本文關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌新型腸毒素I雙抗夾心-酶聯(lián)免疫檢測方法的建立　出處：《食品科學》2016年16期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的:建立簡便、靈敏檢測金黃色葡萄球菌腸毒素I(staphylococcal enterotoxin I,SEI)的雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附方法(double-antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)。方法:利用DAS-ELISA檢測程序確定單克隆抗體、抗血清、辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)標記的羊抗兔Ig G(Ig G/HRP)的最佳稀釋度,再通過檢測不同包被緩沖液、封閉時間、抗原包被時間、Ig G/HRP作用時間以及四甲基聯(lián)苯胺(3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine,TMB)顯色時間條件下的OD450 nm值對實驗條件進行優(yōu)化,最后用靈敏度、批內(nèi)變異、批間變異和加標回收率指標對方法進行評價。結(jié)果:抗SEI單克隆抗體的最佳稀釋質(zhì)量濃度為2.89 mg/L,抗SEI兔血清稀釋度1∶2 000,酶標二抗稀釋度1∶6 000;1×磷酸緩沖鹽溶液(p H 7.4)為最佳包被緩沖液;最佳封閉時間、抗原孵育時間、酶標二抗孵育時間和TMB顯色時間分別為60、90、30 min和15 min。該方法的回歸方程為y=0.040 9x+0.042 9,R2=0.993 3;靈敏度為0.5μg/L,精密度批內(nèi)變異低于10%,批間變異低于15%,除巴氏殺菌牛乳外,對生理鹽水、熟牦牛肉糜、大米飯和超高溫瞬時滅菌牛乳回收率達90%以上。結(jié)論:本研究建立了一種快速檢測SEI的雙抗夾心方法。
[Abstract]:......
【作者單位】： 西南民族大學生命科學與技術(shù)學院;
【基金】：國家自然科學基金面上項目(31371781) 四川省應(yīng)用基礎(chǔ)項目(2014JY0253) 教育部回國留學啟動項目 西南民族大學研究生創(chuàng)新項目(CX2015SZ096)
【分類號】：R446.6
【正文快照】： 金黃色葡萄球菌腸毒素(staphylococcal enterotoxins,SEs)主要是由血漿凝固酶和耐熱核酸酶陽性的葡萄球菌分泌的胞外毒素,其會導(dǎo)致中毒休克、食物中毒等疾病[1-4]。目前已發(fā)現(xiàn)的腸毒素有23種血清型,其中SEA~SEE稱為傳統(tǒng)腸毒素,SEG~SEl X為新型腸毒素[1,5-6]。人類對于各型SEs

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