口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus,FMDV）是家畜口蹄疫（foot-and-mouth disease,FMD）的病原,主要侵染牛、羊、豬等偶蹄動(dòng)物,引起傳染性極強(qiáng)的群發(fā)疫病。該病的特征癥狀是口、鼻、蹄和乳房等部位出現(xiàn)水皰,可見FMDV主要侵染宿主的上皮組織。近幾年發(fā)現(xiàn)的IFN-λ3是III型干擾素（interferon,IFN）的成員之一,主要產(chǎn)生靶向上皮組織的專一抗病毒效果。目前,對(duì)FMDV與豬源IFN-λ3的關(guān)系了解甚少,因此,豬源IFN-λ3的研究將為更加有效防控FMD提供新的思路。FMDV前導(dǎo)（leader）蛋白(L^pro)是拮抗宿主細(xì)胞天然免疫應(yīng)答的重要蛋白。L^pro能通過多種途徑調(diào)控IFN的表達(dá),推測(cè)也能調(diào)控IFN-λ3的產(chǎn)生。為了獲得抗L^pro抗體,本研究采用原核表達(dá)獲得了重組L^pro,利用其制備了高效價(jià)的兔抗血清,該血清能夠特異性識(shí)別FMDV感染過程中產(chǎn)生的L^pro。為了獲得豬源IFN-λ3蛋白,將豬源IFN-λ3基因定向克... 

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 FMDV的研究進(jìn)展
        1.1.1 FMDV簡(jiǎn)介
        1.1.2 FMDV L~(pro)的功能
    1.2 Ⅲ型 IFN研究進(jìn)展
        1.2.1 IFN簡(jiǎn)述
        1.2.2 Ⅲ型 IFN的表達(dá)調(diào)控
        1.2.3 Ⅲ型 IFN信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
        1.2.4 Ⅲ型 IFN的抗病毒作用
        1.2.5 病毒拮抗Ⅲ型 IFN產(chǎn)生的分子機(jī)制
    1.3 本實(shí)驗(yàn)的研究目的及意義
第二章 FMDV L~(pro)多克隆抗體的制備及鑒定
    2.1 材料
        2.1.1 質(zhì)粒、病毒與細(xì)胞
        2.1.2 主要材料和試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 L~(pro)原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
        2.2.2 重組L~(pro)的誘導(dǎo)表達(dá)及鑒定
        2.2.3 重組L~(pro)的純化
        2.2.4 重組L~(pro)的 Western blotting鑒定
        2.2.5 L~(pro)多克隆抗體的制備及鑒定
        2.2.6 L~(pro)多克隆抗體與FMDV的反應(yīng)
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 L~(pro)原核表達(dá)質(zhì)粒的鑒定
        2.3.2 重組L~(pro)的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.3.3 重組L~(pro)的純化及鑒定
        2.3.4 L~(pro)多克隆抗體的制備及鑒定
        2.3.5 L~(pro)多克隆抗體與FMDV的反應(yīng)性
    2.4 討論
第三章 豬源IFN-λ3蛋白的原核表達(dá)及純化
    3.1 材料
        3.1.1 質(zhì)粒與細(xì)胞
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 方法
        3.2.1 豬源IFN-λ3原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
        3.2.2 豬源IFN-λ3重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及鑒定
        3.2.3 豬源IFN-λ3重組蛋白的純化
        3.2.4 豬源IFN-λ3重組蛋白的復(fù)性及濃縮
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 豬源IFN-λ3原核表達(dá)質(zhì)粒的鑒定
        3.3.2 豬源IFN-λ3重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.3.3 豬源IFN-λ3重組蛋白的純化與鑒定
    3.4 討論
第四章 FMDV L~(pro)拮抗IFN-λ3抗病毒作用的分子機(jī)制研究
    4.1 材料
        4.1.1 質(zhì)粒、病毒與細(xì)胞
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器
    4.2 方法
        4.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.2.2 p65/RelA真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        4.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        4.2.5 Western blotting
        4.2.6 蝕斑形成試驗(yàn)
        4.2.7 間接免疫熒光試驗(yàn)
        4.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 p65/RelA真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及表達(dá)驗(yàn)證
        4.3.2 豬源IFN-λ3 抑制FMDV復(fù)制
        4.3.3 si RNA干擾豬源IFN-λ3 促進(jìn)FMDV復(fù)制
        4.3.4 FMDV感染抑制poly(I:C)誘導(dǎo)的IFN-λ3 表達(dá)
        4.3.5 FMDV L~(pro)抑制poly(I:C)誘導(dǎo)的IFN-λ3 表達(dá)
        4.3.6 L~(pro)抑制IFN-λ3 表達(dá)的能力與其切割功能相關(guān)
        4.3.7 p65/RelA通過上調(diào)IFN-λ3 表達(dá)抑制FMDV的復(fù)制
        4.3.8 L~(pro)降解內(nèi)源p65/RelA,切割外源p65/RelA
        4.3.9 L~(pro)與p65/RelA共定位,且切割功能不是共定位所必需的
        4.3.10 L~(pro)抑制p65/RelA誘導(dǎo)的IFN-λ3 表達(dá),該能力與其切割功能相關(guān)
    4.4 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3713739