol/L和100 nmol/L)顯著降低TNF-a誘導的EA.hy926細胞高滲透性(1.77±0.20 vs 1.32±0.13, P0.05; 1.77±0.20 vs 1.24±0.18, P0.05), CHR (1000 nmol/L)能夠降低TNF-a誘導的EA.hy926細胞高滲透性,但差異無統(tǒng)計學意義(1.77±0.20 vs 1.41±0.26, P0.1)。2) CHR抑制TNF-a誘導的血管內(nèi)皮細胞滲透性相關蛋白的表達變化和分布異常。與對照組相比,TNF-a引起F-actin排列紊亂,應力纖維形成增多；CHR明顯改善TNF-a誘導的上述效應。3)CHR抑制TNF-a誘導的血管內(nèi)皮細胞外鈣內(nèi)流。CHR (10 nmol/L、100 nmol/L和1000 nmol/L)作用于EA.hy926細胞時細胞內(nèi)Ca2+濃度無明顯變化。TNF-a誘導EA.hy926細胞外Ca2+快速內(nèi)流,各時間點細胞內(nèi)Ca2+熒光強度Ft40、 Ft100與起始熒光值Ft30相比,具有顯著性差異(熒光強度分別為：41.50±0.55 vs 56.19±0.84, P0.01; 41.500±0.55 vs 53.46±0.93, P0.01), CHR (10 nmol/L、100 nmol/L和1000 nmol/L)能夠抑制TNF-α引起的Ca2+快速內(nèi)流,CHR (100 nmol/L)抑制效果最顯著。結論：CHR抑制TNF-α誘導的EA.hy926細胞滲透性增加,這一作用可能是通過阻止TNF-α誘導的細胞外Ca2+內(nèi)流來實現(xiàn)。
[Abstract]:Objective: to study Chromogranin A (Chromogranin A). CGA-derived peptide Chromofungin) inhibits tumor necrosis factor- 偽 (TNF- 偽). Methods: human umbilical vein endothelial cell line EA.hy926 cells were studied. CHR, TNF- 偽 as the processing factor. 1) HRP (peroxyhorseradish oxide) was used to penetrate the Transwell chamber absorbance (A) value to indicate the change of EA.hy926 cell permeability. 2) the expression and distribution of actin F-actin were observed by laser confocal microscopy and immunofluorescence assay. 3) the intracellular Ca ~ (2 +) concentration in EA.hy926 field was detected by laser confocal microscopy (. [Results: 1: 1 chr inhibited the increase of vascular endothelial cell permeability induced by TNF-a, compared with the control group. In TNF-a group, the cell permeability in EA.hy926 field was significantly increased by 1.20 鹵0.09 vs 1.77 鹵0.20, P 0.05; CHR 10nmol / L, 100nmol / L and 1000nmol / L inhibited the increase of EA.hy926 cell permeability induced by TNF-a. Among them, 10 nmol/L and 100 nmol / L CHR significantly decreased the high permeability of EA.hy926 cells induced by TNF-a (. 1.77 鹵0.20 vs 1.32 鹵0.13. P0.05; 1.77 鹵0.20 vs 1.24 鹵0.18, P 0.05). CHR (1000nmol / L) could reduce the high permeability of EA.hy926 cells induced by TNF-a. But the difference was not statistically significant (1.77 鹵0.20 vs 1.41 鹵0.26). CHR inhibited the expression and distribution of osmotic proteins in vascular endothelial cells induced by TNF-a, compared with the control group. TNF-a caused disorder of F-actin arrangement and increased formation of stress fibers. CHR significantly improved the above effects of TNF-a. 3CHR inhibited the extracellular calcium influx of vascular endothelial cells induced by TNF-a for 10 nmol/L. 100 nmol/L and 1000nmol / L). There was no significant change in intracellular Ca2 concentration in EA.hy926 cells. TNF-a induced rapid Ca2 influx out of EA.hy926 cells. The intracellular Ca2 fluorescence intensity Ft40 and Ft100 were compared with the initial fluorescence value (Ft30) at each time point. There was significant difference (fluorescence intensity was: 41.50 鹵0.55 vs 56.19 鹵0.84, P 0.01); 41.500 鹵0.55 vs 53.46 鹵0.93, P 0.01, CHR 10 nmol/L. 100 nmol/L and 1000nmol / L) could inhibit the rapid influx of Ca2 induced by TNF- 偽. Conclusion CHR can inhibit the increase of TNF- 偽 -induced permeability of EA.hy926 cells. This effect may be achieved by blocking the extracellular Ca2 influx induced by TNF- 偽.
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R459.7

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