發(fā)布時間：2020-08-12 10:40

【摘要】：目的:探究siRNA下調(diào)含SET結(jié)構(gòu)域(賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶)8(SETD8)基因表達(dá)對骨肉瘤MG-63細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲和遷移的影響及分子機(jī)制,并可能通過抑制Wnt/β-catenin信號通路調(diào)控骨肉瘤MG-63細(xì)胞的上述生物學(xué)行為。方法:(1)采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將特異性針對SETD8基因的siRNA轉(zhuǎn)入骨肉瘤MG-63細(xì)胞中,該組標(biāo)記為SETD8-siRNA組或?qū)嶒灲M;以構(gòu)建沉默SETD8基因表達(dá)的MG-63細(xì)胞系,將雜序siRNA轉(zhuǎn)入骨肉瘤MG-63細(xì)胞中,該組標(biāo)記為control-siRNA組或?qū)φ战M;未經(jīng)siRNA轉(zhuǎn)染的MG-63細(xì)胞,該組標(biāo)記為未轉(zhuǎn)染組或空白組。用CCK-8細(xì)胞毒性活性檢測法檢測上述三組骨肉瘤MG-63細(xì)胞的增殖情況,用平板克隆法檢測各組的MG-63細(xì)胞的克隆情況,用AO-EB熒光雙染色法檢測各組細(xì)胞凋亡情況。用實時熒光定量PCR法檢測MG-63細(xì)胞中增殖及凋亡相關(guān)分子β-catenin,cyclinD1,caspase-9及bcl-2的mRNA的表達(dá)水平,并用蛋白質(zhì)印跡法檢測MG-63細(xì)胞中上述分子的蛋白表達(dá)情況。(2)采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將特異性針對SETD8基因的siRNA轉(zhuǎn)入骨肉瘤MG-63細(xì)胞中,該組標(biāo)記為SETD8-siRNA組或?qū)嶒灲M;以構(gòu)建沉默SETD8基因表達(dá)的MG-63細(xì)胞系,將雜序siRNA轉(zhuǎn)入骨肉瘤MG-63細(xì)胞中,該組標(biāo)記為control-siRNA組或?qū)φ战M;未經(jīng)siRNA轉(zhuǎn)染的MG-63細(xì)胞,該組標(biāo)記為未轉(zhuǎn)染組或空白組。用劃痕愈合法檢測上述各組MG-63細(xì)胞的遷移能力,用Transwell小室法檢測三組中MG-63細(xì)胞的侵襲及遷移情況。用實時熒光定量PCR法檢測MG-63細(xì)胞中侵襲及遷移相關(guān)分子vimentin和mmp-3的mRNA的表達(dá)水平,并用蛋白質(zhì)印跡法檢測MG-63細(xì)胞中上述分子的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:(1)SETD8基因轉(zhuǎn)染入骨肉瘤MG-63細(xì)胞后,實驗組SETD8基因的mRNA及蛋白表達(dá)較對照組及未轉(zhuǎn)染組組均下調(diào)(P0.05)。CCK-8實驗結(jié)果顯示,SETD8-siRNA組較control-siRNA組及未轉(zhuǎn)染組,細(xì)胞的增殖能力明顯下降(P0.05)。平板克隆結(jié)果顯示,SETD8-siRNA組較control-siRNA組及未轉(zhuǎn)染組,細(xì)胞自我克隆能力顯著降低(P0.05)。AO-EB染色實驗結(jié)果顯示,SETD8-siRNA組較control-siRNA組及未轉(zhuǎn)染組來說,細(xì)胞凋亡情況明顯增多。此外,實時熒光定量PCR實驗顯示,在實驗組中,β-catenin,cyclinD1和bcl-2的mRNA的表達(dá)水平較對照組及空白組明顯下降(P值均0.05),而caspase-9mRNA的表達(dá)水平較對照組及空白組顯著上調(diào)(P0.05)。蛋白質(zhì)印跡法實驗結(jié)果顯示,SETD8-siRNA組中β-catenin,cyclinD1和bcl-2蛋白的相對表達(dá)水平較control-siRNA組及未轉(zhuǎn)染組明顯減小(P值均0.05),而caspase-9蛋白的表達(dá)水平顯著增加(P0.05)。(2)劃痕愈合實驗顯示,SETD8-siRNA組中的骨肉瘤細(xì)胞遷移能力較其余兩個組而言,明顯下降(P0.05)。Transwell小室法測得的結(jié)果顯示,實驗組中MG-63細(xì)胞的侵襲及遷移能力較對照組及空白組明顯降低(P0.05)。另外,經(jīng)實時熒光定量PCR實驗測得,在SETD8-siRNA組中,vimentin及mmp-3的mRNA的相對表達(dá)水平較control-siRNA組及未轉(zhuǎn)染組顯著下降(P值均0.05),對應(yīng)的vimentin及mmp-3蛋白,在實驗組中的表達(dá)量也遠(yuǎn)低于對照組及空白組(P值均0.05)。結(jié)論:(1)下調(diào)SETD8基因表達(dá)可抑制骨肉瘤MG-63細(xì)胞的增殖能力并誘導(dǎo)骨肉瘤MG-63細(xì)胞產(chǎn)生凋亡。(2)下調(diào)SETD8基因表達(dá)可抑制骨肉瘤MG-63細(xì)胞的侵襲及遷移能力。(3)SETD8基因可能通過Wnt/β-catenin信號通路調(diào)控骨肉瘤MG-63細(xì)胞的上述生物學(xué)行為。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R738.1
【圖文】：

Kohonen 神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)模型和 MEA-Elman 神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)模型進(jìn)行驗證，數(shù)據(jù)集，哪種模型的準(zhǔn)確率更高，從而判斷對于 KDD Cup-99 數(shù)據(jù)類的方法更優(yōu)還是分類的方法更優(yōu)。對遺傳算法降維的仿真結(jié)果具有代表性的三組降維后的數(shù)據(jù)集。1）降維后的第一組數(shù)據(jù)集：經(jīng)過算法的迭代，共篩選出 20 維輸入數(shù)字代表在原 KDD Cup-99 數(shù)據(jù)集中的數(shù)據(jù)維度，不出現(xiàn)的數(shù)字示遺傳算法經(jīng)過迭代比對，認(rèn)為這些維度的數(shù)據(jù)對于建模的影響不能導(dǎo)致模型的準(zhǔn)確率降低，因此將這些維度的數(shù)據(jù)排除出去。篩據(jù)集輸入自變量的編號如圖 4-4 所示：1 2 3 7 10 11 12 13 14 1521 24 25 26 27 28 32 35 37 38圖 4-4 降維后第一組數(shù)據(jù)集維度群適應(yīng)度進(jìn)化曲線如圖 4-5 所示：

圖 4-7 第二組數(shù)據(jù)集種群適應(yīng)度進(jìn)化曲線3）降維后的第三組數(shù)據(jù)集：經(jīng)過算法的迭代，共篩選出 24 維輸入的第三組數(shù)據(jù)集輸入自變量的編號如圖 4-8 所示： 2 7 9 10 11 13 15 16 17 23 24 26 29 30 32 34 35 371938圖 4-8 降維后第三組數(shù)據(jù)集維度群適應(yīng)度進(jìn)化曲線如圖 4-9 所示：

第三組數(shù)據(jù)集種群適應(yīng)度進(jìn)化曲線

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黃鎮(zhèn);李曉東;黃慶山;林建華;;骨肉瘤不良預(yù)后相關(guān)基因研究進(jìn)展[J];中華骨與關(guān)節(jié)外科雜志;2019年03期

2 丁萬軍;曾濤;戈偉;;骨肉瘤多藥耐藥性相關(guān)機(jī)制研究進(jìn)展[J];癌癥進(jìn)展;2019年08期

3 吳發(fā)帥;高楓;浦飛飛;邵增務(wù);;長鏈非編碼RNA在骨肉瘤中的研究進(jìn)展[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2017年06期

4 鄭穎;王剛陽;陳瑞玲;蔡鄭東;華瑩奇;;骨肉瘤多藥耐藥的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2017年33期

5 黃志鵬;宋科官;;骨肉瘤的診斷及治療進(jìn)展[J];國際骨科學(xué)雜志;2018年03期

6 丁聚賢;謝興文;許偉;李寧;李晶;蘇積亮;宋學(xué)文;;中醫(yī)藥在骨肉瘤放化療中的作用研究進(jìn)展[J];中醫(yī)正骨;2018年05期

7 徐斌武;李晨;;線粒體融合基因2抑制骨肉瘤及其干細(xì)胞增殖功能分析對其轉(zhuǎn)移機(jī)制的影響[J];吉林醫(yī)學(xué);2018年06期

8 張德綢;王廷帆;葛建華;;骨肉瘤最新治療及研究進(jìn)展[J];西南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2018年05期

9 麥威;孔令宇;宋春雨;邢志超;王果元;曲國蕃;;糖原合成激酶3β對骨肉瘤細(xì)胞遷移和侵襲的影響[J];實用腫瘤學(xué)雜志;2016年06期

10 董革輝;劉�；�;韓建華;夏本杰;黃俊瓊;;外泌體致敏樹突狀細(xì)胞體外抗骨肉瘤細(xì)胞生長作用[J];醫(yī)藥導(dǎo)報;2014年07期

相關(guān)會議論文 前10條

1 李紅;龍勉;;力學(xué)微擾對骨肉瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[A];第十次中國生物物理學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2006年

2 金先慶;羅小輯;;骨肉瘤細(xì)胞骨分化標(biāo)志檢測及臨床意義[A];中國抗癌協(xié)會第七屆全國小兒腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

3 趙津;;重組溶瘤腺病毒對骨肉瘤的抑制作用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第九次全國會員代表大會暨第十七次全國學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2017年

4 傅昭粵;姜東伯;鄭聯(lián)合;楊琨;;BAP31分子的改變對骨肉瘤腫瘤細(xì)胞行為學(xué)影響的研究[A];第十三屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會摘要匯編[C];2018年

5 黃永明;楊仁軒;蘇海濤;張嫻;許少健;徐逸生;;六味地黃湯對CIK細(xì)胞體外擴(kuò)增及抗骨肉瘤細(xì)胞的作用分析[A];第十八屆全國中西醫(yī)結(jié)合骨傷科學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2011年

6 楊迪生;解先寬;葉招明;陶惠民;;反義C-myc重組腺病毒的構(gòu)建及其抗骨肉瘤細(xì)胞作用的實驗研究[A];2004年浙江省骨科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

7 朱波;陳安民;郭風(fēng)勁;許凱;廖暉;;RNA干擾抑制ACP1對骨肉瘤細(xì)胞侵襲能力的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會疼痛學(xué)分會第八屆年會暨CASP成立二十周年論文集[C];2009年

8 Shuzhong Liu;Yipeng Wang;;MicroRNA-30a downregulation contributes to chemoresistance of osteosarcoma cells through activating Beclin-1-mediated autophagy[A];第九屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第十五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)大會論文集[C];2016年

9 杜利清;樊飛躍;;shRNA抑制Rad51蛋白表達(dá)對骨肉瘤細(xì)胞藥物敏感性和細(xì)胞周期的影響[A];2009醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十一屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

10 杜利清;孟愛民;王曉春;王月英;吳紅英;張恒;李德冠;路璐;樊飛躍;;shRNA抑制Rad51蛋白表達(dá)對骨肉瘤細(xì)胞藥物敏感性和細(xì)胞周期的影響[A];中國藥理學(xué)會第十次全國學(xué)術(shù)會議�？痆C];2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 程冬冬;基于定量蛋白組學(xué)方法篩選骨肉瘤相關(guān)蛋白[D];上海交通大學(xué);2017年

2 楊杰翔;miR-21介導(dǎo)的和厚樸酚在骨肉瘤細(xì)胞中的作用及機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

3 李博;二甲雙胍和唑來膦酸在骨肉瘤中的作用及相關(guān)研究[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué);2018年

4 喬蘇遲;長鏈非編碼RNA LINC00511在骨肉瘤中的功能及調(diào)控機(jī)制研究[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué);2018年

5 牛嘯博;MAPK途徑在脂多糖對骨肉瘤細(xì)胞增殖過程中的作用機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2017年

6 黃金承;雙PI3K/mTOR抑制劑NVP-BEZ235調(diào)節(jié)骨肉瘤細(xì)胞對順鉑敏感性機(jī)制的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

7 劉東寧;甲基化修飾miR-195促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞惡性表型及其分子機(jī)制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2017年

8 張振琴;低毒性靶向骨肉瘤的鉑配合物設(shè)計及生物活性研究[D];南京大學(xué);2018年

9 張飛;LncRNA-ANCR調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞生物學(xué)行為及相關(guān)機(jī)制的研究[D];武漢大學(xué);2017年

10 郭曉東;miR-335負(fù)性調(diào)節(jié)骨肉瘤干細(xì)胞生物學(xué)特性的研究及其作用機(jī)制[D];武漢大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 黃超;阿霉素與棕櫚酰化抑制劑溴代十六烷酸聯(lián)合應(yīng)用抑制骨肉瘤細(xì)胞的作用及機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2019年

2 張月明;基因表達(dá)譜芯片篩選骨肉瘤MG-63側(cè)群細(xì)胞差異基因及候選基因功能驗證[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2019年

3 耿培碩;miR-29促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞增殖和定位PTEN的遷移[D];鄭州大學(xué);2019年

4 姜龍;Piezo1在骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)及對其生物學(xué)功能的影響[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2018年

5 丁界先;Wnt抑制劑IWR-1對骨肉瘤細(xì)胞MG-63增殖和遷移的抑制作用[D];蘭州大學(xué);2019年

6 朱斌;SLC3A2對骨肉瘤增殖的影響及其作用機(jī)制的研究[D];上海交通大學(xué);2017年

7 王雅靈;PAK5在骨肉瘤侵襲轉(zhuǎn)移及耐藥相關(guān)機(jī)制中的研究[D];上海交通大學(xué);2017年

8 楊心愿;祥云灣海洋牧場人工牡蠣礁群落特征及其生態(tài)效應(yīng)[D];中國科學(xué)院大學(xué)(中國科學(xué)院海洋研究所);2019年

9 劉冬嵐;新型二氨基酯類化合物抗骨肉瘤的分子機(jī)制初步研究[D];華東師范大學(xué);2019年

10 余鳳強(qiáng);miR-885-5p在骨肉瘤中表達(dá)及作用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2018年

本文編號：2790428