本文關(guān)鍵詞：人ASPP2重組腺病毒質(zhì)量控制研究　出處：《中國藥理學(xué)通報(bào)》2016年06期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 基因治療 腺病毒 ASPP 質(zhì)量控制 病毒比活 MTT

【摘要】：目的對人ASPP2重組腺病毒制劑進(jìn)行質(zhì)量分析,并針對其關(guān)鍵質(zhì)量特性建立質(zhì)控方法。方法采用PCR法對重組腺病毒的載體結(jié)構(gòu)特征基因E2B和目的基因ASPP2進(jìn)行擴(kuò)增,瓊脂糖電泳進(jìn)行分子量鑒定;采用UV-SDS法測定重組腺病毒的病毒顆粒數(shù);采用組織培養(yǎng)半數(shù)感染劑量法(TCID50)測定重組腺病毒的感染滴度;采用Western blot法對重組腺病毒感染靶細(xì)胞后目的蛋白ASPP2的表達(dá)情況進(jìn)行檢測;通過MTT實(shí)驗(yàn)觀察重組腺病毒對肝癌細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng);采用A549細(xì)胞進(jìn)行重組腺病毒的復(fù)制型病毒檢測。結(jié)果腺病毒載體E2B基因和目的基因ASPP2的鑒定結(jié)果與理論值相符;重組腺病毒的病毒顆粒數(shù)為每毫升5.6×10~(12)VP,病毒滴度為每毫升2×10~(11)IU,比活性為3.5%;病毒感染靶細(xì)胞24 h后可檢測出ASPP2蛋白的表達(dá);重組腺病毒對肝癌細(xì)胞具有生長抑制作用;復(fù)制型腺病毒(RCA)水平小于1 RCA/3.0×10~(10)VP,符合中國食品藥品監(jiān)督管理局(SFDA)的標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論建立了人ASPP2重組腺病毒的關(guān)鍵特征的質(zhì)量控制方法,為該重組腺病毒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立及相關(guān)應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective To analyze the quality of recombinant adenovirus vector and establish a quality control method for the key quality characteristics of recombinant adenovirus . The expression of recombinant adenovirus was determined by PCR method . The expression of recombinant adenovirus was determined by MTT assay . The recombinant adenovirus was used to measure the expression of recombinant adenovirus . The recombinant adenovirus had a growth inhibition effect on hepatocellular carcinoma cells . The recombinant adenovirus was less than 1 RCA / 3.0 脳 10 ~ ( 10 ) VP , which was consistent with the standard of China Food and Drug Administration ( SFDA ) . Conclusion The quality control method of recombinant adenovirus was established .

【作者單位】： 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院北京市肝病研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 81272266);國家自然科學(xué)基金國際(地區(qū))合作與交流項(xiàng)目(No 81361120401) 北京市衛(wèi)生系統(tǒng)高層次衛(wèi)生技術(shù)人才培養(yǎng)項(xiàng)目資助(No 2015-3-101) 北京市肝病研究所自主課題基金(No BJIH-01604)
【分類號】：R450
【正文快照】： 基因治療是指運(yùn)用DNA轉(zhuǎn)移來治療甚至預(yù)防人類疾患。將DNA送入細(xì)胞的方法雖然很多,但進(jìn)行基因治療時(shí),必須讓多數(shù)的細(xì)胞都獲得DNA,一般的DNA傳送方法都無法達(dá)到此目標(biāo)。由于病毒感染細(xì)胞的效率很高,因此適合做基因治療的載體,將預(yù)轉(zhuǎn)導(dǎo)的基因送入細(xì)胞內(nèi)。腺病毒載體是現(xiàn)在基因治

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1388043