發(fā)布時間：2018-01-06 14:26

  本文關(guān)鍵詞：HTLV-1病毒對Jurkat細胞和HepG2細胞脂代謝的影響　出處：《新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：背景脂滴是細胞內(nèi)脂肪的儲存方式,也是一種復(fù)雜的多功能細胞器,參與了細胞的許多生物學(xué)過程。多種復(fù)雜的代謝性疾病,如肥胖、高血脂等都伴隨著細胞脂滴數(shù)量和功能的異常,表明脂滴直接或間接參與了相關(guān)疾病的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn),脂滴可以參與組織細胞的免疫應(yīng)答調(diào)節(jié),特別是參與淋巴細胞功能調(diào)節(jié),相關(guān)疾病的發(fā)生可能與脂滴誘導(dǎo)的淋巴細胞免疫調(diào)節(jié)功能紊亂有關(guān),但詳細機制還不清楚。成人T細胞白血病(adult T-cell leukemia, ATL)是與人類T細胞白血�、裥筒《�(human T-cell leukemia vires type-1, HTLV-1)感染直接相關(guān)的疾病。從HTLV-1感染到發(fā)病長達數(shù)十年之久,在如此漫長的潛伏期中,細胞的脂質(zhì)代謝有何變化?特別是HTLV-1對T細胞的脂類代謝有何影響?這些變化是否會引起細胞免疫應(yīng)答紊亂,進而誘發(fā)ATL,這些問題還不清楚。因此,深入研究]HTLV-1型病毒對細胞脂質(zhì)代謝的影響,具有十分重要意義。目的1.觀察細胞共培養(yǎng)之后的脂滴變化的特征,探討HTLV-1病毒感染后,Jurkat細胞和HepG2細胞脂代謝的影響。2.分析HTLV-1病毒感染對Jurkat細胞和HepG2細胞生存狀態(tài)和凋亡的影響。3.檢測HTLV-1病毒感染后與脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的表達變化,初步探討病毒感染影響細胞脂代謝的機制。方法1.細胞培養(yǎng)：(1)將秋水仙素處理后的攜帶有HTLV-1病毒的MT2細胞與人外周血白血病T淋巴細胞株Jurkat細胞共培養(yǎng),24h后分別用油HO (Oilred)染色,與未處理的對照組Jurkat細胞比較,觀察脂滴的變化。(2)同樣方法共培養(yǎng)人肝癌細胞株HepG2細胞,與未處理的HepG2細胞比較,觀察脂滴的變化。2.收集共同培養(yǎng)組和對照組細胞,分別提取RNA和蛋白質(zhì),用普通PCR/Real-timePCR和Western Blot檢測HTLV-1特征性蛋白Tax的表達變化,證明兩種細胞感染成功。3.收集共同培養(yǎng)組的細胞和對照組的細胞,尼羅紅(Nile red)染色后,流式分析細胞脂滴變化和凋亡情況。4.成功構(gòu)建Pcmv-Tax、PcDNA6-HIF1α重組質(zhì)粒后,電穿孔轉(zhuǎn)染到Jurkat細胞,Western Blot檢測基因的表達。5.統(tǒng)計學(xué)分析：用SPSS19.0軟件進行分析實驗數(shù)據(jù),實驗結(jié)果以均數(shù)±標準差(x±s)方式表示,P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.01為差異具有顯著性。結(jié)果1.顯微鏡觀察細胞形態(tài)Jurkat細胞與MT2細胞共同培養(yǎng)24h后,在倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn),MT2細胞被Jurkat細胞緊緊包裹,類似“花團”狀。而HepG2細胞與MT2細胞共同培養(yǎng)24h后,在倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn),兩種細胞只是散在分布。2.油紅O染色后顯微鏡觀察脂滴Jurkat細胞被HTLV-1病毒感染后脂滴明顯多于對照組；而HepG2細胞被HTLV-1病毒感染后脂滴與對照組無明顯區(qū)別。抽提脂滴半定量測定,HTLV-1病毒感染后Jurkat細胞脂滴數(shù)明顯多于對照組,而病毒感染后HepG2細胞脂滴數(shù)略多于對照組。3.尼羅紅染色后流式檢測結(jié)果 病毒感染的Jurkat細胞內(nèi)脂滴多于對照組,感染后HepG2細胞脂滴與對照組相比,無明顯變化。與對照組Jurkat細胞相比,感染HTLV-1病毒的Jurkat細胞凋亡數(shù)目增多。4.PCR和Western Blot檢測結(jié)果HTLV-1感染的.Jurkart細胞,Tax、HIF 1α、ADRP、 CAV1、 P65等基因表達上調(diào)。5.重組質(zhì)粒Pcmv-Tax、PcDNA6-HIF1α轉(zhuǎn)染結(jié)果成功將電轉(zhuǎn)Jurkat細胞后,Western Blot檢測結(jié)果顯示,Tax、HIF1α蛋白有所表達。結(jié)論1. HTLV-1病毒可以增加Jurkat細胞脂滴積累,同時伴有脂代謝相關(guān)基因表達的變化,特別是低氧誘導(dǎo)因子HIF1α表達明顯上調(diào),可能是HTLV-1導(dǎo)致Jurkat細胞脂積累的一個重要因素。2.HTLV-1病毒感染非淋巴HepG2細胞后,其脂滴變化不明顯。
[Abstract]:Objective To investigate the effect of HTLV - 1 virus on lipid metabolism of human T - cell leukemia virus ( HTLV - 1 ) . The results showed that the cells were infected with HTLV - 1 . The results showed that the cells were infected with HTLV - 1 after 24 hours . The results showed that the number of lipid droplets in the cells infected with HTLV - 1 was significantly higher than that in the control group . HTLV - 1 virus can increase the accumulation of lipid droplets and the expression of lipid metabolism - related genes , especially the expression of hypoxia - inducible factor HIF1偽 , which may be an important factor in the accumulation of lipid accumulation by HTLV - 1 .

【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R446.1

【參考文獻】

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1 劉雅青;周后德;;MicroRNA與脂肪代謝[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2012年05期

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本文編號：1388259