本文關(guān)鍵詞：DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶活性檢測及其抑制劑篩選的電化學(xué)生物傳感方法研究　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： DNA甲基化 甲基化轉(zhuǎn)移酶活性 抑制劑篩選 DNA-AuNPs信號(hào)放大系統(tǒng) 電化學(xué)檢測

【摘要】：目的：DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)的一種重要表現(xiàn)形式,它是通過DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶催化甲基從供體上轉(zhuǎn)移到目標(biāo)核酸上這一反應(yīng)來完成的,甲基化轉(zhuǎn)移酶在這一過程中起到了非常重要的作用,它的量和活性直接影響DNA甲基化的水平。DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的異常表達(dá)已經(jīng)在多種腫瘤細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)。DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑在抗生素和抗癌治療方面均有應(yīng)用潛力。本研究的目的在于,利用納米材料的優(yōu)良性能,制備特異靈敏的電化學(xué)生物傳感器,用于DNA甲基化和DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶活性檢測,并對(duì)DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑的抑制效果進(jìn)行分析。方法：1.DNA S3-AuNPs生物復(fù)合物的制備：先制備穩(wěn)定的AuNPs,利用DNA S3與AuNPs之間形成的穩(wěn)固的Au-S鍵將兩者結(jié)合在一起,并用TEM和UV-vis方法進(jìn)行表征。2.電化學(xué)生物傳感器的制備：依次對(duì)預(yù)處理后的金電極修飾DNA S1、MCH、BSA、DNA S2、 DNA S3-AuNPs,并對(duì)每一步修飾結(jié)果用電化學(xué)方法進(jìn)行表征。3.優(yōu)化電化學(xué)生物傳感器的重要實(shí)驗(yàn)條件：甲基供體SAM的濃度、限制性核酸內(nèi)切酶Mbo I的濃度。4.考察電化學(xué)生物傳感器性能：可行性、特異性、線性范圍、最低檢測限、對(duì)抑制劑抑制效果的分析、精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性等。結(jié)果：1.對(duì)制備所得的AuNPs和DNA S3-AuNPs進(jìn)行形態(tài)學(xué)和光譜學(xué)分析,在TEM中可見AuNPs呈球狀,均勻分散,DNA S3-AuNPs與AuNPs幾乎無區(qū)別；在UV-vis曲線中可見DNA S3-AuNPs的吸收峰比AuNPs的吸收峰紅移了5 nm,表明DNA S3-AuNPs制備成功。2.對(duì)電化學(xué)生物傳感器的每一步修飾結(jié)果用電化學(xué)方法進(jìn)行表征,CV與EIS共同表明電極的每一步修飾都是成功可靠的。3.重要實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化：SAM最佳濃度為80μM, Mbo I最佳濃度為50 U/mL。4.電化學(xué)生物傳感器各項(xiàng)性能：可用于靈敏特異地檢測Dam MTase,并能對(duì)其抑制劑5-氟尿嘧啶進(jìn)行檢測分析；線性范圍是0.075-30 U/mL；最低檢測限是0.02 U/mL；精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性均良好。結(jié)論：本研究表明,該電化學(xué)生物傳感器可以用于對(duì)Dam MTase進(jìn)行特異靈敏的檢測分析,檢測線性范圍是0.075-30 U/mL,最低檢測限是0.02U/mL；還可以對(duì)Dam MTase抑制劑5-氟尿嘧啶進(jìn)行檢測分析。本方案具有一定的通用性,只要改變相應(yīng)的DNA序列,形成不同DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的識(shí)別作用位點(diǎn),就可以對(duì)其他DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶和其抑制劑進(jìn)行檢測分析。在與DNA甲基化相關(guān)的疾病診斷和藥物發(fā)展方面具有巨大的應(yīng)用潛力。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R440;TP212.3

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本文編號(hào)：1348039